C—myc和PTEN蛋白表达在宫颈癌中的临床意义
2014-04-29王志芳
王志芳
【摘要】目的探讨宫颈癌组织中C-myc和PTEN蛋白表达的临床意义。方法应用免疫组化PV-9000两步法检测宫颈癌、宫颈上皮内瘤变(CIN)及正常宫颈组织中C-myc和PTEN的表达。结果C-myc蛋白在宫颈癌中表达明显高于CIN和正常宫颈组织(P<0.05);它的表达在组织学分级、病理学类型、淋巴结转移等组间差异均有显著性意义(P<0.05),而与年龄及临床分期组间比较差异无显著性意义(P>0.05);PTEN蛋白的表达率在正常宫颈组织、CIN及宫颈癌中逐渐下降(P<0.05);它的表达在淋巴结转移及临床分期组间差异均有显著性意义(P<0.05),而在年龄、组织学分级及病理学类型组间比较差异无显著性意义(P>0.05);C-myc和PTEN蛋白的表达呈負相关(r=-0.484,P=0.000)。结论C-myc和PTEN与宫颈癌的发生、发展可能相关,二者联合检测可能为宫颈癌的早期诊断和治疗提供一定的理论依据。
【关键词】宫颈癌;C-myc;PTEN;免疫组织化学
宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤之一,发病率和死亡率位于第二位,早期诊断一直是人们关注的焦点。肿瘤的发生是一个复杂的过程。其中,癌基因的激活及抑癌基因的失活是肿瘤形成的基础。癌基因C-myc是myc基因家族的一员。C-myc蛋白的过表达发生于人类多种肿瘤。PTEN蛋白是一种肿瘤抑制基因,主要是通过促进肿瘤细胞的凋亡而在肿瘤的发生、发展中起重要作用。有关C-myc和PTEN蛋白的表达在宫颈癌发生、发展及相关性的研究尚少见报道。本研究应用免疫组织化学技术,分别检测了C-myc和PTEN蛋白在宫颈癌组织中的表达,并研究二者与临床病理特征之间的关系,为宫颈癌的早期诊治提供有用的理论依据。
1资料与方法
1.1病例资料所有标本均选自本院2009年12月到2011年12月间手术切除或门诊活检标本共130例。宫颈癌标本70例,年龄28-74岁,中位年龄48.4岁,术前均未进行放、化疗及内分泌治疗。按病理学类型分为:宫颈鳞癌60例,腺癌10例。按组织学分级:高中分化48例、低分化22例。依据2009年FIGO临床分期标准:Ⅰ期20例、Ⅱ期40例、Ⅲ期及以上10例。宫颈上皮内瘤样病变(CIN)40例和正常宫颈组织20例作为对照。其中CIN包括:I级15例,II级15例,III级10例。所有标本均由两位以上病理医师确诊。
1.2试剂鼠抗人C-myc单克隆抗体(稀释浓度1:100);兔抗人PTEN单克隆抗体(稀释浓度1:100);PV-9000免疫组化试剂盒及DAB显色试剂盒。
1.3方法采用免疫组织化学PV-9000两步法:切片(4μm)→脱蜡→高压抗原修复→自然冷却→3%H2O2内10min(灭活内源性过氧化物酶)→滴加抗体(C-myc、PTEN)→4°C冰箱过夜→PBS液冲洗5min→3次后,滴加试剂1(聚合物辅助剂),37°C温箱内孵育20min→重复PBS液冲洗,滴加试剂2(辣根酶标记羊抗鼠IgG多聚体),37°C温箱内孵育30min→重复PBS液冲洗5min→3次→DAB显色→蒸馏水冲洗→苏木精复染→乙醇脱水→二甲苯透明、中性树脂封片。每批均设已知阳性切片作对照,用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。
1.4结果判定C-myc蛋白阳性表达产物定位于细胞核,PTEN蛋白阳性表达产物位于细胞浆,均呈棕黄色颗粒。由两位以上病理医师采用双盲法观察每张切片:每张切片随机选取5个高倍视野(×400),共计数1000个细胞。按染色细胞的百分比评分(A):染色细胞未见为0分,<25%为1分,25-50%为2分,>50%为3分;按染色深浅度评分(B):无色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分。(A)×(B)记为阳性标记指数(labelindex,LI),并通过LI判断表达强度:0分为阴性(-),1-3分为弱阳性(+),4-6分为中等阳性(++),7-9分为强阳性(+++)。
1.5统计学处理采用SPSS17.0统计软件进行数据分析处理,各组间率比较采用x2检验,分析C-myc、PTEN蛋白间关系采用Spearman秩相关分析。P<0.05为有统计学意义。
2结果
