京万红凝胶剂对大鼠神经变性型糖尿病足的影响*

刘玉璇，赵 宇，国大亮，陈 柳，刘文伟

（1.天津中医药大学，天津 300193；2.天津达仁堂京万红药业有限公司，天津 300112）

京万红凝胶剂对大鼠神经变性型糖尿病足的影响*

刘玉璇1，赵 宇2，国大亮1，陈 柳1，刘文伟2

（1.天津中医药大学，天津 300193；2.天津达仁堂京万红药业有限公司，天津 300112）

[目的]观察京万红凝胶剂对大鼠神经变性型糖尿病足的影响。[方法]采用神经变性型糖尿病足溃疡模型，观察京万红凝胶剂对模型大鼠的影响。[结果]1）采用京万红凝胶剂、油膏剂，重组人表皮生长因子分别给药，各给药组给药14 d后，给药各组与模型组相比，均有明显的好转。2）各给药组均有改善大鼠神经变性型糖尿足症状的趋势，病灶逐渐减小，炎症逐渐减轻，基本趋于正常。[结论]在该实验条件下，京万红凝胶剂与京万红油膏剂、重组人表皮生长因子具有相同的促进大鼠神经变性型糖尿足病灶愈合的作用。

京万红；凝胶剂；神经变性型；糖尿足

1 实验材料

1.1 实验动物 雄性Wistar大鼠：北京维通利华实验动物有限公司，合格证号SCXK（军）2007-004，体质量220～240 g。

1.2 实验试剂 1）链尿佐菌素（Sigma公司，货号：S0310）。2）柠檬酸（Sigma公司，货号：S1804-500G）。3）柠檬酸钠（Sigma公司，货号：C1909-500G）。4）京万红软膏（天津达仁堂京万红药业有限公司，批号：211485）。5）京万红凝胶剂（自制）。6）重组人表皮生长因子凝胶（中国华诺威基因药业有限公司，批号：20110905）。

1.3 实验仪器 PHS-3C型酸度计，萧山市分析仪器厂。

2 实验方法

2.1 大鼠糖尿病模型的复制 选用Wistar大鼠90只，雄性，体质量220～240 g，编为1～90号。造模前大鼠禁食不禁水24 h，造模时称量大鼠空腹体质量，据大鼠总体质量称量所需的链脲菌素（STZ），用配置好的无菌柠檬酸缓冲液（pH 4.35，酸度计测得）以1%浓度（质量分数）配制获得所需的STZ溶液，根据大鼠空腹体质量，以60 mg/kg体质量腹腔快速注射相应剂量的STZ（STZ称质量，配制，注射时注意避光，30 min内注射完毕）。1周后尾尖取血，用中生北控试剂公司提供的葡萄糖试剂盒测定空腹血糖，排除血糖值小于16.65 mmol/L的大鼠，血糖值达标的大鼠喂养1个月，期间保持足够的饮水量及饲料，每天清洁1次卫生，环境温度为（25±2）℃。

2.2 大鼠糖尿病足模型的复制 高糖Wistar大鼠在饲养1个月后，建立神经变性型糖尿病足溃疡模型。大鼠俯卧位，50 mg/kg戊巴比妥钠腹腔麻醉，沿坐骨神经走向切开长约1.5～2.0 cm的切口，分离皮下肌肉层，暴露坐骨神经。用中号止血钳在坐骨神经分叉处上方0.5 cm处夹持，满扣，1 min（钳压强度：钳子的第2段）。然后逐层缝合。

2.3 实验分组及给药 造模21 d后，待大鼠足部出现溃疡后，按照大鼠体质量、血糖及造模后瓦格纳分级结果，将大鼠按分层随机方法分为4组：糖尿病模型组（10只），京万红油膏剂（10只），京万红凝胶剂组（10只），重组人表皮生长因子组（rhEGF，10只）另外10只糖尿病正常组作为对照。给药剂量见表1。

各组大鼠足部于分组1 d后按表1剂量每天上午9∶00给药1次，给药14 d。换药前用温水清洁创面，擦干后给药，并用无菌纱布包扎。

表1 各组别给药剂量表Tab.1 Table of administration dosage in each group

2.4 大鼠体质量和血糖的测量 分别于分组前和给药14 d后对各组大鼠的体质量和血糖进行测量并记录结果。

2.5 瓦格钠分级 记录各组大鼠分组后，给药5 d后，10 d后，14 d后瓦格纳分级结果。分数代表了足部溃疡的程度，分数越小，足部损伤程度越小，越接近正常组织。

