高效液相色谱法测定消渴平胶囊中盐酸小檗碱含量

赵严丽，陈淑娟

（1．广东省河源市食品药品检验所，广东 河源 517000； 2．广东医学院，广东 东莞 523808）

消渴平胶囊是由人参、黄连、天花粉、天冬、黄芪、丹参、枸杞子、沙苑子、葛根、知母、五倍子、五味子等12味中药组方，具有益火养阴、清热泻火的功效，用于阴虚燥热、气阴两虚所致的消渴病。处方中黄连具有清热燥湿、泻火解毒作用，盐酸小檗碱对痢疾杆菌、大肠杆菌、肺炎双球菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、伤寒杆菌及阿米巴原虫有抑制作用。本试验以其所含有效成分之一盐酸小檗碱为指标，采用高效液相色谱法测定方中盐酸小檗碱的含量。现报道如下。

1 仪器与试药

LC－2010 A型高效液相色谱仪(日本岛津公司)，UV－1601型紫外分光光度计(日本岛津公司)；AG－135型电子分析天平(Mettler公司，准确度为 0．01 mg)；KQ250DA型超声清洗器。盐酸小檗碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110713－200911，含量为 86．8%，供含量测定用)；消渴平胶囊（吉林益民制药有限公司，批号分别为 20100902，20101006，20110609，规格为每粒0．4 g）；乙腈为色谱纯，甲醇、磷酸均为分析纯，水为超纯水，十二烷基磺酸钠（化学试剂，上海双龙化学品厂）。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Inertsil C18柱 (250 mm ×4．6 mm，5 μm)；流动相：0．1%磷酸溶液（每 100 mL加十二烷基磺酸钠 0．1 g）－乙腈(52 ∶48)；测定波长：265 nm；柱温：30 ℃ ；流速：1．0 mL ／min；进样量：5 μL。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4 000。

2．2 溶液制备

精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成0．206 4 g／L的对照品贮备液；再精密量取对照品贮备液适量，加甲醇制成10．32 μg／mL的对照品溶液。取装量差异项下的样品内容物约0．6 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸 － 甲醇（1∶100）50 mL，密塞，称定质量，置 60℃水浴 15 min，取出，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）30 min，放冷，再称定质量，用盐酸 －甲醇（1∶100）补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取处方中除黄连外的其余药材，按处方量依法制成粉末，再按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

专属性试验：分别精密吸取供试品溶液、阴性对照品溶液和对照品溶液各5 μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图（图1）。可见，供试品溶液色谱中，在与盐酸小檗碱对照品溶液色谱相应位置上有相同保留时间的色谱峰，阴性对照品溶液无干扰，表明方法可行。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：分别精密吸取质量浓度为 10．32 μg／mL的对照品溶液 3，4，5，6，7 μL，注入高效液相色谱仪，测量峰面积。以峰面积（A）为纵坐标、质量浓度（C）为横坐标绘制标准曲线，得盐酸小檗碱回归方程 A＝23 513 C －66．1，r＝0．999 9（n＝5）。结果表明，盐酸小檗碱进样量在 0．030 95～0．072 25 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液（10．32 μg／mL）5 μL，重复进样 6次。结果峰面积的 RSD为 0．42%（n＝6），表明仪器精密度较好。

稳定性试验：取同一供试品（批号为20100902）溶液，室温下放置，于 0，4，8，12，18，24 h 时分别进样测定。结果的 RSD 为0．43%（n＝5），表明供试品溶液在 24 h内稳定。

重复性试验：取样品（批号为20100902）6份，每份约0．6 g，依法制备供试品溶液并测定含量。结果盐酸小檗碱含量为0．791 7 mg／g，RSD为0．56%（n＝6），表明方法重复性较好。

加样回收试验：精密称取已知含量的样品（批号为20100902，盐酸小檗碱含量为 0．791 7 mg ／g，平均每粒重 0．428 4 g）约 0．3 g，共 6份。另取盐酸小檗碱对照品 12．23 mg，用甲醇溶解并稀释成质量浓度为 0．053 08 g／L的溶液，精密量取 4，5，6 mL各2份，加入到6份样品中，按供试品溶液制备方法制备溶液，依法测定。结果见表1。

表1 盐酸小檗碱加样回收试验结果（n＝6）

2．4 样品含量测定

分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各5 μL，注入高效液相色谱仪，测定3批样品的盐酸小檗碱峰面积，按外标法计算含量。结果批号为 20100902，20101006，20110609的 3批样品，平均粒重分别为 0．408 2，0．405 4，0．403 8 g，平均 含 量分别为0．339 2，0．315 4，0．341 5 mg ／粒。

3 讨论

用紫外分光光度计对对照品溶液在200～400 nm波长范围进行扫描，结果在265 nm波长处具有最大吸收。故选择265 nm作为测定波长。

在供试品溶液制备方法中，曾选用超声、水浴、冷浸等方法[1]，比较了水浴和超声时间，结果以盐酸－甲醇（1∶100）混合溶液在60℃水浴15 min再超声处理30 min的方法，提取完全，含量较稳定；试验中比较了两种不同比例的流动相，即0．1%磷酸溶液－乙腈（70 ∶30）和 0．1% 磷酸溶液 － 乙腈（52 ∶48）[2－3]，结果表明，选择0．1%磷酸溶液－乙腈（52∶48）作为流动相时，色谱图基线较稳，样品中盐酸小檗碱与其他杂质峰能够完全分离，盐酸小檗碱的理论板数大于4 000。本方法准确、简便，重现性及回收率均理想，可作为该制剂的质量控制方法。

参考文献：

[1]胡安青．HPLC法同时测定金鸡片中盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的含量[J]．中国药师，2012，15（11）：1 590 －1 592．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典(一部)[M]．北京：中国医药科技出版社，2010:1 042．

[3]YBZ05142006－2009，国家药品标准[S]．