定量压制对大青叶煎煮质量的影响

朱 聪，宋 英*，王聪颖，郭志青

(1.成都中医药大学附属医院，四川 成都 610072；2.成都中医药大学 药学院，四川 成都 610075)



定量压制对大青叶煎煮质量的影响

朱 聪1，宋 英1*，王聪颖2，郭志青1

(1.成都中医药大学附属医院，四川 成都 610072；2.成都中医药大学 药学院，四川 成都 610075)

目的：通过对大青叶压制饮片和普通饮片的煎煮，观察定量压制是否影响大青叶的煎煮质量。方法：分别对大青叶压制饮片和传统饮片进行单味煎煮和在复方中煎煮，以靛玉红含量及干膏率为评价指标。结果：压制中药饮片水煎液中靛玉红含量及干膏收率与传统饮片无明显差异。结论：压制并不影响大青叶饮片的煎煮效果。

大青叶压制饮片；传统饮片；靛玉红；干膏率

大青叶为常用清热解毒中药,来源于十字花科植物菘蓝isatisindigoticafort的干燥叶[1]，具有清热解毒、凉血消斑的功能，主要用于治疗温邪入营、高热神昏、发斑发疹、黄疸、热痢、痄腮、喉痹、丹毒、痈肿等症[2]。其主要有效成分为吲哚类生物碱: 靛蓝( indigotin) 、靛玉红( indirubin) ，《中国药典》2010 版以靛玉红作为大青叶药材的质量控制指标[3]，并且靛玉红是传统的治疗白血病的药物[4]。

大青叶密度小、流动性差，不利于小包装饮片的定量分装和药房的调剂。

压制饮片是一种新的专利技术，其采用物理压缩法，将饮片制成一定形状， 用一定的包装材料封装，由配方药师直接调配而无需称量，是一种新型饮片[5]。同时解决了花类、全草类、叶类及部分质轻或不规则饮片，因密度小、流动性差、体积大而增加饮片生产、包装、贮藏、运输、调剂等环节中存在困难[6]。本实验旨在研究定量压制会不会对大青叶的煎煮质量造成影响，从而为大青叶压制饮片的质量标准提供参考。

1 仪器与试药

1.1 试验仪器

岛津LC 20A液相色谱仪，浙大智达N2000色谱工作站；BP211D分析天平(十万分之一型，德国赛多利斯公司)；101A-3干燥箱(上海市实验仪器总厂)；永欣TW-2000W可调温电炉(郫县永结电器总厂)。

1.2 试药

大青叶传统饮片(批号：120319，四川省中药饮片有限公司);大青叶压制中药饮片(批号：120319，四川省中药饮片有限公司);靛玉红对照品(批号110717-200204，中国食品药品生物制品检定研究院);甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 含量测定[7-9]

2.1.1 色谱条件 色谱柱为 Comatex C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇—水为75∶25(体积分数)；流速：1μL/min ；检测波长：289nm，柱温：30℃；进样量：20μL。理论塔板数按靛玉红计应不低于4 000。

2.1.2 对照品溶液制备 精密称取靛玉红1.62mg，置50mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取2mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(6.48μg/μL)。

2.1.3 供试品溶液制备 取本品细粉0.25g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷，浸泡15h，加热回流提取至提取液无色。回收溶剂至干，残渣加甲醇使溶解并转移至100μL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.4 专属性试验 按“2.1.1”项色谱条件，精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性供试品溶液各20μL，注入液相色谱仪，结果供试品中靛玉红色谱峰与相邻色谱峰分离度>1.5，理论塔板数按靛玉红峰计算不低于4 000，阴性无干扰。见图1。

图1 靛玉红对照品、供试品和阴性样品的HPLC图谱

2.1.5 精密度试验 按照“2.1.1”项色谱条件，精密吸取靛玉红对照品溶液20μL，注入液相色谱仪，连续进样6次，记录靛玉红色谱峰峰面积，结果显示，靛玉红对照品峰面积均值为23 475.2，RSD为1.57%，表明精密度良好。

2.1.6 稳定性试验 按照“2.1.1”项色谱条件，精密吸取供试品溶液20μL，分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h，注入液相色谱仪，记录峰面积，计算含量，结果显示，靛玉红峰面积均值为660.7，RSD为2.58%，表明供试品溶液在10h内稳定性较好。

2.1.7 重复性试验 按“2.1.3”项下方法，分别制备供试品溶液6份，按照“2.1.1”项色谱条件，注入液相色谱仪，记录靛玉红色谱峰峰面积，计算供试品中靛玉红含量，结果显示，样品中靛玉红含量均值为47.990 7μg/μL，RSD为2.26%，表明试验重复性较好。

2.1.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品制备溶液0.5μL(479.907 2μg/μL)共6份，分别精密加入靛玉红对照品溶液(0.143 2mg/μL)2μL，按供试品制备方法及色谱条件，测定含量，计算回收率。

回收率

经计算靛玉红的加样回收率平均值为98.76%，加样回收率在95%～105%之间，RSD=2.08%,表明该方法的加样回收率良好。

2.1.9 标准曲线制备 分别精密吸取靛玉红对照品溶液(6.48μg/μL)1mL置50mL量瓶中，1mL、2mL、5mL置25mL量瓶中，分别加甲醇至刻度，摇匀，即得标准曲线对照品溶液。按照上述色谱条件，分别精密吸取20μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，结果见表1。以峰面积(Y)对进样量(X)进行回归分析，计算回归方程，并以峰面积为纵坐标，对照品含量(μg)为横坐标，绘制标准曲线，标准曲线见图2。

