快速分离液相色谱法测定庆大霉素普鲁卡因维B12颗粒中维生素B12的含量

2014-05-02周星彤卢京光

药学研究 2014年1期

周星彤，裴琳，卢京光

(青岛市药品检验所，山东青岛 266071)

庆大霉素普鲁卡因维B12颗粒(Gentamicin Sulfate，Procaine Hydrochloride and Vitamin B12Granules)为复方制剂，其组分为每袋含硫酸庆大霉素20 mg;盐酸普鲁卡因0.1 g;维生素 B12(Vitamin B12，VB12)0.02 mg。所用辅料包括甘露醇、阿司帕坦、食用苹果香精、羧甲基纤维素钠和柠檬黄。其中VB12的含量极低，难于准确定量。目前，国内尚无检测庆大霉素普鲁卡因维生素B12颗粒中微量VB12的含量测定方法，国外药典也未见收藏。国内用于检测VB12的方法多采用微生物法［1］;不少文献报道使用HPLC 法测定微量的 VB12［2，3］，多由于灵敏度不够等原因，无法准确检测药品中的微量VB12;此外，近些年国内外已有文献报道使用电化学方法测定B12的含量［4～6］，但方法复杂，繁琐。

快速分离液相色谱(Rapid resolution liquid chromatography，RRLC)是近年来迅速发展的液相色谱新技术，其原理是通过增加液相系统耐高压性能，降低色谱柱固定相粒径、色谱柱内径及长度，从而提高色谱柱柱效，实现缩短分析时间，提高分离度和灵敏度的目的。本文建立了RRLC法用于测定庆大霉素普鲁卡因维生素B12颗粒中微量VB12的含量，方法简便、快速、准确，灵敏度高。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200快速分离液相色谱仪(配G1312B二元泵，G1314 VWD检测器，G1316B柱温箱，G1322A脱气机，500 μL扩展进样环及Chemstation色谱工作站)。

1.2 试药 VB12对照品(中国药品生物制品检定研究院，批号:10248－200802，HPLC含量95.5%);庆大霉素普鲁卡因维生素B12颗粒(河北华威德菲尔药业有限公司，每包含VB1220 μg，批号:070505、080520、090306);磷酸二氢钾为分析纯;甲醇为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适应性色谱柱:Agilent SB－ C18柱(3.0 mm ×150 mm，1.8 μm);流动相:0.005 mol·L－1磷酸二氢钾溶液(每1000 mL加磷酸0.5 mL)－甲醇(75∶25)，流速:0.5 mL·min－1。检测波长:361 nm，柱温:40 ℃，进样量:200 μL。

系统适用性:取空白溶液、线性关系考察项下浓度为200 ng· mL－1的对照品溶液及样品测定项下的供试品溶液同时按上述色谱条件进行分析，色谱图见图1。可以看出，供试品溶液色谱图中VB12峰与相邻峰的分离度良好，符合中国药典要求，样品中其他组分不干扰VB12的测定。

2.2 溶液配制对照储备液:精密称取VB12对照品20 mg至200 mL 量瓶中，加0.005 mol·L－1磷酸二氢钾溶液溶解并制成0.10 mg· mL－1的溶液作为储备液，该溶液可在4℃放置30 d。

样品溶液:精密称取供试品细粉适量(约相当于VB1220 μg)，置100 mL 量瓶中，加0.005 mol·L－1磷酸二氢钾溶液超声溶解并加至刻度，摇匀，经0.45 μm滤膜过滤后备用。

空白溶液:按照庆大霉素普鲁卡因维生素B12颗粒的处方比例制备不含VB12的空白样品，并按样品测定项下方法处理，作为空白溶液。

2.3 方法学考察线性关系考察:精密量取储备液适量，用0.005 mol·L－1磷酸二氢钾溶液分别稀释成 10、25、50、100、200、400、800、1000、1200、1400 ng· mL－1的系列对照品溶液，按上述色谱条件分析。以峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标绘制标准曲线，得到线性方程为:Y=0.481011X－1.6689，r=0.9998(n=9)，说明 VB12在10～1400 ng·mL－1浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系。