臭菘提取物对癌细胞的体外抑制作用研究

摘要：为了研究臭菘提取物对癌细胞的体外抑制活性，本文采用MTT法研究臭菘不同极性提取物，针对结肠癌细胞抑制作用，结果显示其提取物，均不同程度抑制Caco-2活性，且氯仿萃取物在实验中表现出较强的细胞抑制活性。

关键词：臭菘；提取物；癌细胞；抑制活性

中图分类号： R979.1 文献标识码： A 文章编号： 1674-0432（2014）-06-21-1

臭菘[Symplocarpus foetidus （Linn.） Salisb.]别名又叫黑瞎子白菜，是天南星科臭菘属草本植物[1]。作为中草药，其具有解表止咳、化痰平喘等功效 [2]。许多研究表明，天南星科植物大部分具有抗癌作用[3]。本实验研究臭菘抑制癌细胞活性，为对臭菘临床等实验研究，提供有利依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料、设备与试剂

1.1.1 实验材料 一是提取臭菘不同极性溶剂的提取物；二是人结肠癌细胞株Caco-2（吉林大学动植物实验室提供）。

1.1.2 试剂与仪器 SW-CJ-2D型超净工作台 苏州技术有限公司；酶标仪 SANRSE1006003938 SECUN公司；406828型细胞培养箱 SETECAT公司；Millex33mm 无菌高温过滤器MILLIPORE；96孔板 KOATSR公司；XB-T-25血球计数 上海通用仪器厂等。

环磷酰胺 山西药业有限公司；胰蛋白酶 ISMA公司；MTT M-2128 SIMA公司；DMEM培养液 BICO公司；胎牛血清等。

1.1.3 配置培养基和溶液 MTT溶液：准确称量MTT1克，然后加入200毫升的PBS缓冲溶液，将其搅拌溶解除菌过滤，得到浓度为0.5毫克/毫升MTT溶液，置于4℃冰箱中。

PBS缓冲溶液：准确称量0.2克 KCl、8克 NaCl、0.2克 K2PO4、1.15克 Na2PO4，倒入超纯水1000毫升， pH值调节至7.4，高压灭菌之后常温保存。

胰酶细胞消化液：准确称量2.5克胰蛋白酶、0.2克 Na2EDTA，除菌溶解于1000毫升PBS溶液中，放入-20℃冰箱中。

DMEM培养液：称取DMEM粉末溶于700毫升超纯水，溶解后进行除菌，再加入10%的胎牛血清和已经配好的1%谷氨酰胺溶液。

1.2 受试的药品配制

称取臭菘各极性萃取膏25.6毫克，再加入适量DMSO，溶解后搅拌均匀，加入配制好浓度为0.08、0.32和1.28毫克/毫升超级水。环磷酰胺为阳性对照组药物，同上述配置四个浓度的梯度。

1.3 实验方法[4]

1.3.1 复苏细胞

1.3.2 细胞的传代培养 首先，取出达到一定生长密度的Caco-2后，去除培养液；然后用PBS缓冲溶液对其反复冲洗3次，再用胰酶细胞消化液对其反复冲洗2次后，将液体再次倒掉，这时再加入几滴胰酶消化液，进行消化1～2分，放在倒置的显微镜下观察后，当看到细胞呈现圆粒状的时候，表示已消化完毕；再取出胰酶消化液，再次加入细胞培养液，待细胞充分均匀的分散后进行分装，然后放入到CO2培养箱内，以上操作都是在严格的无菌条件下进行的。

1.4 测定对Caco-2细胞给药影响

实验组有5个以上的平行，然后分别设定24小时、48小时、72小时进行培养，培养完成弃上层清液，再洗3次后弃除药液。再加入0.5毫克/毫升MTT200 升，常温培养4小时，弃除上清液并洗脱3次，再次加DMSO200升溶解MTT还原成甲臜沉淀，最后用波长492纳米来测定吸光度（A）值，并计算癌细胞的抑制率。

A：给药剂组的吸光值 P：肿瘤细胞的抑制率 ACK：对照组的吸光值

2 结果与分析

比较试验结果可知，对照组明显高于给药组（吸光度A值），表明给药组对Caco-2细胞有明显抑制，并随着时间的延长和浓度的增大，对其抑制趋势越强。同一浓度下氯仿的提取物，对Caco-2细胞抑制活性明显高于其他极性提取物组和对照组。

