参花妇康胶囊中丹参醇提取工艺研究

2014-05-04金向群

中国药业 2014年15期

周健，宋岐，金向群

(1．吉林辉南三和制药有限公司，吉林通化 135100； 2．吉林大学药学院，吉林长春 130021）

参花妇康胶囊是中药6类新药（临床批件号为2011L01664），由当归、丹参、芍药、川芎、香附、红花、苦参 7味中药提取而制成的胶囊剂。处方中丹参的化学成分为脂溶性和水溶性两部分，前者为丹参酮类，主要有丹参酮Ⅰ(tanshinoneⅠ)、丹参酮ⅡA(tanshinoneⅡA)、丹参酮ⅡB(tanshinoneⅡB)、隐丹参酮(crytotanshinone)、羟基丹参酮(hydroxytanshinone)、丹参羟基酯(methyltanshinonenate)、二氢丹参酮Ⅰ(dinydrotanshinoneⅠ)及异丹参酮Ⅰ、异丹参酮Ⅱ、异隐丹参酮、二氢异丹参酮Ⅰ，后者主要为酚酸类，包括丹参素、原儿茶醛和丹参酸甲、乙、丙。为了保证其疗效，丹参的提取应先采用醇提取，醇提取后的残渣再与其他药物进行煎煮。本试验中以干膏率及干膏中含丹参酮ⅡA的量为指标，优选丹参药材乙醇提取的最佳工艺。

1 仪器与试药

微压循环煎药机（北京东华医疗设备有限责任公司）；旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司）；万分之一电子分析天平（上海梅特勒－托利多仪器有限公司）；电热真空干燥箱（上海实验仪器厂有限公司），LC－10A型高效液相色谱仪(日本岛津公司)；KQ－250D型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。药材均购于吉林省药材公司；丹参酮ⅡA对照品（批号为 0766－9909，中国药品生物制品检定所）；甲醇、乙腈为色谱纯（Fisher Scientific）；水为二蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 丹参酮ⅡA含量测定

2．1．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent zorbax NH2柱（150 mm ×4．6 mm，5 μm），十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇－水(72∶28)；检测波长：270 nm；流速：1．0 mL ／min。理论板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于 2 000。

2．1．2 线性关系考察

精密称取丹参酮ⅡA对照品适量，加流动相制成每1 mL含0．033 mg的对照品溶液，分别精密吸取该对照品溶液 1，2，3，4，5 μL，注入高效液相色谱仪，依法测定。以进样量（X）为横坐标、峰面积值（Y）为纵坐标作图，得近似通过原点的直线。回归方程为 Y＝199 353．5 X＋10 709．17，r＝0．999 8（n＝6）。结果表明，丹参酮ⅡA进样量在 0．033～0．165 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2．1．3 供试品溶液制备

取干膏0．7 g，研细，精密称定，置50 mL容量瓶中，加入甲醇40 mL，超声处理1 h，取出，放至室温，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，滤液用微孔滤膜（0．45 μm）滤过，取续滤液，即得。

2．1．4 含量测定方法

精密吸取2．1．3项下方法制备的供试品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，按拟订色谱条件测定，每份样品测定2次，峰面积取2次平均值。

2．2 提取工艺考察

2．2．1 因素水平确定

为了寻求丹参药材乙醇提取的最佳工艺条件，拟以正交试验表 L9（34）进行试验，其中提取次数为因素A，乙醇用量为因素B，乙醇浓度为因素C，提取时间为因素D，因素水平表见表1。

表1 因素水平表

2．2．2 考察指标

由于丹参中主要有效成分为丹参酮ⅡA，故确定以出膏量、干膏中含丹参酮ⅡA的量为考察指标。干膏率（%）＝干膏质量／提取的药材量×100%，干膏中丹参酮ⅡA的量＝干膏重×百分含量(%)＝干膏重×（样品峰面积×对照品进样量×对照品质量浓度×定容体积）／(对照品峰面积×样品进样量×称样量)×100%。

2．2．3 正交试验与结果

准确称取5倍处方量药材9份，每份800 g，按表1进行提取，合并提取液，滤过，滤液浓缩并减压干燥（真空度为0．08 MPa，温度为 80℃），粉碎，称量，取一定量的干膏粉，按 2．1．3项下方法制备供试品溶液，按2．1．4项下方法进行含量测定，按正交试验软件设计表格，并进行试验。结果见表2和表3。可见，以干膏得量为指标进行方差分析所得的最佳条件是A2B2C2D3，以干膏中含丹参酮ⅡA的量为指标进行方差分析所得的最佳工艺条件也是A2B2C2D3，所得结果一致。由这两个结果可见，影响乙醇提取的主要因素是提取次数及溶剂量，其次是提取时间和乙醇浓度。因此，最终确定的最佳工艺是，乙醇浓度为70%，溶剂量为6倍，提取时间为3 h，提取次数为2次。