HPLC法测定正元胶囊中淫羊藿苷的含量

任亚东，施 猛，孙秋艳，刘恩桂，刘志强

(扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司，广东 广州 510663)



HPLC法测定正元胶囊中淫羊藿苷的含量

任亚东，施 猛*，孙秋艳，刘恩桂，刘志强

(扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司，广东 广州 510663)

目的：建立正元胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，以十八烷基键合硅胶柱为色谱柱，以甲醇-1%醋酸溶液(52∶48)为流动相；检测波长为270nm，柱温为30℃，流速为1.0mL/min。结果：淫羊藿苷在10.250 ～205.000μg/mL浓度范围内与其峰面积值呈良好线性关系，平均回收率为98.7%(RSD=0.3%)。结论：该方法测定结果准确，精密度高，耐用性好，可以作为正元胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。

正元胶囊；淫羊藿苷；含量测定；高效液相色谱法

正元胶囊是由淫羊藿、黄芪等八味药材经适宜工艺加工而成，具有益气健脾、补肾填精的功效。其能改善患者神疲乏力、少气懒言、呼吸气短、纳谷少馨、腰脊酸痛、自汗等症状，提高患者免疫功能和生存质量，增加体重，保护白细胞，对放疗、化疗有增效、减毒作用，可用于肿瘤放化疗辅助治疗。淫羊藿系方中君药，淫羊藿苷为主要药效成分。本文建立了制剂中淫羊藿苷HPLC含量测定方法，为有效控制正元胶囊质量提供可靠的分析方法。

1 试药与仪器

1.1 试药

淫羊藿苷对照品，来源于中国食品药品检定研究院，正元胶囊由扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司提供；甲醇(色谱纯)、醋酸(分析纯)、乙醇(分析纯)。

1.2 仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪，Agilent 1260VWD紫外检测器，梅特勒 XS205电子天平。

2 含量测定方法

2.1 色谱条件

按照高效液相色谱法(中国药典2010年版一部附录VI D[3])，以十八烷基键合硅胶柱为色谱柱，以甲醇-1%醋酸溶液(52∶48)为流动相；检测波长为270nm，柱温为30℃，流速为1.0mL/min。

2.2 溶液制备

供试品溶液制备：取本品内容物约0.5g，研细，精密称定，置50mL量瓶中，精密加入70%乙醇至刻度，静置过夜，超声处理60min，放冷至室温，加70%乙醇至刻度，滤过，取续滤液，即得。

对照品溶液制备：取淫羊藿苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释成浓度为50μg/mL溶液，作为对照品溶液。

2.3 含量测定

按照高效液相色谱法，精密量取供试品溶液与对照品溶液各5μL，注入色谱仪，记录色谱图；主峰按淫羊藿苷峰计，塔板数不低于3 000。样品测定：精密量取供试品溶液与对照品溶液各5μL，注入色谱仪，记录色谱图；按外标法以峰面积计算，即得。

3 方法学考察

3.1 专属性及系统适应性试验

按“2.2”项下供试品溶液配制方法制备阴性对照溶液及供试品溶液，精密量取空白溶剂、阴性对照溶液、对照品溶液及供试品溶液各5μL，照淫羊藿苷含量测定方法测定。理论塔板数按淫羊藿苷峰计算，应不低于3 000。具体试验结果见表1。

表1 专属性及系统适应性试验结果

结果表明空白样品和阴性对照溶液在淫羊藿苷保留时间处无干扰，理论塔板数>3 000，拖尾因子及分离度均符合规定，表明该方法专属性、系统适应性良好。

3.2 线性与范围

精密称取淫羊藿苷对照品50mg，置100mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品贮备液；精密量取对照品贮备液2mL、5mL、10mL、1mL、2mL、3mL、20mL分别置100mL、100mL、100mL、20mL、10mL、10mL、50mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，得到浓度为10μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、75μg/mL、100μg/mL、150μg/mL、200μg/mL的对照品溶液。分别精密量取上述对照品系列浓度溶液各5μL，照淫羊藿苷含量测定方法测定，计算相关系数和回归方程，试验数据见表2。

