反相高效液相色谱法测定护肝胶囊中葛根素含量

李晓娟

（安徽省安庆市立医院，安徽 安庆 246003）

护肝胶囊具有疏肝理气、健脾消食的功效，可降低转氨酶，用 于治疗脂肪肝、酒精肝、药物性肝损伤、慢性肝炎及早期肝硬化等。同时，具有解酒、调脂、解毒、抗炎等效果[1]，是临床用于解酒、保肝脏的一味良药。其由葛根、金银花、柴胡、茵陈等6味中药组方，经粉碎过100目筛后，分装成胶囊，葛根在方中起到重要作用。本试验中建立了反相高效液相色谱（RP－HPLC）法，并用于测定护肝胶囊中葛根素的含量，以控制产品质量。现报道如下。

1 仪器与试药

日本岛津LC－20AT型高效液相色谱仪，包括SPD－20A检测器，CT－20型柱温箱；上海必能信CQ－80型超声波清洗器；AB265－S型电子天平（瑞士梅特勒公司）。葛根素对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110752－200511）；甲醇为色谱醇，纯化水；护肝胶囊（宜宁药业股份有限公司，批号为 130321，130612，131102，130715，市售品）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：KromasilC18柱（250mm ×4.6mm，5μm，日本岛津公司）；流动相：水－甲醇（92 ∶8）；检测波长：245 nm；流速：1.0 mL /min；柱温：35 ℃ ；进样量：20 μL。

2.2 溶液制备

称取葛根素对照品 11.2 mg，精密称定，干燥 12 h，置 10 mL容量瓶中，加50%的乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 mL中含葛根素1.12 mg的溶液，作为贮备液；精密量取贮备液1 mL，置10 mL容量瓶中，加50%的乙醇制成每1 mL约含葛根素0.112 mg的溶液，作为对照品溶液。取护肝胶囊20粒内容物，取内容物细粉约0.1 g，精密称定，置25 mL容量瓶中，加入50%的乙醇25 mL，50℃超声处理30 min，放冷至室温，以50%的乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液经 0.45 μm的微孔滤膜过滤，即得供试品溶液[6－7]。按处方组成比例，称取除葛根的方中其他药材适量，与供试品溶液制备方法同法制备溶液，作为阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

系统适用性试验：精密吸取 2.2项下 3种溶液各 10 μL，按拟订的色谱条件进样测定。色谱图见图1。

线性关系考察：精密吸取葛根素对照品溶液（质量浓度为0.112 g /L）1，2，5，10，15，20 μL，分别注入液相色谱仪，按 2.1 项下色谱条件测定，以葛根素质量浓度为横坐标、峰面积积分值为纵坐标绘制标准曲线，回归方程为 A＝6.91×105C ＋2.13×105，r＝0.999 7（n＝6）。结果表明，葛根素进样质量浓度在 0.112 ～2.24 g/L范围内与峰面积积分值具有良好的线性关系。

精密度试验：精密吸取同一葛根素对照品溶液（质量浓度为 0.112 g /L）10 μL，重复进样 6 次。结果峰面积积分值分别为5 682 219，5 622 176，5 671 835，5 712 194，5 666 457，5 622 364，RSD ＝0.81%（n＝6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批号的样品（批号为130321）5份，依法制备供试品溶液并测定含量。结果的 RSD为 0.79%（n＝5），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于制备后 0，2，4，6，8，10 h时进样测定 1次，进样量 10 μL。结果峰面积积分值的RSD＝0.88%（n＝6），表明供试品溶液在10 h内基本稳定。

加样回收试验：称取已知葛根素含量的样品（批号为130321）0.05 g，共 6份，精密称定，分别精密加入对照品贮备溶液 0.5，0.5，1.0，1.0，1.5，1.5 mL，依照 2.2 项下供试品溶液制备方法制备溶液并依法测定含量，计算回收率。结果见表1。

图1 高效液相色谱图

表1 葛根素加样回收试验结果（n＝6）

2.4 样品含量测定

按拟订的含量测定方法测定4批样品中葛根素的含量，结果见表2。

3 讨论

中药制剂中葛根素的含量测定方法很多[6－7，10，12]，对该类中药制剂提取方法的选择，关系到药品主要成分的提取。以葛根素含量为考察指标，对提取溶剂进行考察，分别以甲醇、20%甲醇、50%甲醇、80%甲醇、50%的乙醇溶液25 mL为溶剂超声30 min，结果表明，50%乙醇为提取溶剂时提取的含量较高，故选其为样品的提取溶剂。同时，对样品提取方式、温度及时间进行了考察，结果显示回流和超声提取对含量的影响不大，且超声操作较简便，时间以30 min为宜，能将葛根素提取完全，故选用50℃超声提取30 min作为提取方法。

试验过程中，对比不同流动相的分离效果，如以不同比例的甲醇－水、乙腈－水、0.05%磷酸溶液－乙腈－甲醇等流动相系统，结果表明，以流动相为水－甲醇（92∶8）时能将葛根素与杂质峰较好地分离，且方中其他成分对葛根素的含量测定无干扰。

生产中，由于中药制剂的原料可能来自不同的产地，因此采用不同产地的葛根为原材料进行对比检测，根据测定的平均结果，综合考虑到药材的产地、采收、加工等因素[8－9，11]，护肝胶囊每粒含葛根以葛根素（C21H20O9）计不得少于 3.5 mg。总之，本试验中所建立的含量测定方法不仅操作简单、准确，且重复性好，可用于护肝胶囊的质量控制。

表2 样品含量测定结果

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