液相色谱-串联质谱法测定冬枣中多菌灵、啶虫脒残留量

2014-04-23宗万里

生命科学仪器 2014年6期

宗万里

（威海市产品质量监督检验所，山东威海264209）

多菌灵是一种广谱性杀菌剂，对多种作物由真菌（如半知菌、多子囊菌）引起的病害有防治效果，可用于叶面喷雾、种子处理和土壤处理等对人畜低毒，对鱼类毒性也低。啶虫脒是一种新型广谱且具有一定杀螨活性的杀虫剂，其作用方式为土壤和枝叶的系统杀虫剂。广泛用于水稻，尤其蔬菜、果树、茶叶的蚜虫、飞虱、蓟马、部分鳞翅目害虫等的防治，为低毒杀虫剂，但对人、畜有毒。目前我国国家标准[1]中对于多菌灵、啶虫脒在冬枣中的限量要求分别为小于等于0.5mg/kg和2mg/kg。检测食品中的多菌灵、啶虫脒主要有气相色谱法[2]、液相色谱法[3～7]、液质联用法[8～10]，本实验建立了使用液相色谱-三重四极杆质谱法对冬枣中的多菌灵、啶虫脒进行检测的方法。该方法在确保分析结果准确的同时，样品前处理简单快速，节省了检测成本与检测时间，适用于实验室中大批量的样品检测。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

甲醇：色谱纯，TEDIA 公司；甲酸：分析纯，≥98%，国药集团化学试剂有限公司；多菌灵标准溶液：100μg/mL，农业部环境保护科研监测所；啶虫脒标准溶液：100μg/mL，农业部环境保护科研监测所；实验用水为哇哈哈纯净水，1.25L/瓶。

0.002mol/L的乙酸铵水溶液制备方法是称取0.077g乙酸铵加入到500mL水中，经0.22μm水相滤膜过滤。

Ultimate 3000型高效液相色谱仪，Thermo fisher TSQ QUANTUM三重四极杆质谱检测器（配电喷雾离子源ESI）；Hypersil Gold型反相液相色谱柱（2.1×100mm，3μm），Thermo fisher公司；0.22μm有机相针管滤头, Agela 公司；漩涡振荡器：MS3 Digital，IKA公司；冷冻高速离心机，Neofuge 23R，上海力申科学仪器有限公司。

1.2 仪器条件

1.2.1液相色谱条件

色谱柱： C18柱：100×2.1mm(i,d), 3μm；

流动相：甲醇（A相）、0.002mol/L乙酸铵溶液（B相），梯度条件：0min～0.5min，A相保持10%，0.5 min～6.5min A相由10%增至90%； 6.5min～13.5min， A相保持90%；13.5min～14.0min A相减至10%；14.0min～17.5min A相保持10%。

流速：0.2mL/min。

1.2.2质谱参考条件

a）电离方式：电喷雾电离，正离子模式；

b）喷雾电压：3500kV；

c）鞘气（N2）压力：35arb；

d）辅助气（N2）流量：10 arb；

e）碰撞室（氩气）压力：1.5 m Torr；

f）扫描方式：选择反应监测（SRM）；

g）质谱divert valve状态：0min-8min处于Inject Waste状态，8min-10.5min处于Load Detector状态，10.5-17min处于Inject Waste状态；

h）碰撞能量如表1所示。

表1多菌灵及啶虫脒的离子碎片及碰撞能量Table. 1collision energy & product ions of Carbendazim and Acetamiprid

1.3 溶液配制

1.3.1标准溶液的制备

分别准确称取0.5mL多菌灵标准溶液及啶虫脒标准溶液至同一50mL容量瓶中，用甲醇定容，得1μg/mL的多菌灵及啶虫脒混合标准溶液。从1μg/mL的多菌灵及啶虫脒的混合标准溶液中吸取5mL加入到50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度得100ng/mL的多菌灵及啶虫脒的混合标准溶液。再从100ng/mL的多菌灵及啶虫脒的混合标准溶液中分别吸取0.5,1, 2, 4, 5mL加入到5个不同的50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得1,2,4,8,10.0ng/mL的多菌灵及啶虫脒的混合标准溶液。每个质量浓度取10μL注入液相色谱-串联质谱联用仪进行分析，绘制标准曲线。