3 结语

李艳凤等人研究发现白附子乙酸乙酯萃取物对胃癌细胞具有增殖的抑制活性；李桂玲等研究发现掌叶半夏提取物使子宫癌细胞Bcl-2和PCNA蛋白表达量递减；本实验采用MTT法，研究臭菘不同极性提取物对Caco-2细胞的抑制作用，结果显示，各极性提取物均有不同程度对癌细胞的抑制活性，同时随着浓度增加，抑制率也呈上升趋势，初步表明臭菘中含有细胞毒性成分，在实验中氯仿萃取物表现出较强的抑制癌细胞活性。

参考文献

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第十三卷第二分册）[M].北京：科学出版社，1979，（9）：1-12.

[2] 伊廷双，李德铢.天南星科分类系统的沿革[J].武汉植物学研究，2002，20（1）：49-61.

[3] 乔恒，隋希英.吉林省重点保护野生植物名录[J].吉林林业科技，2009，38（2）：24-41.

[4] 程鑫颖，包海鹰，丁燕.瓦宁木层孔菌中5个化合物的抗肿瘤活性筛选[J].菌物研究，2011，9（3）：175-180.

作者简介：魏丽，吉林农业大学中药材学院，研究生，研究方向：植物药。

网络出版时间：2014-4-8 13：17：49

网络出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/22.1186.S.20140408.1317.002.html

摘要：为了研究臭菘提取物对癌细胞的体外抑制活性，本文采用MTT法研究臭菘不同极性提取物，针对结肠癌细胞抑制作用，结果显示其提取物，均不同程度抑制Caco-2活性，且氯仿萃取物在实验中表现出较强的细胞抑制活性。

关键词：臭菘；提取物；癌细胞；抑制活性

中图分类号： R979.1 文献标识码： A 文章编号： 1674-0432（2014）-06-21-1

臭菘[Symplocarpus foetidus （Linn.） Salisb.]别名又叫黑瞎子白菜，是天南星科臭菘属草本植物[1]。作为中草药，其具有解表止咳、化痰平喘等功效 [2]。许多研究表明，天南星科植物大部分具有抗癌作用[3]。本实验研究臭菘抑制癌细胞活性，为对臭菘临床等实验研究，提供有利依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料、设备与试剂

1.1.1 实验材料 一是提取臭菘不同极性溶剂的提取物；二是人结肠癌细胞株Caco-2（吉林大学动植物实验室提供）。

1.1.2 试剂与仪器 SW-CJ-2D型超净工作台 苏州技术有限公司；酶标仪 SANRSE1006003938 SECUN公司；406828型细胞培养箱 SETECAT公司；Millex33mm 无菌高温过滤器MILLIPORE；96孔板 KOATSR公司；XB-T-25血球计数 上海通用仪器厂等。

环磷酰胺 山西药业有限公司；胰蛋白酶 ISMA公司；MTT M-2128 SIMA公司；DMEM培养液 BICO公司；胎牛血清等。

1.1.3 配置培养基和溶液 MTT溶液：准确称量MTT1克，然后加入200毫升的PBS缓冲溶液，将其搅拌溶解除菌过滤，得到浓度为0.5毫克/毫升MTT溶液，置于4℃冰箱中。

PBS缓冲溶液：准确称量0.2克 KCl、8克 NaCl、0.2克 K2PO4、1.15克 Na2PO4，倒入超纯水1000毫升， pH值调节至7.4，高压灭菌之后常温保存。

胰酶细胞消化液：准确称量2.5克胰蛋白酶、0.2克 Na2EDTA，除菌溶解于1000毫升PBS溶液中，放入-20℃冰箱中。

DMEM培养液：称取DMEM粉末溶于700毫升超纯水，溶解后进行除菌，再加入10%的胎牛血清和已经配好的1%谷氨酰胺溶液。

1.2 受试的药品配制

称取臭菘各极性萃取膏25.6毫克，再加入适量DMSO，溶解后搅拌均匀，加入配制好浓度为0.08、0.32和1.28毫克/毫升超级水。环磷酰胺为阳性对照组药物，同上述配置四个浓度的梯度。

1.3 实验方法[4]

