甘露醇注射液中结晶经加温溶解后的质量评价

2014-04-13徐艳艳丁培志季丽杭傅军霞杨君燕何伟珍

浙江医学 2014年13期

徐艳艳丁培志季丽杭傅军霞杨君燕何伟珍

徐艳艳丁培志季丽杭傅军霞杨君燕何伟珍

目的加温溶解甘露醇注射液中的结晶并对其进行质量评价。方法随机抽取含甘露醇结晶的甘露醇注射液3批，分别将其置于热水器的顶部，待结晶完全溶解后取下。通过酸度计测定3批供试品的pH值，显微计数法检查不溶性微粒，灯检法检查可见异物，高效液相色谱法（HPLC）测定甘露醇含量等检查方法对供试品溶液进行质量评价。结果3批供试品的pH值分别5．70± 0．21、5．50±0．28和5．50±0．16，符合甘露醇注射液的pH值标准（pH4．5～6．5）。不溶性微粒检查结果示供试品溶液的不溶性微粒数符合质量标准。可见异物检查示3批供试品溶液中未发现有异物，仅其中3瓶带微量白点，可见异物检查符合质量标准。HPLC法测得3批供试品溶液中甘露醇相对于标示量的百分含量分别为98．0%、97．9%和99．5%，甘露醇含量符合质量标准。结论加温是溶解甘露醇结晶的有效方法，结晶溶解后的甘露醇注射液符合该药品质量标准。

甘露醇注射液甘露醇结晶 pH值高效液相色谱法

甘露醇是良好的利尿剂，具有降低颅内压、眼内压、组织脱水等作用，也可用作片剂的赋形剂、固体或液体制剂的稀释剂[1]，可以提高麻醉效率[2]。20%甘露醇注射液是临床治疗脑水肿、颅内压增高及高眼压的首选药物[3]。因为是过饱和溶液，在贮藏，运输及低温度环境下极易析出结晶，而应用含结晶的甘露醇注射液具有引起静脉炎或血栓的风险[4]。加温可溶解甘露醇注射液在存放过程中析出的结晶。目前临床上常见的利用加温溶解甘露醇结晶的方法有：高压蒸气锅消毒时的蒸汽热溶解甘露醇结晶、开水器持续散热的热量溶解甘露醇结晶、可调式温控暖垫的热量溶解甘露醇结晶[5-7]。此外，还有恒温箱溶解甘露醇结晶、太阳能溶解甘露醇结晶、电磁炉溶解甘露醇结晶、微波溶解甘露醇结晶、热水浴溶解甘露醇结晶等方法的报道[8]。

在甘露醇注射液市场供应短缺而临床上又确需使用的情况下，护理人员常采用加温法溶解甘露醇结晶。为评价甘露醇结晶经加温溶解后的质量，本文将通过pH值测定、可见异物检查、不溶性微粒检查、含量测定等方面对其进行质量评价，为临床甘露醇注射液的使用提供参考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 实验试剂甘露醇注射液3批（批号：12110201、12120304、13012303，规格：250ml：甘露醇50g）由浙江康乐药业股份有限公司提供；甘露醇对照品由中国药品生物制品检定所提供；水为重蒸馏水，其他试剂为分析纯。

1.1.2 实验器材 LC-10ATvp型高效液相色谱仪由日本岛净公司提供；强酸性阳离子交换树脂（钙型）（Sugar Pak I 300×6.5mm）色谱柱由美国Waters公司提供；RI-320示差折光检测器由大连依利特公司提供；KQ-100型超声波清洗器由昆山市超声仪器有限公司提供；AL204型电子天平由上海梅特勒-托利多仪器有限公司提供；SHZ-D（Ⅲ）循环水式真空泵由河南省巩义市英峪予华仪器厂提供；YB-Ⅱ型澄明度检测仪由上海荆和分析仪器有限公司提供；PHS-25酸度计由上海精密科学仪器有限公司提供；YS100型尼康光学显微镜由南京江南永新光学有限公司提供；微孔滤膜由江苏无锡市华润净化滤材厂提供；层流净化台由苏州净化设备厂提供。