1.3.2样品前处理

称取5.00g（精确至0.01g）的样品于50 ml离心中，试样用甲醇定容至15mL，摇匀，旋涡混合器提取2 min，高速冷冻离心机8000rpm离心5分钟（常温），吸取经0.22μm针头有机滤膜过滤的上清液10μL注入液相色谱-串联质谱仪进行分析。

2 结果与讨论

2.1 样品前处理

由于多菌灵、啶虫脒能够溶于甲醇、乙腈等极性有机溶剂，而且甲醇能与水较好互溶，本文采用甲醇直接浸泡提取冬枣中多菌灵、啶虫脒的残留量，由于二级质谱对于样品基质具有较好的抗干扰性，经过甲醇提取的样品处理液，经过过滤直接注入液相色谱-串联质谱仪中进行检测，处理过程简单且能保证样品检测的定性及定量要求。

2.2 色谱及质谱条件

本文采用反相色谱柱C18（100mm×2.1mm,3μm），在梯度洗脱条件下对多菌灵、啶虫脒进行分离，多菌灵、啶虫脒出峰时间为8～10.5分钟之间，多菌灵、啶虫脒峰型尖锐，流动相条件合适。在质谱检测器方面，利用质谱检测器自身方法优化功能，分别选出多菌灵母离子192以及啶虫脒母离子223.2的三个丰度最强的子离子，其中一个丰度最强的子离子设为定量离子，其余两个设为定性参考离子。然后利用工作站优化出三个子离子的最佳碰撞能量，碰撞能量如表1所示。

2.3 色谱图

在1.2色谱及质谱条件下，得到多菌灵、啶虫脒标准样品总离子流图，SRM质谱图、未知样品的总离子流图、加标未知样品的总离子流图，如图1～图4所示。加标样品谱图干净，多菌灵以及啶虫脒出峰良好，无干扰。在该色谱条件下，实验结果良好。

2.4 标准曲线和最低检出限

在实验条件下，以标准物峰面积为纵坐标，质量浓度x（μg·mL-1）为横坐标绘制标准曲线，得线性方程，以基线噪声3倍峰面积对应的质量浓度为检出限（S／N=3）[10]，回归方程、相关系数及检出限见表2。

表2 回归曲线的基本参数Table.2 Basic parameter of regression equation

2.5 精密度和加标回收实验

图1多菌灵以及啶虫脒标样在SRM方式下的总离子流图Fig.1TIC chromatogram of Carbendazim and Acetamiprid standard sample in SRM mode

图2多菌灵及啶虫脒标样的选择离子对质谱图（SRM）Fig.2mass spectrum of Carbendazim and Acetamiprid standard sample in SRM mode

取不含多菌灵、啶虫脒的冬枣样品进行加标回收实验，向5g样品中分别添加1000ng/mL多菌灵及啶虫脒混合标准溶液15,75,150μL，即样品中多菌灵、啶虫脒含量为分别为3,15,30μg/kg。按上述1.3.2样品处理方法进行样品处理。按1.2色谱及质谱条件进行测定，精密度、回收率计算结果见表2。由表2可知，采用本方法所得数据满足检测要求。

3 结论

图3未知样品SRM方式下的TIC色谱图Fig.3TIC chromatogram of unknown sample in SRM mode

图4加标未知样品SRM方式下的TIC色谱图Fig.4TIC chromatogram of unknown sample added with Carbendazim and Acetamiprid in SRM mode

通过实验建立了冬枣中多菌灵、啶虫脒含量的液相色谱-串联质谱检测方法，样品经过甲醇直接提取多菌灵、啶虫脒后注进液相色谱-串联质谱仪进行检测，通过质谱仪自带的divert valve分流流动相以降低对离子源以及质谱检测器的污染。该方法前处理简单，测试结果稳定且准确度较高，能够满足检测要求。适合大批量样品的快速检测，该方法能够为多菌灵、啶虫脒的检验与监测提供科学依据与技术支持。