1.3.1 复苏细胞

1.3.2 细胞的传代培养 首先，取出达到一定生长密度的Caco-2后，去除培养液；然后用PBS缓冲溶液对其反复冲洗3次，再用胰酶细胞消化液对其反复冲洗2次后，将液体再次倒掉，这时再加入几滴胰酶消化液，进行消化1～2分，放在倒置的显微镜下观察后，当看到细胞呈现圆粒状的时候，表示已消化完毕；再取出胰酶消化液，再次加入细胞培养液，待细胞充分均匀的分散后进行分装，然后放入到CO2培养箱内，以上操作都是在严格的无菌条件下进行的。

1.4 测定对Caco-2细胞给药影响

实验组有5个以上的平行，然后分别设定24小时、48小时、72小时进行培养，培养完成弃上层清液，再洗3次后弃除药液。再加入0.5毫克/毫升MTT200 升，常温培养4小时，弃除上清液并洗脱3次，再次加DMSO200升溶解MTT还原成甲臜沉淀，最后用波长492纳米来测定吸光度（A）值，并计算癌细胞的抑制率。

A：给药剂组的吸光值 P：肿瘤细胞的抑制率 ACK：对照组的吸光值

2 结果与分析

比较试验结果可知，对照组明显高于给药组（吸光度A值），表明给药组对Caco-2细胞有明显抑制，并随着时间的延长和浓度的增大，对其抑制趋势越强。同一浓度下氯仿的提取物，对Caco-2细胞抑制活性明显高于其他极性提取物组和对照组。

3 结语

李艳凤等人研究发现白附子乙酸乙酯萃取物对胃癌细胞具有增殖的抑制活性；李桂玲等研究发现掌叶半夏提取物使子宫癌细胞Bcl-2和PCNA蛋白表达量递减；本实验采用MTT法，研究臭菘不同极性提取物对Caco-2细胞的抑制作用，结果显示，各极性提取物均有不同程度对癌细胞的抑制活性，同时随着浓度增加，抑制率也呈上升趋势，初步表明臭菘中含有细胞毒性成分，在实验中氯仿萃取物表现出较强的抑制癌细胞活性。

参考文献

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第十三卷第二分册）[M].北京：科学出版社，1979，（9）：1-12.

[2] 伊廷双，李德铢.天南星科分类系统的沿革[J].武汉植物学研究，2002，20（1）：49-61.

[3] 乔恒，隋希英.吉林省重点保护野生植物名录[J].吉林林业科技，2009，38（2）：24-41.

[4] 程鑫颖，包海鹰，丁燕.瓦宁木层孔菌中5个化合物的抗肿瘤活性筛选[J].菌物研究，2011，9（3）：175-180.

作者简介：魏丽，吉林农业大学中药材学院，研究生，研究方向：植物药。

网络出版时间：2014-4-8 13：17：49

网络出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/22.1186.S.20140408.1317.002.html

摘要：为了研究臭菘提取物对癌细胞的体外抑制活性，本文采用MTT法研究臭菘不同极性提取物，针对结肠癌细胞抑制作用，结果显示其提取物，均不同程度抑制Caco-2活性，且氯仿萃取物在实验中表现出较强的细胞抑制活性。

关键词：臭菘；提取物；癌细胞；抑制活性

中图分类号： R979.1 文献标识码： A 文章编号： 1674-0432（2014）-06-21-1

臭菘[Symplocarpus foetidus （Linn.） Salisb.]别名又叫黑瞎子白菜，是天南星科臭菘属草本植物[1]。作为中草药，其具有解表止咳、化痰平喘等功效 [2]。许多研究表明，天南星科植物大部分具有抗癌作用[3]。本实验研究臭菘抑制癌细胞活性，为对臭菘临床等实验研究，提供有利依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料、设备与试剂

1.1.1 实验材料 一是提取臭菘不同极性溶剂的提取物；二是人结肠癌细胞株Caco-2（吉林大学动植物实验室提供）。

1.1.2 试剂与仪器 SW-CJ-2D型超净工作台 苏州技术有限公司；酶标仪 SANRSE1006003938 SECUN公司；406828型细胞培养箱 SETECAT公司；Millex33mm 无菌高温过滤器MILLIPORE；96孔板 KOATSR公司；XB-T-25血球计数 上海通用仪器厂等。

