阿加曲班注射液的测定方法研究

陈志勇 李 伟 周海辉 崔 友 夏小秋 王恒彩

（浙江天瑞药业有限公司，浙江 瑞安 325200）

阿加曲班注射液的测定方法研究

陈志勇 李 伟 周海辉 崔 友 夏小秋 王恒彩

（浙江天瑞药业有限公司，浙江 瑞安 325200）

目的用高效液相色谱法测定阿加曲班注射液的含量。方法采用氰基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水-10%四丁基氢氧化铵-磷酸（700∶300∶13∶0.68），用氨溶液（1→20）调节pH值至6.5为流动相，流速为0.8 mL/min，检测波长257 nm，柱温为40 ℃。结果阿加曲班在10.1～151.6 μg/mL范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9998，平均回收率为99.65%，RSD=0.42%。结论该方法简便、快速、准确，可用于阿加曲班注射液的含量测定。

阿加曲班；高效液相色谱法；含量测定

阿加曲班是由日本三菱化学研究所研制合成的抗血栓药，于1990年2月最先上市，首先被应用于临床治疗周围动脉闭塞性疾病，然后开始将其用于治疗急性脑血栓形成，以及心肌梗死溶栓的辅助治疗，并用于在抗凝血酶（AT）缺乏患者进行血透时的抗凝处理。它是一种活性强、高度选择性的直接凝血酶抑制剂，具有起效迅速、疗效显著、副作用小、安全性高的优点。笔者采用高效液相法测定阿加曲班的含量，结果表明该方法专属性强、简便、快速、准确，可用于阿加曲班注射液的含量测定[1-3]。

1 材 料

1.1 仪器

日本岛津高效液相色谱仪（岛津LC-20AD），电子电平（Sartorius BP211D）。

1.2 药品与试剂

阿加曲班对照品（天津炜捷制药有限公司，批号：W3017-01.R.0）。阿加曲班注射液（浙江天瑞药业有限公司，批号:313071601313071602，313071603，规格：20 mL∶10 mg）。甲醇：色谱纯；四丁基氢氧化铵：分析纯；氨溶液：分析纯；磷酸：分析纯；水：自制注射用水。

2 方 法

2.1 色谱条件

色谱柱为氰基键合硅胶柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-水-10%四丁基氢氧化铵-磷酸（700∶300∶13 ∶0.68），用氨溶液（1→20）调节pH值至6.5；检测器为UV检测器（检测波长为257 nm）；进样量为20 µL；流速为0.8 mL/min；柱温为40 ℃。

2.2 测定方法

精密量取本品溶液2 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取阿加曲班对照品适量，精密称定，加流动相制成每1 mL中约含阿加曲班0.1 mg的溶液，同法测定。按外标法以峰面积计算[4-5]。

3 方法学考察

3.1 专属性

按处方取空白辅料适量（约相当于阿加曲班10mg），置25mL量瓶中，加流动相溶解定容，取2mL置10mL量瓶中，加流动相定容，作为空白辅料溶液。照拟定的测定法配制对照品溶液和样品溶液并分别取3种溶液各20 µL注入液相色谱仪，记录色谱图，HPLC图谱见图1。结果表明理论塔板数按阿加曲班计算为8250，空白辅料不干扰供试品溶液的测定，能够较好的满足本品的检测要求[6]。

3.2 线性关系试验

图1 各样品HPLC色谱图

取对照品加流动相溶解并稀释制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为贮备液。分别精密量取贮备液1 mL分别至50 mL、25 mL量瓶，加流动相稀释至刻度，摇匀，制备浓度为10%和20%溶液，另分别精密量取贮备液1.0、1.6、2.0、2.4、3.0 mL分别至10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别作为50%、80%、100%、120%、150%浓度溶液。精密量取上述溶液各20 µL分别注入液相色谱仪，记录色谱图，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程为：A=22357C-9808.7，r =0.9998。可见在10.1～151.6 μg/mL范围内，峰面积与浓度的线性关系良好。