2.1C-myc和PTEN蛋白在宫颈癌、CIN及正常宫颈组织中的表达由表1知,C-myc蛋白在宫颈癌、CIN及正常组织中阳性表达率分别为72.9%、42.5%、10%。在宫颈癌中的阳性表达率显著高于CIN和正常组织(P<0.05)。PTEN蛋白在宫颈癌、CIN及正常组织中阳性表达率分别为35.7%、57.5%、90%,在宫颈癌组织中的阳性表达率明显低于CIN及正常组织中的阳性表达率,两者差异有统计学意义(P<0.05)。
2.2C-myc和PTEN蛋白表达与宫颈癌临床病理特征的关系C-myc蛋白的表达在组织学分级、病理学类型、淋巴结转移等组间差异均有统计学意义(P<0.05),而在年龄及临床分期组间比较差异无统计学意义(P>0.05);PTEN蛋白的表达在淋巴结转移及临床分期组间差异均有统计学意义(P<0.05),而在年龄、组织学分级及病理学类型组间差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。
2.3C-myc和PTEN蛋白在宫颈癌中表达的相关性在70例宫颈癌中,C-myc和PTEN蛋白同时表达阳性的例数11例,同时表达阴性的例数5例,应用Spearman相关分析C-myc和PTEN蛋白的表达呈负相关(r=-0.484,P=0.000)。见表3。
3讨论
C-myc基因是myc基因家族成员之一,主要功能是参与肿瘤细胞的增殖、分化和凋亡[1]。它是一个原癌基因,定位于8q24区,是近年来分子生物学研究的一个热点。C-myc蛋白的过表达参与人类多种肿廇的形成。PTEN基因定位于10q23.3区,参与细胞周期调控、诱导凋亡、细胞的粘附和转移[2]。它的功能是具有PTPs(蛋白质酪氨酸磷酸酶)活性[3],可通过拮抗PTKs(酪氨酸蛋白激酶)抑制肿瘤细胞的生长,从而起到抑瘤作用。因此,联合研究C-myc和PTEN蛋白可能为肿瘤的预防、早期诊断和治疗起到指导作用。
本實验结果显示:①随着宫颈病变恶性度的增加,C-myc蛋白的表达逐渐增高,提示其过表达可能导致宫颈癌细胞失控性分化、增殖,从而诱发肿瘤形成。其表达与组织学分级、病理学类型、淋巴结转移等组间差异均有显著性意义,而与年龄及临床分期组间比较差异无显著性意义。提示C-myc蛋白的持续过表达可能参与宫颈癌的发生、发展和转移。②PTEN蛋白在宫颈癌、CIN及正常宫颈组织中阳性表达率分别为35.7%、57.5%及90%,其表达缺失可能与宫颈癌的发展有关,提示其可能是一种保护性蛋白。其表达与年龄、组织学分级及病理学类型无关,而与淋巴结转移和临床分期有关,说明随着临床分期的升高、淋巴结的转移,其表达下降,提示PTEN低表达与宫颈癌的侵袭和转移有关。③C-myc蛋白的表达随着宫颈癌恶变程度的增加而上升;PTEN蛋白随着宫颈癌恶性程度的增加而表达下降。应用Spearman相关分析,C-myc和PTEN蛋白的表达呈负相关(r=-0.484,P=0.000)。提示C-myc和PTEN蛋白在宫颈癌发生、发展中可能起着重要的协同作用。
综上所述,C-myc高表达和PTEN低表达与宫颈癌的发展密切相关,临床上联合检测C-myc和PTEN的表达可能会成为宫颈癌病情发展程度的判定指标,对判断患者预后,采取适当治疗方案有所帮助。
参考文献
[1]Utikal J,Leiter U,Udart M,el a1.Expression of C-myc and bcl-2 in primary and advanced cutaneous melanoma[J].Cancer Invest,2002,20(7-8):914-921.
[2]Goel A,Arnold CN,Niedzwieki D,et a1.Frequent inactivation of PTEN by Promoter hypermethylation in microsatellite instability-high sporadic colorectal Cancers[J].Cancer Res,2004,64(9):3014-3021.
[3]Jhawer M,Goel S,Wilson AJ,el a1.PIK3CA mutation/PTEN expression status predicts response of colon cancer cells to the epidermal growth factor receptor inhibitor cetuximab[J].Cancer Res,2008.15,68(6):1953-1961.