HPLC法测定不同批号复方玄驹胶囊中淫羊藿苷含量
2014-05-02凌云
凌 云
(如东县人民医院 药剂科,江苏 如东 226400)
HPLC法测定不同批号复方玄驹胶囊中淫羊藿苷含量
凌 云
(如东县人民医院 药剂科,江苏 如东 226400)
目的:建立反相高效液相色谱法测定不同批次复方玄驹胶囊中淫羊藿苷含量的方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为BDS HYPERSIL C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.1%磷酸水溶液(58∶42),流速为1.0mL/min,检测波长为270nm,进样量为20μL,柱温为30℃。结果:淫羊藿苷进样0.4995~4.995μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系;精密度、稳定性、重复性试验的RSD均小于3%;平均加样收回率为98.2%,RSD为2.19%(n=6)。结论:所建立的方法简便、准确、重复性好,可用于复方玄驹胶囊的质量控制。
复方玄驹胶囊;高效液相色谱法;淫羊藿苷;含量测定
复方玄驹胶囊为施强药业集团生产的国家级保护药,主要由玄驹、淫羊藿、枸杞子和蛇床子等四味药材组成,具有温肾、壮阳、益精、祛风湿之功效[1]。临床主要用于治疗肾阳虚型阳痿、阳痿不举、举而不坚、少腹阴器发凉、精冷滑泄、神疲乏力、腰膝酸软、性欲低下、免疫调节和抗炎等[2-4]。淫羊藿苷含量反应该制剂质量是否达标,但目前相关测定方法文献未见报道,故笔者建立了复方玄驹胶囊中淫羊藿苷的HPLC测定方法,并测定了8个不同批次的制剂,以期为该制剂质量标准的建立提供参考依据。
1 材料
Waters2695高效液相色谱仪(美国Waters公司);Waters 2996 PAD检测器(美国Waters公司);Empower化学工作站;色谱柱:BDS HYPERSIL C18(250nm×4.6nm,5μm);十万分之一电子天平、百万分之一电子天平(METTLER TOLEDOAT,瑞士);BUCHI R-200旋转蒸发仪(步琪公司,瑞士);KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器公司,昆山)。
复方玄驹胶囊(施强药业集团有限公司,批号见表1);淫羊藿苷对照品(中国食品药品检定研究院,批号:110737-200415);甲醇:色谱纯(江苏汉邦科技有限公司);重蒸馏水(Milli-Q纯水器);磷酸:分析纯(国药集团有限公司)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:BDS HYPERSIL C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.1%磷酸水溶液(58∶42);流速:1.0mL/min;柱温:30℃;紫外检测波长270nm;进样量为20μL。
2.2 溶液制备
2.2.1 供试品溶液制备 复方玄驹胶囊取内容物研细,精密称定0.3g,置具塞锥形瓶中,精密加入乙醇25mL,称定重量,置水浴上加热回流提取30min,放冷,再称定重量,用乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液10mL,置蒸发皿中,蒸干,残渣加水20mL使溶解,转移至分液漏斗中,用乙醚振摇提取3次,每次20mL,弃去乙醚液,水层用醋酸乙酯-水饱和正丁醇(2∶1)的混合溶液振摇提取5次(20mL、20mL、15mL、15mL、15mL)合并提取液,蒸干,残渣加甲醇适量使溶解,并定量转移至50mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45μm)过滤,取续滤液,即得。
2.2.2 对照品溶液制备 精密称取在105℃干燥至恒重的淫羊藿苷对照品8mg,置50mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,精密量取2mL,置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,即得(每1mL中含淫羊藿苷32μg)对照品储备液。
2.3 系统适用性试验
取“2.2”项下对照品溶液、供试品溶液适量,按照“2.1”项下色谱条件进样,记录色谱,详见图1。在该色谱条件下,淫羊藿苷的保留时间为34.171min。
A.对照品;B.供试品
2.4 线性关系考察
精密量取“2.2.2”项下淫羊藿苷对照品溶液0.04995、0.0999、0.1998、0.2997、0.3996、0.4995 mg·mL-1各10μL注入液相色谱仪,按照“2.1”项下色谱条件进样测定,以进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,求得淫羊藿苷回归方程为:Y=2×106X-45228,r=0.9995。表明淫羊藿苷在0.4995~4.995μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
于彤在今年体重增加了20公斤,作为一名产后妈妈,她开始寻求各种能够迅速瘦身的方式。“生酮饮食”,引起了她的注意。理论上,生酮饮食是高脂肪、低碳水化合物的配方饮食。上世纪20年代,美国医生通过禁食但不禁水的方法治疗癫痫患儿,有不少患儿长时间没有再发作。这被认为模拟了饥饿的代谢效果而被用于临床医疗。这样的饮食方式后来被移植到减肥领域。只吃瘦肉和蔬菜,不吃含有碳水化合物的主食,以此产生大量酮体,迫使身体燃烧脂肪。“不用吃药,吃的都是很正常的食物。”于彤说。