表1 靛玉红线性范围考察

图2 靛玉红标准曲线

经计算，得线性回归方程Y=2 183.6X+1 834.9，R=0.999 8，结果表明，进样量在2.592～129.6μg范围内，靛玉红进样量与峰面积呈良好线性关系。

2.2 大青叶定量压制样品与传统饮片单味煎煮比较

2.2.1 靛玉红含量测定 分别称取大青叶传统饮片600g和压制饮片600g各6份，其中各取3份分别加15倍量水，浸泡30min，第1次煎煮保持微沸15min，第2次煎煮保持沸腾10min，滤过，滤液浓缩并定容至7 000mL，作为传统煎煮组；另外各3份分别加水8 000mL，浸泡30min，煎煮15min，滤过，药液定容至7 000mL，作为机器煎煮组。精密吸取上述各样品溶液5mL，置10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取供试液20μL，注入液相色谱仪，计算靛玉红含量，结果见表2。

2.2.2 干膏收率测定 精密吸取样品溶液25mL，置已恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量，试验结果见表2。

2.2.3 结果 大青叶压制中药饮片单味水煎液中靛玉红含量略高于传统饮片单味水煎液，干膏收率基本一致。

表2 单味煎煮比较结果

注:靛玉红含量及干膏收率权重系数分别为0.6、0.4。

2.3 大青叶压制饮片和传统饮片在复方中煎煮比较

2.3.1 靛玉红含量测定 按照处方比例分别称取大青叶600g、升麻400g、玄参400g、知母400g、麦冬400g、荷叶400g 6份和大青叶压制饮片600g、升麻400g、玄参400g、知母400g、麦冬400g、荷叶400g 6份，其中各取3份分别加15倍量水，浸泡30min，第1次煎煮保持微沸15min，第2次煎煮保持沸腾10min，滤过，滤液浓缩并定容至7 000mL，作为传统煎煮组；另外各三组分别加水10 000mL，浸泡30min，煎煮15min，滤过，药液定容至7 000mL，作为机器煎煮组。

另按处方比例称取除大青叶外药材共100g，按照上述方法制备缺大青叶阴性样品溶液。

精密吸取上述样品溶液1μL，置10μL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取供试液20μL，注入液相色谱仪，计算靛玉红含量，结果见表3。

表3 复方煎煮比较结果

注:靛玉红含量及干膏收率权重系数分别为0.6、0.4。

2.3.2 干膏收率测定 精密吸取样品溶液25μL，置已恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量，试验结果见表3。

2.3.3 结果 大青叶压制中药饮片复方水煎液中靛玉红含量略高于未压制饮片，干膏收率基本一致。

2.4 溶出曲线比较[10-11]

2.4.1 不同时间点靛玉红含量测定 ①传统饮片样品溶液制备。分别称取大青叶传统饮片200g，加水2 000mL(补加吸水量)，浸泡30min，分别于煎煮5min，10min，15min，20min，30min，40min，50min，60min取样100mL,并补充水体积，药液滤过，备用。②定量压制样品溶液制备。分别称取定量压制样品200g，按上述方法同法制备定量压制样品溶液。

图3 靛玉红溶出曲线

精密吸取上述样品溶液10mL，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液作为供试品溶液。精密吸取供试液20μL，注入液相色谱仪，计算靛玉红含量，结果见表4(图3)。

2.4.2 不同时间点干膏收率测定 精密吸取煎煮不同时间点样品溶液各25μL，置已恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3h，置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量，试验结果见表4。

表4 溶出曲线结果

3 结论

以上大青叶传统饮片与压制中药饮片的溶出曲线、单味煎煮、复方煎煮比较结果表明，在大青叶压制中药饮片崩散完全情况下，压制中药饮片水煎液中靛玉红含量略高于传统饮片，但无统计学差异，干膏收率与传统饮片无明显差异，压制并不影响大青叶饮片的煎煮效果。且从靛玉红前15min的溶出曲线看，由于压制样品不会像传统样品一样漂浮在水面，故其溶出速度更快。

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(责任编辑：宋勇刚)

The Press Forming’s Affects to the Decoction Quality of Folium Isatidis

Zhu Cong1,Song Ying1*,Wang Congying2,Guo Zhiqing1

(1.The Affiliated Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610072,China;2.Pharmacy College,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu 610075,China)

Objective:To observe whether the press forming affects the decoction quality of Folium Isatidis by contrast the decoction of compressed pieces and ordinary pieces.Methods:Evaluating the content of indirubin and dry extract yielding rate of compressed pieces and ordinary pieces respectively. Results:No obvious difference of indirubin content nor dry extract yielding rate was found in the decoction between compressed pieces and ordinary pieces. Conclusion:Press forming does not affect the decoction quality of Folium Isatidis pieces.

Folium Isatidis Compressed Pieces；Ordinary Pieces；Indirubin；Dry Extract Yielding Rate

2014-07-02

四川省科技计划项目(2011SZ0311)

朱聪(1988-)，男，成都中医药大学附属医院中药师，研究方向为中药制剂。

通讯简介：宋英(1959-)，男，硕士，成都中医药大学附属医院主任药师，研究方向为中药炮制与制剂。

R284.2

A

1673-2197(2014)21-0014-03