环磷酰胺 山西药业有限公司；胰蛋白酶 ISMA公司；MTT M-2128 SIMA公司；DMEM培养液 BICO公司；胎牛血清等。

1.1.3 配置培养基和溶液 MTT溶液：准确称量MTT1克，然后加入200毫升的PBS缓冲溶液，将其搅拌溶解除菌过滤，得到浓度为0.5毫克/毫升MTT溶液，置于4℃冰箱中。

PBS缓冲溶液：准确称量0.2克 KCl、8克 NaCl、0.2克 K2PO4、1.15克 Na2PO4，倒入超纯水1000毫升， pH值调节至7.4，高压灭菌之后常温保存。

胰酶细胞消化液：准确称量2.5克胰蛋白酶、0.2克 Na2EDTA，除菌溶解于1000毫升PBS溶液中，放入-20℃冰箱中。

DMEM培养液：称取DMEM粉末溶于700毫升超纯水，溶解后进行除菌，再加入10%的胎牛血清和已经配好的1%谷氨酰胺溶液。

1.2 受试的药品配制

称取臭菘各极性萃取膏25.6毫克，再加入适量DMSO，溶解后搅拌均匀，加入配制好浓度为0.08、0.32和1.28毫克/毫升超级水。环磷酰胺为阳性对照组药物，同上述配置四个浓度的梯度。

1.3 实验方法[4]

1.3.1 复苏细胞

1.3.2 细胞的传代培养 首先，取出达到一定生长密度的Caco-2后，去除培养液；然后用PBS缓冲溶液对其反复冲洗3次，再用胰酶细胞消化液对其反复冲洗2次后，将液体再次倒掉，这时再加入几滴胰酶消化液，进行消化1～2分，放在倒置的显微镜下观察后，当看到细胞呈现圆粒状的时候，表示已消化完毕；再取出胰酶消化液，再次加入细胞培养液，待细胞充分均匀的分散后进行分装，然后放入到CO2培养箱内，以上操作都是在严格的无菌条件下进行的。

1.4 测定对Caco-2细胞给药影响

实验组有5个以上的平行，然后分别设定24小时、48小时、72小时进行培养，培养完成弃上层清液，再洗3次后弃除药液。再加入0.5毫克/毫升MTT200 升，常温培养4小时，弃除上清液并洗脱3次，再次加DMSO200升溶解MTT还原成甲臜沉淀，最后用波长492纳米来测定吸光度（A）值，并计算癌细胞的抑制率。

A：给药剂组的吸光值 P：肿瘤细胞的抑制率 ACK：对照组的吸光值

2 结果与分析

比较试验结果可知，对照组明显高于给药组（吸光度A值），表明给药组对Caco-2细胞有明显抑制，并随着时间的延长和浓度的增大，对其抑制趋势越强。同一浓度下氯仿的提取物，对Caco-2细胞抑制活性明显高于其他极性提取物组和对照组。

3 结语

李艳凤等人研究发现白附子乙酸乙酯萃取物对胃癌细胞具有增殖的抑制活性；李桂玲等研究发现掌叶半夏提取物使子宫癌细胞Bcl-2和PCNA蛋白表达量递减；本实验采用MTT法，研究臭菘不同极性提取物对Caco-2细胞的抑制作用，结果显示，各极性提取物均有不同程度对癌细胞的抑制活性，同时随着浓度增加，抑制率也呈上升趋势，初步表明臭菘中含有细胞毒性成分，在实验中氯仿萃取物表现出较强的抑制癌细胞活性。

参考文献

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志（第十三卷第二分册）[M].北京：科学出版社，1979，（9）：1-12.

[2] 伊廷双，李德铢.天南星科分类系统的沿革[J].武汉植物学研究，2002，20（1）：49-61.

[3] 乔恒，隋希英.吉林省重点保护野生植物名录[J].吉林林业科技，2009，38（2）：24-41.

[4] 程鑫颖，包海鹰，丁燕.瓦宁木层孔菌中5个化合物的抗肿瘤活性筛选[J].菌物研究，2011，9（3）：175-180.

作者简介：魏丽，吉林农业大学中药材学院，研究生，研究方向：植物药。

网络出版时间：2014-4-8 13：17：49

网络出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/22.1186.S.20140408.1317.002.html