1.2 甘露醇结晶加温溶解方法随机抽取3批含有甘露醇结晶的甘露醇注射液（受试品），参考文献方法[6]，将其置于热水器的顶部，一次放置10瓶，待结晶完全溶解后（一般约3h）取下。析出甘露醇结晶的甘露醇注射液经加温复溶后的溶液，定义为供试品。加温溶解前确认受试品含甘露醇结晶，在有效期范围内，且瓶体无裂缝。

1.3 pH值测定参照2010版药典二部附录ⅥH pH值测定法[9]，随机抽取3批受试品，每批各3瓶，待甘露醇结晶溶解后放冷，使用经标定过的仪器测定每瓶供试品溶液的pH值。

1.4 不溶性微粒检查参照2010版药典二部附录ⅨC不溶性微粒检查法第二法——显微计数法[9]，取3批结晶复溶后的供试品，用水将容器外壁洗净，在层流净化台上小心翻转20次，使溶液混合均匀，立即小心开启容器，移取供试品溶液25ml，沿滤器内壁缓缓注入经预处理的滤器（滤膜直径25μm）中。静置1min，缓缓抽滤至滤膜近干，再用微粒检查用水25ml，沿滤器内壁缓缓注入，洗涤并抽滤至滤膜近干，然后用平头镊子将滤膜移置平皿上，放大100倍进行显微测量，分别测定有效滤过面积上最长粒径＞10μm和25μm的微粒数，每个样品连续测试5次，取平均值。不溶性微粒数的质量标准：“标示装量为100ml或100ml以上的静脉用注射液，除另有规定外，每1ml中含10μm以上（≥10μm）的微粒不得超过12粒，含25μm以上（≥25μm）的微粒不得超过2粒，判为符合规定”。

1.5 可见异物检查参照2010版药典二部附录ⅨH可见异物检查法[9]，按注射剂可见异物检查要求采用灯检法检查，取3批供试品，每批各3瓶，擦净透明塑料容器外壁污痕，集中放置。采用日光灯，光照度为2 000～3 000lx，背景为不反光黑色，人眼距离供试品20～25cm，在避光室内或在暗处进行目检，按直、横、倒三步法旋转检视。判断标准：除特殊规定品种外，未发现有异物或仅带微量白点者作合格论。

1.6 含量测定参照2010版药典二部附录V D高效液相色谱法（HPLC）测定含量[9]。色谱条件与系统适用性试验：用强酸性阳离子交换树脂（钙型）（Sugar Pak I 300×6.5mm）为色谱柱，以LC-10ATvp型高效液相色谱仪，水为流动相，流速为0.5ml/min，柱温：（85±1）℃；RI-320示差折光检测器为检测器，检测温度为55℃。另取甘露醇与山梨醇各0.5g，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，甘露醇与山梨醇色谱峰之间的分离度应＞2。同时对测定方法进行方法学考察（线性关系、精密度和回收率试验）。（1）线性关系采用精密称取经105℃干燥至恒重的甘露醇对照品适量，加水溶解并定量制成1ml中含5mg的溶液，分别精密量取相应的量，注入液相色谱仪分析测定。（2）精密量取甘露醇对照品溶液，连续进样5次，每次20μl，按上述色谱条件测定，记录峰面积。（3）回收率试验。取甘露醇对照品适量，分别配制含甘露醇为处方比例的80%、100%、120%3种不同浓度的溶液各3份（标号A、B、C），照上述含量测定法，分别精密量取各20μl注入高效液相色谱仪，记录色谱图并计算回收率。