精密吸取淫羊藿苷对照品溶液(0.1112mg·mL-1)适量,按“2.1”项下色谱条件连续进样6次,每次10μL,结果显示淫羊藿苷的峰面积RSD为2.4%,表明仪器精密度良好。
2.6 稳定性试验
取“2.2.1”项下同一批号供试品溶液,分别于0、4、8、12、16、24h,按“2.1”项色谱条件进样,依法进行测定。结果显示淫羊藿苷RSD为1.96%,表明供试品在24 h内质量基本稳定。
2.7 重复性试验
取同批号样品6份,按“2.2.1”项下方法制备供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件进样测定,结果显示淫羊藿苷RSD为2.49%,表明本方法重复性良好。
2.8 加样回收率试验
精密称取已知含量的复方玄驹胶囊,共6份,约0.6g,分别加入对应含量淫羊藿苷对照品,按供试品制备方法制得供试品溶液,注入液相色谱仪,计算回收率,淫羊藿苷平均回收率为98.2%,RSD为2.19%。
2.9 样品含量测定
表1 样品含量测定结果 (n=8)
3 讨论
3.1 提取方法选择
本试验分别比较了索氏提取、水浴加热回流提取、超声提取三种不同提取方法。同等条件下,通过HPLC图谱验证发现水浴加热回流提取效果较好。同时本实验考察了30%乙醇、50%乙醇、乙醇提取,经HPLC检测,表明用乙醇提取效果较好;因此本实验选择乙醇作为提取溶剂,进一步对不同提取时间进行考察,通过HPLC验证发现乙醇加热回流30min效果最好。
3.2 流动相选择
本试验分别考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%磷酸水、乙腈-0.1%磷酸水4个溶剂系统,结果发现甲醇-0.1%磷酸水作为流动相分离效果较好。
3.3 色谱柱选择
本试验中,比较了两种不同的色谱柱,分别为SYMEMETRYTM-C18(150mm × 3.9mm, 5μm)和BDS HYPERSIL-C18(250nm×4.6nm,5μm),结果表明,前者不能使酚酸类成分与样品中其他成分达到理想分离效果,后者分离效果较好。
3.4 质量控制建议
通过本次试验发现,淫羊藿在本制剂中占有重要的地位,通过测定淫羊藿苷成分来控制其制剂质量具有一定的代表性,但同时随着制剂体系评价的逐渐完善,还需增加某些特征性的成分作为评价该制剂质量控制的依据。
[1] 王欣,苏晶石,杨可为,等.复方玄驹胶囊治疗前列腺炎疗效观察[J].中华医院感染学杂志,2011,21(10):2045-2047.
[2] 黄旭元,翁一鸣,陈斌,等.复方玄驹胶囊治疗脾肾阳虚少、弱精子症的临床研究[J].中国男科学杂志,2010,24(4):54-57.
[3] 贾伟,薛京,王永新,等.复方玄驹胶囊免疫调节和抗炎作用的研究[J].中草药,2003,34(2):154-156.
[4] 张讯,梁季鸿,梁世坤,等.复方玄驹胶囊联合他莫西芬治疗特发性少精子症的临床研究[J].中华男科学杂志,2012,18(7):661-664.
(责任编辑:魏 晓)
Determination of Icariin in Fufang Xuanju Jiaonang by HPLC
Ling Yun
(Department of Pharmacy, Rudong Country People’s Hospital,Rutong 226400, China )
Objective:To develop a method for the content determination of Icariin in Fufang Xuanju Jiaonang. Methods:HPLC method was adopted. The determination was performed on BDS HYPERSIL-C18column with mobile phase consisted of methanol-0.1% phosphoric acid-water (58∶42), at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 270 nm, and the sample size was 20μL. The column temperature was 30℃.Results:The linear range were 0.4995~4.995μg for Icariin, respectively RSD of precision, stability, and reproducibility test were lower than 3%. The average recoveries were 98.2% (RSD=2.19%, n=6).Conclusion:The method is simple, accurate, reproducible and suitable for the content determination of Icariin in Fufang Xuanju Jiaonang.
Fufang Xuanju Jiaonang;HPLC;Icariin ;Content Determination
2014-06-19
凌云(1970-),女,江苏省如东县人民医院药师,研究方向为医院药剂学。
R284
A
1673-2197(2014)19-0023-02