其三，从人均收入来看，我市人均生产总值、城市居民人均可支配收入、农村住户人均纯收入近年来都呈现上升趋势，但三者增长并不同步。人均生产总值增长快于城市居民人均可支配收入，城市居民人均可支配收入增长又快于农村住户人均纯收入，使居民难以充分享受经济增长带来的好处，也使城乡居民收入差距有进一步拉大的可能。

分级标准：0级：皮肤完整无开放性病灶，仅有肢端供血不足，皮肤冷凉呈暗红色伴有麻木、刺痛、灼痛，感觉迟钝或丧失，并有足趾或足畸形。1级：皮肤有开放性浅病灶，但未累及深部，如水泡、血泡、肿胀鸡眼或胼胝，及其他损伤所致的皮肤浅表溃疡。2级：感染皮损病灶已侵犯深部肌肉，脓性渗出物较多，但无肌腱、韧带破坏常表现为蜂窝组织炎,多发性脓灶或窦道形成,感染顺肌间隙扩展,形成足部贯通性溃疡。3级：肌腱韧带受损，蜂窝组织炎相互融合形成大脓腔，脓性物及坏死组织增多，但无明显骨质破坏。4级：严重感染导致骨质破坏、缺损、骨髓炎、骨关节破坏或假关节形成，部分肢端出现湿性或干性坏疽。5级：足大部或全部感染或缺血,致严重的湿性或干性坏死，肢端变黑、尸干，常波及踝关节和小腿，一般需截肢。

2.6 大体形态观察 分别于分组后和给药14 d后对各组大鼠足部进行观察。

2.7 统计学方法 应用SPSS 18.0统计软件进行数据处理，计量资料以均数±标准差（±s）表示，正态分布计量资料组间比较采用单因素方差分析（one－way ANOVA），偏态分布计量资料组间比较采用秩和检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 大鼠体质量和血糖的测定结果 各组大鼠的空腹血糖均在16.7mmol/L以上，并且分组后和给药14d后，各组大鼠的体质量和血糖均无统计学差异，表明各给药组无明显的降低血糖的作用。各组大鼠血糖和体质量测定结果见表2。

表2 大鼠体质量和血糖测定结果（±s）Tab.2 Determination results of body weight and blood glucose in rats（±s）

表2 大鼠体质量和血糖测定结果（±s）Tab.2 Determination results of body weight and blood glucose in rats（±s）

14 d后 分组后 给药14 d后糖尿病正常组 10 198.5±18.8 182.6±17.3 31.6±3.9 30.0±3.7糖尿病模型组 10 209.4±16.1 192.7±14.9 32.6±3.3 31.0±3.1京万红油膏剂 10 210.7±19.5 193.9±18.0 33.5±3.1 31.8±2.9京万红凝胶剂组 10 190.6±18.0 175.3±16.6 30.1±4.0 28.6±3.8重组人表皮生长组10 211.1±15.3 194.2±14.1 32.3±3.7 30.7±3.6组别 n体质量（g） 血糖（mmol/L）分组后 给药

3.2 瓦格纳分级的结果 由表3可以看出，分组后，各给药组间足部损伤程度一致，给药14d后，给药组病灶基本愈合，糖尿病模型组多数出现严重感染如大脓腔或部分肢端出现断肢或坏死。

表3 瓦格纳分级结果（±s）Tab.3 Results of Wagner classification（±s） 分

表3 瓦格纳分级结果（±s）Tab.3 Results of Wagner classification（±s） 分

注：与糖尿病正常组比较，*P＜0.05；与糖尿病模型组相比较，＃P＜0.05。

组别糖尿病正常组糖尿病模型组京万红油膏剂京万红凝胶剂组重组人表皮生长组n 10 10 10 10 10分组1 d后 给药14 d后0 0 1.32±0.18* 2.89±0.39* 1.35±0.13* 0.62±0.39*＃1.21±0.16* 0.58±0.38*＃1.29±0.15* 0.57±0.42*＃

3.3 大体观察的结果 见图1～5。

由图可见，随着给药天数的增多，糖尿病模型组的感染病灶已侵犯深部肌肉组织，坏死组织增多，见图2，而各药组均有改善症状的趋势，病灶逐渐减小，炎症逐渐减轻，基本趋于正常，见图3～5。

