HPLC法测定脑力宝丸中维生素B1含量

2014-04-26文师龙冯玉康杨宝翠

亚太传统医药 2014年11期

关键词：冰醋酸脑力甲醇

李哲，文师龙，冯玉康，杨宝翠

(1.神威药业集团有限公司，河北石家庄 051430；2.奥星制药设备有限公司，河北石家庄 050011)

HPLC法测定脑力宝丸中维生素B1含量

李哲1*，文师龙2，冯玉康1，杨宝翠1

(1.神威药业集团有限公司，河北石家庄 051430；2.奥星制药设备有限公司，河北石家庄 050011)

目的：建立脑力宝丸中维生素B1的高效液相色谱测定方法。方法：采用C18柱(4.6mm×250mm,5μm)，以甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(pH 3.0，5∶95)为流动相，流速：1.0 mL·min-1，检测波长：246nm，柱温：35℃。结果：该方法的专属性良好，维生素B1的线性范围为5.16～51.6μg·mL-1，平均回收率为100.08%，RSD=0.87%。结论：该方法操作简便、准确、重现性好，可用于脑力宝丸的质量控制。

HPLC；脑力宝丸；维生素B1

脑力宝丸收载于《部颁标准中药成方制剂第十四册》，由远志、地黄、五味子、地骨皮、菟丝子、茯苓、石菖蒲、川芎八味药材和维生素E、维生素B1组成的复方药剂，具有滋补肝肾、养心安神之功效[1]，主要用于肝肾不足[2]、心神失养所致的健忘失眠、烦躁梦多、潮热盗汗、神疲体倦及神经衰弱等证候[3]。该标准尚未建立维生素B1的含量测定方法，本文于原标准的基础上建立了维生素B1的HPLC含量测定方法，该方法简便、准确，可用于脑力宝丸中维生素B1的含量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent-1260高效液相色谱仪(美国安捷伦科技公司)；METTLER-ALC-210.4电子分析天平(上海梅特勒托利多仪器有限公司)；KE3200E型超声清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)。

1.2 试药

脑力宝丸，神威药业集团有限公司(批号：1209221、1209222、1209231、1209232、1209241、1209242)；维生素B1对照品(中国食品药品检定研究所，批号：100390-200703)；甲醇，色谱纯(Thermo Fisher)；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：C18(4.6mm×250mm,5μm)柱；检测波长：246nm；流动相：甲醇-0.05mol·L-1磷酸二氢钾溶液(pH值为3.0，5∶95)；流速1.0mL·min-1，柱温35℃，进样量10μL。理论塔板数按维生素B1峰计算，应不低于2 500。

2.2 对照品溶液的制备

维生素B1于105℃干燥至恒重，精确称取5.0mg，至100 mL棕色量瓶中，加0.5% 冰醋酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.05mg/L的对照品储备液。精密量取上述对照品储备液4 mL于10 mL量瓶中，用0.5% 冰醋酸溶液稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备

取本品，除去包衣，研细，精密称取0.2g，置100 mL棕色量瓶中，加0.5%冰醋酸溶液适量，超声提取30 min，溶解放冷，用0.5% 冰醋酸溶液稀释至刻度，摇匀滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.4 专属性试验

按法定工艺[1]制成缺少维生素B1的阴性样品，根据供试品溶液制备方法制备成阴性对照溶液，并进行含量测定。结果维生素B1阴性对照溶液在与维生素B1对照品相同保留时间处未见明显色谱峰，证明该方法专属性良好，见图1。

2.5 线性关系考察

精密吸取维生素B1对照品储备液各1.0、2.0、4.0、6.0、10.0mL于10.0mL容量瓶中，加0.5% 冰醋酸溶液稀释至刻度，得浓度分别为5.16、10.32、20.64、30.96、51.6 μg·mL-1的对照品溶液，分别按“2.1”色谱条件测定，记录色谱峰，并以峰面积对溶液浓度绘制标准曲线，得回归方程Y=25.001X-2.434 (r=0.999 9)，结果表明，维生素B1在5.16～51.6μg ·mL-1范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验

取同一对照品溶液，按“2.1”色谱条件，连续进样6次，记录峰面积，结果RSD=0.33%，精密度良好。

2.7 重现性试验

取同一批脑力宝丸6份，分别制备供试品溶液，按“2.1”色谱条件测定，测得维生素B1平均含量为1.99mg/丸，RSD= 0.71%。

图1 脑力宝丸及对照品HPLC

2.8 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0、2、4、8、12h进样，按2.1色谱条件测定维生素B1含量，结果RSD= 0.17% ，说明供试品溶液在12h内稳定。

2.9 回收率试验

取同一批已知含量的样品(维生素B1含量为1.99mg/丸)6份，各0.1g，采用加样回收法，精密加入一定量维生素B1对照品，照供试品溶液的制备方法和色谱条件进行含量测定，并计算加样回收率，结果见表1。

2.10 样品测定

按上述含量测定方法对6批脑力宝丸进行测定，并计算维生素B1含量，结果见表2。

3 讨论

3.1 提取溶剂选择

本实验提取溶剂采用0.5%冰醋酸。维生素B1是由嘧啶环和噻唑环通过亚甲基结合形成的一种B族维生素[4]，在酸性溶液中较稳定，在碱性溶液中不稳定，易被氧化,环状容易破坏；遇光和热维生素B1效价下降[5]。

3.2 流动相选择

采用0.5% 冰醋酸[6]、0.05 mol·L-1庚烷磺酸钠(冰醋酸pH=3.0)-甲醇(50：50)[7]、甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(pH 3.0)(1∶99)[8]为流动相，考察样品中各成分的分离情况，结果，采用0.5%冰醋酸为流动相对色谱柱损害极大，且维生素B1峰形不对称，拖尾现象严重，而采用庚烷磺酸钠离子对试剂为流动相时，柱子平衡时间较长，维生素B1峰的保留时间不稳定，同时采用离子对试剂也会影响色谱柱的使用寿命；而采用甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(pH3.0)为流动相维生素B1峰形对称，保留时间稳定，后经反复试验，确定流动相比例为5∶95时，维生素B1峰的分离度良好，因此确定流动相为甲醇-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(pH 3.0,5∶95)。

3.3 方法评价

实验建立的HPLC方法专属性强、准确度高、重现性好，可用于脑力宝丸中维生素B1的含量测定。