表2 线性与范围

以进样浓度为横坐标，淫羊藿苷峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，结果显示，淫羊藿苷在10.250～205.000μg/mL的浓度范围内与其峰面积值呈良好线性关系，线性方程为Y=10.339 80X+3.402 07，相关系数r=0.999 88(n=7)。

3.3 准确度试验

分别取正元胶囊样品6份约0.25g，分别精密加入等量对照品，按照“2.2”项下供试品溶液配制方法处理，照淫羊藿苷含量测定方法同法测定，计算回收率见表3。

表3 加样回收试验结果

结果显示，淫羊藿苷的加样回收率均在98%～102%之间，平均回收率为98.7%，RSD为0.3%(RSD≤2%)符合要求，说明该方法准确度良好。

3.4 精密度试验

精密量取“2.2”项下对照品溶液(浓度约为50μg/mL)5μL，照淫羊藿苷含量测定方法测定，连续进样6次，测定淫羊藿苷的峰面积，结果见表4。从表4结果可得，各峰面积的RSD为0.3%(RSD≤2%)，表明该方法精密度良好。

表4 精密度试验结果

3.5 重现性试验

取正元胶囊样品，精密称定，按照“2.2”项下供试品溶液配制方法处理6份供试品溶液，照淫羊藿苷含量测定方法同法测定，试验结果见表5。结果显示，6份样品的测定结果RSD为0.3%(RSD≤2%)，表明该方法具有良好的重复性。

3.6 溶液稳定性考察

取“2.2”项下供试品溶液1份，分别在0h、2h、4h、8h、12h、24h测定淫羊藿苷峰面积，考察溶液稳定性。试验结果见表6。结果表明样品溶液至少在24h内稳定(RSD≤2%)。

3.7 耐用性试验

取供试品溶液，对色谱条件中流动相的比例、流速、柱温、色谱柱品牌进行小范围改变，考察主成分的保留时间、系统适应性的变动，考察结果见表7。结果表明，流动相比例、流速、柱温在小范围内调整，含量测定的系统适应性均符合要求，且变化不大，不同厂家色谱柱均可使用，表明该方法具有良好的耐用性。

表5 重现性试验结果

表6 溶液稳定性试验结果

4 讨论

取对照品溶液在200～400nm波长范围内进行光谱扫描，结果其最大吸收波长为270nm，且在此波长下空白样品和阴性对照溶液均无干扰，故选择270nm作为正元胶囊中淫羊藿苷含量测定的检测波长。

本方法测定结果准确，精密度高，耐用性好，可以作为正元胶囊中淫羊藿苷的含量测定方法。

表7 流动相比例考察结果

[1] 国家药典委员会.中国药典[S]．一部.北京：中国医药科技出版社，2010．

(责任编辑：宋勇刚)

Determination of Icariinin Zhengyuan Capsules by HPLC

Ren Yadong, Shi Meng*, Sun Qiuyan, Liu Engui，Liu Zhiqiang

(Yangtze River Pharmaceutical Group Guangzhou Hairui Pharmaceutical Co.,Ltd，Guangzhou 510663,China)

Objective:To establish the method for determination of Icariinin Zhengyuan capsules. Methods:The assay involved an isocratic elution of Icariin in anEighteen alkyl bonded silica gel column，using a mobile phase composition of Methanol and 1%acetic acid solution (52∶48);The determination wavelength was 270 nm, column temperature was 30℃ and the flow rate was 1.0mL/min. Results:AndIcariin had a good linear range of 10.250μg/mL ～205.000μg/mL with a mean recovery of 98.7%(RSD=0.3%). Conclusion:The assay showed an accurate result, high precision and good durability ,which can used as a method for determination of Icariin in Zhengyuan capsules.

Zhengyuan Capsules ;Icariin；Determination；HPLC

2014-03-28

任亚东(1978-)，男，硕士，扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司工程师，研究方向为药品生产质量管理。

施猛(1976-)，男，扬子江药业集团广州海瑞药业有限公司工程师，研究方向为药品研发、生产。

R281

A

1673-2197(2014)11-0016-03