3.3 溶液稳定性

取313071601批样品，照含量测定方法配制样品，在第0，1，2，4，6，8 h后测定峰面积，测得阿加曲班峰面积的相对标准偏差为0.27%，结果表明本品含量测定溶液在8 h内稳定，适合常规分析[7]。

3.4 方法精密度试验

3.4.1 重复性：取313071601批样品，照含量测定方法平行配制六份样品，测定样品中阿加曲班含量，结果平均含量为99.53%，RSD值为0.96%，说明本法重复性良好。

3.4.2 中间精密度：取313071601、313071602、313071603批样品，分别于不同时间，不同仪器，由不同的操作者试验，照前述含量测定方法依法测定样品含量，结果测得3批样品含量的相对标准偏差分别为0.75%，0.82%和0.79%，表明本品含量测定方法的重现性较好，准确可靠。

3.5 回收率

为了考察所选含量测定方法的准确度，进行回收率测定。本品回收率试验设计按含量测定浓度的80%、100%、120%进行试验。供试品溶液配制：取阿加曲班10.0、12.5和15.0 mg各三份，并按处方称取空白辅料（约相当于阿加曲班12.5 mg）9份，精密称定，分别置25 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，各取续滤液2 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。对照溶液的配制：取阿加曲班约10 mg，精密称定，置100 mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密量取供试品溶液和对照品溶液各20 µL注入液相色谱仪，记录色谱图。按外标法以峰面积计算回收率。

实验结果表明：采用高、中、低3个浓度各测定3次，平均回收率为99.65%，RSD值为0.42%，表明回收率较好，方法的准确度高。

3.6 耐用性

考察色谱条件进行微小变化，测定结果不受影响的程度，为方法可用于常规检查提供依据。本品耐用性考察主要针对本品色谱条件中流速、柱温、比例、pH和色谱柱进行试验。参考《中华人民共和国药典》2010年版二部附录ⅪⅩ A药品质量标准分析方法验证指导原则，对本测定方法进行以下耐用性试验。流速采用0.75、0.85和0.8mL/min，测得含量的RSD为0.87%；柱温采用35、40和45 ℃，测得含量的RSD为0.81%；流动相中对甲醇与水的比例调整为65∶35、70∶30和75∶25，测得含量的RSD为0.26%；pH采用6.0、6.5和7.0，测得含量的RSD为0.36%；色谱柱采用Kromasil CN、Diamonsil™ CN和月旭XB CN，测得含量的RSD为0.24%。说明阿加曲班含量检测方法的耐用性很好[8-9]。

3.7 样品含量测定

取本品连续试制的3批样品（313071601，313071602，313071603），采用高效液相色谱法测定阿加曲班的含量，测定结果分别为99.71%，99.74%，99.75%。

4 讨 论

本实验对高效液相色谱法测定阿加曲班注射液含量方法学进行了研究，结果表明：阿加曲班在10.1～151.6 μg/mL范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为A=22357C-9808.7，r=0.9998，平均回收率为99.65%，RSD=0.42%，耐用性好。结论：该方法专属性强、简便、快速、准确，可用于阿加曲班注射液的含量测定。

[1] 国家药典委员会.中国药典二部[S].北京:中国医药科技出版社,2010.

[2] 天津药物研究院药业有限责任公司阿加曲班注射液说明书(达贝)[S].

[3] 戴晓岚.阿加曲班联合依达拉奉治疗房颤合并脑栓塞的临床疗效评价[J].中国药房,2011,22(22):2075.

[4] 进口药品注射标准[S].JX20000058.

[5] 国家食品药品监督管理总局.YBH11142005阿加曲班[S].2005-05-10.

[6] 国家食品药品监督管理总局.YBH11142005阿加曲班注射液[S].2005-05-10.

[7] 国家食品药品监督管理总局.JX20090312阿加曲班注射液[S].2009-03-12.

[8] 郭旭光,郑子栋.RP-HPLC法测定阿加曲班注射液的含量[J].中国药房,2013,24(33):3141.

[9] 刘东,蒋新利.HPLC测定阿加曲班注射液的含量[J].食品与药品,2013,15(5):337.

R927.2

B

1671-8194（2014）16-0091-02