HPLC法测定异福胶囊的有关物质

张立光

（苏州卫生职业技术学院，江苏苏州215009）

HPLC法测定异福胶囊的有关物质

张立光

（苏州卫生职业技术学院，江苏苏州215009）

目的建立高效液相色谱法测定异福胶囊中有关物质的方法。方法色谱柱为Kromasil C18，柱温为40℃，流动相为甲醇－pH 7.0的磷酸盐缓冲液（0.01 mol·L－1磷酸二氢钾溶液，用0.1 mol·L－1氢氧化钠调pH）（60∶40），检测波长为254 nm，流速为1.0 mL·min－1，进样量为20μL。结果有关物质与主药色谱达到有效分离，1009011批样品中杂质I、醌式利福平、各杂质和分别为0、0.68%、3.2%。结论本方法准确、灵敏度更高，可用于该制剂的有关物质检查。

高效液相色谱法；异福胶囊；有关物质

世界卫生组织为遏制全球结核病的威胁，主张使用抗结核药物的固定剂量复合剂（FDCs）代替抗结核单药制剂治疗结核病。异福胶囊的质量标准为中华人民共和国药典标准，没有对有关物质进行控制，但FDCs的有关物质至关重要。笔者参考国际药典建立了高效液相色谱（HPLC）法测定异福胶囊的有关物质的方法。结果表明，本方法能准确地对有关物质进行定性分析。

1 仪器与试药

日立HPLC仪，包括L－2400紫外检测器，L－2130泵，T－2000L型色谱工作站。赛多利斯BS21S分析天平，BP121S分析天平；利福平对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130496－200702，含量：98.0%）；异烟肼对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100578－200401，含量：100.0%）；醌式利福平对照品（中国药品生物制品检定所，批号：130413－200303）；异福胶囊（自制，批号：1009011，1009021，1009031）；甲醇为色谱纯，水为纯化水。

2 方法与结果［1，2］

2.1 色谱条件 色谱柱：Kromasil C18（4.6 mm× 250 mm，5μm）；柱温：40℃；流动相：甲醇－pH 7.0的磷酸盐缓冲液（0.01 mol·L－1磷酸二氢钾溶液，用0.1 mol·L－1氢氧化钠调pH至7.0）（6∶4）；流速：1.0 mL·min－1；检测波长：254 nm。进样量：20μL。取空白辅料溶液、对照品溶液进样测定。结果表明，主峰与杂质峰能够达到有效分离，色谱图见图1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 空白溶液 精密称取不含利福平的空白样

品适量，同法制成空白溶液。

图1 利福平异烟肼对照品溶液

2.2.2 对照品溶液 取醌式利福平4mg，置25mL量瓶中，加异烟肼与利福平在酸中作用产物溶液（取利福平对照品4 mg和异烟肼对照品2 mg，加1 mol·L－1乙酸溶液25 mL使溶解，在室温下放置30 min），加醌式利福平4 mg，溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.3 供试品溶液与自身对照溶液 称取本品20粒，去胶囊壳，研细，称取相当于利福平40 mg的粉末迅速置于200 mL中，用混合溶液［甲醇：pH 7.0磷酸盐缓冲液（4∶6）］稀释至刻度，振摇，滤过，即得供试品溶液。再取供试品溶液5mL置于100 mL容量瓶中，用混合溶液［甲醇：pH 7.0磷酸盐缓冲液（4∶6）］稀释至刻度，得每mL含利福平10μg的溶液，即自身对照溶液。

2.2.4 杂质限度标准的制定 供试品溶液的色谱图中如检出与杂质Ⅰ峰和醌式利福平峰保留时间一致的色谱峰，其峰面积分别不得大于对照溶液中利福平主峰面积的1倍（5.0%）和0.8倍（4.0%），其他单个杂质峰面积不得大于对照溶液中利福平主峰面积的0.3倍（1.5%），除主峰外的其他峰面积和不得大于供试液中主峰面积的2倍（10%），小于供试液中主峰面积0.02倍（0.1%）的峰和相对于利福平保留时间小于0.23倍的峰忽略不计。

