化浊解毒方对黄褐斑模型小鼠c－myc基因表达的影响

刘艳苏，王丽丽

（1．河北省晋州市人民医院，河北 晋州 052260； 2．河北省中医药研究院，河北 石家庄 050031）

黄褐斑，又称“肝斑”“蝴蝶斑”[1]，是常见的产生于面部的色素沉着性皮肤病，以女性患者居多。黄褐斑的成因比较复杂，常因服用避孕药物、精神压力大、内分泌失调或外用化妆品刺激引起[2]，是临床上常见而又难以治愈的皮肤病。虽然针对该病的研究较多，但病理机制仍不清楚。本试验采用紫外线造模法制作黄褐斑病理模型，研究化浊解毒方对试验动物角朊细胞中c－myc基因表达的影响，以探讨化浊解毒方治疗黄褐斑的机制。

1 材料与方法

1.1 仪器、试药与动物

SS－3型紫外线光疗仪；半自动生化分析仪；BX41型研究用荧光显微镜（奥林巴斯公司）。c－myc单克隆抗体；生物素标记马抗鼠 IgG、SP试剂盒（Zymed公司）。化浊解毒方由丹参 60 g，柴胡30 g，茯苓 30 g，白术 20 g，薏苡仁 60 g，僵蚕 24 g，金银花 30 g，连翘30 g，夏枯草30 g组方，加水1 000 mL，煎煮 2次，煎取200 mL。SD雌性小鼠90只，动物合格证号为804089，体重(20±5)g，由河北医科大学实验动物中心提供。

1．2 方法

将试验动物随机分为模型组(A组)、治疗组(B组)和正常对照组(C组)，各30只。将3组试验小鼠背部脱毛，裸露面积约2 cm×2 cm，每周脱毛1次。参照文献[3]复制黄褐斑模型。A组、B组小鼠以波长为320 nm的中波紫外线照射，每日1次，每次20 min，连续照射4周。复制模型过程中常规饲养动物。A组、C组小鼠给予生理盐水1 mL，每日1次；B组小鼠在模型复制成功后给予化浊解毒方煎剂，按照小鼠体重换算，浓缩至 1 mL，每日1次。均灌胃给药，连续治疗4周。治疗结束后，3组小鼠背部人工脱毛，面积为2 cm×2 cm。全部断头处死后，立即取下背部脱毛处全层皮肤，冷冻于－70℃冰箱内保存待测。

1．3 c－myc基因表达测定

将标本经石蜡包埋及连续切片，切片厚度为4 μm。切片经二甲苯脱蜡、蒸馏水冲洗、磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗后，加入生物素标记马抗鼠IgG，37℃温育，辣根过氧化物标记的链霉素卵白素37℃温育，苏木精复染。常规脱水，透明，封片，镜下观察。分别检测A组、C组、B组治疗后c－myc基因的表达。c－myc基因的判定以胞核内出现黄色颗粒状物质为阳性，按着色强弱计分为4级：阴性（－）为核内无阳性颗粒；弱阳性(＋)为核内散在阳性颗粒，阳性细胞数在25%以下；阳性(＋＋)为核内深黄色颗粒细胞数在25% ～50%之间；强阳性(＋＋＋)为核内棕黄色颗粒细胞数在50%以上。

1．4 统计学处理

采用 SPSS 11．0统计软件，组间比较采用 χ2检验。P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

结果见表1。

表1 3组c－myc基因表达情况比较(n＝30)

3 讨论

黄褐斑是由于面部的组织细胞间微循环淤阻、细胞溶解死亡、黑素增多、色素沉着形成所造成的[4]。黑素细胞产生的黑素沉着状况是决定皮肤颜色的主要因素[5]，角朊细胞不仅被动地接受由黑素细胞树突运送来的黑素，而且对黑素细胞的生长和黑素的生成等有调节作用。Haake等[6]证明了胎儿角朊细胞和黑素细胞之间的关系处于变化中，角朊细胞诱导和促进黑素细胞增殖、迁移和分化。

c－myc基因是调控细胞增殖的主要基因，c－myc原癌基因产物是一种DNA结合蛋白，分布于核内，可促进细胞增殖，诱导细胞凋亡，对于细胞从G1期进入S期极为重要[7－9]。

本研究结果显示，黄褐斑模型小鼠c－myc基因表达水平与正常对照组相比明显升高（P＜0．05)；经过化浊解毒方治疗后，c－myc基因的表达降低（P＜0．05)。因此，化浊解毒方可能是通过降低黄褐斑皮损角朊细胞中c－myc基因的表达而产生治疗效果的。

参考文献：

[1]陈华英．中医治疗面部黄褐斑疗效观察[J]．现代中西医结合杂志，2006，15(4)：453．

[2]吴景东，顾 炜，尹 莹，等．中医辨证治疗黄褐斑临床体会[J]．中国美容医学，2008，17(5)：741 － 742．

[3]苑光军，姜 醒，刘 斌，等．当归芍药散对黄褐斑模型SOD、MDA及病理形态学影响的研究[J]．中医药信息，2008，25（6）:81 －82．

[4]谢圣影，陈丽芳．自拟祛斑汤结合中药面膜治疗黄褐斑35例临床观察[J]．中国临床医药杂志，2008，20（2）：160 －161．

[5]汪 涌，何清濂，林子豪．黑素细胞与影响皮肤色素沉着的因素[J]．实用美容整形外科杂志，1997，8（3）:152 －154．

[6]Haake A，Scott GA．Physiologic distribution and differention of melanocytes in human fetal and neonatal skin equivalentes[J]．J Invest Dermatol，1991，96：71．

[7]李新华．银屑病患者T淋巴细胞对表皮c－myc、bcl－2及 p53蛋白表达影响的实验研究[D]．太原：山西医科大学，2002．

[8]冯 捷，徐汉卿，苏宝山．复方青黛胶囊对银屑病表皮角朊细胞中c－myc表达的影响[J]．中国中西医结合杂志，1996：16（3）：146 －148．

[9]Gordon FP，Mansur CP，Glichest BA．Regulation of human melanocyte growth，dendricity and melanization by keraticytederived factors[J]．J Invest Dermatol，1989，92（5）：565 － 572．