图1 正常组Fig.1 Control group

4 小结

各组大鼠的空腹血糖均在16.7 mmol/L以上，并且分组后和给药14 d后，各组大鼠的体质量和血糖均无统计学差异，表明各给药组无明显降低血糖的作用。

瓦格纳分级的结果显示，分组后，各给药组间足部损伤程度一致，给药14 d后，给药各组与模型组相比，均有明显的好转。

从足部大体观察可以看出，随着给药天数的增多，模型组的感染病灶已侵犯深部肌肉组织，坏死组织增多，而各药组均有改善症状的趋势，病灶逐渐减小，炎症逐渐减轻，基本趋于正常。

图2 糖尿病模型组Fig.2 Diabetic model group

图3 京万红组Fig.3 Jingwanhong group

图4 京万红凝胶组Fig.4 Jingwanhong gel group

图5 重组人表皮生长因子组Fig.5 Human epidermal grouth factor group

5 讨论

糖尿病足的发病率占糖尿病患者的49.5%[7-8]，是糖尿病大血管并发症之一，发生糖尿病足的患者约有5%～10%需要截肢。目前主要认为是由于神经病变、血管病变及感染等3种因素共同作用所致。其中，周围神经病变的发生率约为30%～45%，下肢最为常见。血管病变是糖尿病并发足坏疽的重要病理基础，在免疫力低下及易受外伤等因素的作用下极易感染，糖尿病足患者感染严重程度在临床上与截肢（趾）率呈正相关[9-10]。

中医学认为，糖尿病足属于“脱疽”范畴，常因脏腑功能失调，肝脾肾亏虚，加之外邪侵袭而致。脾气不健，化生不足，气血亏虚，不能充养四肢，肾阳不足，不能温煦四肢，导致热盛肉腐终成溃疡，坏疽[11-13]。京万红原剂型为复方纯中药油膏剂，主要成分为地榆、当归、黄连、黄柏、红花、黄芩、栀子、川芎等30余种中药，以清热解毒代表方黄连解毒汤为基础[14]，又加入具有活血止痛，清热解毒，化瘀通络功效的多味中药。治法体现了中药外治法治疗糖尿病足的4个原则，即清热解毒法[15-16]，活血通络法[17-18]，温通经脉法[19]和祛腐生肌法[20]，临床使用取得了很好的祛腐生肌，减轻疼痛的效果[2-3，21]。

本次两种剂型影响大鼠神经变性型糖尿病足溃疡模型的实验中发现，京万红凝胶剂与京万红油膏剂、重组人表皮生长因子[22]具有相似的促进大鼠神经变性型糖尿足病灶愈合的作用，为该药新剂型的开发提供了实验依据。

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Effect of Jingwanhong gel on neural degeneration in rats with diabetic foot

LIU Yu-xuan1，ZHAO Yu2，GUO Da-liang1，CHEN Liu1,LIU Wen-wei2
（1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193,China；2.Tianjin Darentang Jingwanhong Pharmaceutical CO., Ltd.，Tianjin 300112,China）

[Objective]To observe the effect of Jingwanhong gel on neural degeneration in rats with diabetic foot.[Methods]We used a model with neural degeneration of diabetic foot ulcer to observe the effect of Jingwanhong gel in the diseased rats.[Results]1）Jingwanhong gel,ointment and recombinant human epidermal growth factor were administered separately.Fourteen days later,the disease was better in the treatment groups compared with model group significantly.2）The treatment group had improved neural degeneration in rats with type 2 diabetes foot symptoms.Lesions were gradually decreased.Inflammation was reduced gradually.The pathologic change was tended to normal.[Conclusion]Under the condition of this experiment,Jingwanhong gel and Jingwanhong ointment,recombinant human epidermal growth factor have the same effect in promoting the healing of rat neural degeneration and diabetic foot lesions.

Jingwanhong;gel;nerve degeneration;diabetic foot

R587.2

A

1672-1519（2014）10-0617-04

2013-04-22）

（本文编辑：马 英，高 杉）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.10.11

科技部科技人员服务企业行动资助项目（2009 GJA10033）。

刘玉璇（1969-），男，博士，教授，从事中药制药、制药工程研究。