2.3 最低检测限试验 醌式利福平：取醌式利福平对照品0.003 0 g至100mL量瓶中，用混合溶液［甲醇：pH 7.0磷酸盐缓冲液（4∶6）］定容至刻度得到0.03 mg·mL－1的溶液，将此溶液逐级稀释后进行测定，按3∶1信噪比作检测限。结果表明，最低检测浓度为0.000 15 mg·mL－1。

2.4 破坏性试验 酸破坏溶液的制备：取胶囊内容物，研细，取细粉0.060 2 g至50 mL锥形瓶中，加入0.1 mol·L－1盐酸溶液2 mL，25℃恒温放置80 min后，加入0.1 mol·L－1氢氧化钠溶液2 mL中和，转移至100 mL量瓶，用混合溶剂定容至刻度，超声10 min，冷却至室温，摇匀。

碱破坏溶液的制备：取细粉0.060 3 g至50 mL锥形瓶中，加入0.1 mol·L－1氢氧化钠溶液2 mL，于烘箱中60℃恒温放置60 min后，加入0.1 mol·L－1盐酸溶液2 mL中和，转移至100 mL量瓶，用混合溶剂定容至刻度，超声10 min，冷却至室温，摇匀。

高温破坏溶液的制备：取细粉0.060 3 g，于烘箱100℃恒温放置12 h后，转移至100 mL量瓶，用混合溶剂定容至刻度，超声10 min，冷却至室温，摇匀。

氧化破坏溶液的制备：取细粉0.060 2 g至50 mL锥形瓶中，加入30%过氧化氢溶液1 mL，25℃恒温放置30 min后，转移至100 mL量瓶，用混合溶剂定容至刻度，超声10 min，冷却至室温，摇匀。

强光破坏溶液的制备：取细粉0.060 2 g至表面皿中，于光照试验箱中4 500 Lx光照条件下，25℃恒温放置10 d后，转移至100 mL量瓶，用混合溶剂定容至刻度，超声10 min，冷却至室温，摇匀。

取上述各破坏样品溶液，按拟定的有关物质检查方法检查，记录色谱图并计算。

结果表明各种破坏条件下各杂质峰与主峰能够很好地分离。

2.5 样品有关物质测定 取3批样品，按拟定的有关物质检查方法检查，结果见表1。

表1 3批样品的有关物质检查结果

2.6 稳定性试验 将样品在40℃相对湿度（RH）75%的条件下放置6个月，于1、2、3、6个月时分别取样，测定其有关物质，并与0个月时进行比较。结果表明，样品在40℃、RH＝75%条件下放置6个月稳定。

3 讨论

2010 年版《中国药典》收载的异福胶囊没有对有关物质进行控制［1］，笔者建立了HPLC法测定异福胶囊中有关物质。本方法操作简单准确，灵敏度高。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版（二部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：298－299.

［2］毕秀玲，钱小平，赵迎春，等.高效液相色谱法测定异福片中利福平含量［J］.中国药业，2013，22（2）：17－18.

Determination of related substances of Rifampicin and Isoniazid Capsules by HPLC

ZHANG Li-guang
（Suzhou Health College of Technology，Suzhou 215009，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of the related substances of Rifampicin and Isoniazid Capsules.MethodsThe determination was performed with a Kromasil C18column with the column temperature maintained at40℃，and the mobile phase was methanol－pH 7.0 buffer solution（0.01 mol·L－1Potassium dihydrogen phosphate，adjust pH with 0.1 mol·L－1Sodium hydroxide）（60∶40）with flow rate of 1.0 mL·min－1.The UV detection wavelength was set at254 nm and the sample size was 20μL.ResultsThe relevant substances of I were well separated from the chief agent，and the related substances in the sample 1009011 were 0，0.68%，3.2%，respectively.ConclusionThe proposed method was accurate and sensitive.It was applicable for the determination of the related substances of Rifampicin and Isoniazid Capsules.

HPLC；Rifampicin and Isoniazid Capsules；Related substances

R927.11

A

2095－5375（2014）01－0014－002

张立光，女，研究方向：药物合成和药物分析，E－mail：ivy0714＠126.com