2 结果

2.1 pH值测定及不溶性微粒检查结果通过酸度计测得3批供试品溶液的pH值，显微计数法测得3批供试品中不溶性微粒粒径＞10μm和25μm的微粒数，结果见表1。

表1 3批甘露醇结晶复溶后的供试品pH值及不溶性微粒数

由表1可见，所有供试品溶液的pH值均符合甘露醇注射液的pH值标准（pH4.5～6.5）。3批供试品溶液的不溶性微粒数符合质量标准。

2.2 可见异物检查结果 3批供试品溶液未发现有明显异物，仅其中3瓶带微量白点，结果表明甘露醇注射液结晶经加温复溶后的可见异物检查是合格的。

2.3 含量测定精密量取供试品溶液适量（约相当于甘露醇5g），加水溶解并定量稀释制成每1ml中含5mg的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图（见图1）；另取甘露醇对照品，同法测定，按外标法以峰面积计算。

图1 空白辅料（含EDTA钙钠）（A）、对照品（B）、供试品（C）HPLC色谱图

2.3.1 线性关系测定以甘露醇对照品的进样量（X）为横坐标，峰面积值（Y）为纵坐标，作图，R2=0.9991，回归方程：Y=81.022X+11.725（n=5），结果表明在0.25～5mg/ ml范围内线性关系良好。

2.3.2 精密度试验相对标准偏差（RSD值）为0.55%，说明仪器的精密度良好。

2.3.3 回收率试验结果如表2。

表2 回收率试验结果

2.3.4 重复性试验取供试品（批号：12110201）5瓶，照上述含量测定方法分别测定每瓶供试品的含量，测得甘露醇平均含量97.8%，RSD为0.76%。

2.3.5 样品的甘露醇含量测定取3批供试品及对照品溶液，照上述含量测定法分别测定甘露醇的含量，结果批号为12110201的供试品甘露醇含量为标示量的98.0%，批号12120304供试品甘露醇含量为标示量的97.9%，批号13012303供试品甘露醇含量为标示量的99.5%，对照品中甘露醇含量为98.5%。

3 讨论

20%甘露醇高渗溶液是临床上用于利尿、脑水肿、颅内高压和青光眼治疗的输液制剂[10]。因为是过饱和溶液，在贮藏、运输过程中极易析出结晶，常给临床应用带来许多困难。据不完全统计，三级医院的药房1年会积存几百瓶有结晶的甘露醇。根据甘露醇的熔点高、性质稳定的特点，护理人员在甘露醇注射液紧缺，而临床上又急需使用时，常采用加温方法使甘露醇结晶复溶后再用。至目前为止，各式的加温溶解方法已报道许多，但通过加温方法使甘露醇结晶复溶后的注射液质量评价却未见报道。本文通过对3批供试品的pH值测定、可见异物检查、不溶性微粒检查、含量测定等检测指标对甘露醇结晶经加温复溶后的注射液质量进行初步评价，结果表明结晶复溶后的甘露醇注射液符合该药品的质量标准。3批供试品的pH值符合甘露醇注射液的pH值标准（pH4.5～6.5）。可见异物检查结果示3批供试品溶液中未发现有异物，仅其中3瓶带微量白点，甘露醇注射液的可见异物检查符合质量标准。3批供试品溶液的不溶性微粒数检查结果符合“标示装量为100ml或100ml以上的静脉用注射液，每1ml中含10μm以上（≥10μm）的微粒不得超过12粒，含25μm以上（≥25μm）的微粒不得超过2粒”的质量标准。

采用HPLC法进行甘露醇含量测定，用强酸性阳离子交换树脂（钙型）（Sugar Pak I 300×6.5mm）为色谱柱，根据强酸性阳离子交换树脂（钙型）的使用要求，在蒸馏水中加少量EDTA钙钠（一般浓度为50mg/L）以避免树脂中钙离子的流失。由图1可知，各图中的负峰应为EDTA钙钠的峰。同时，在应用HPLC法进行甘露醇含量测定时，因为柱温、池温的温差大[柱温（85±1）℃，检测池温度40℃]直接影响样品的分析，所以系统安装时，需要尽可能地将柱、检测池间的连线放置在柱箱内，避免连续流出的样品经过检测池时因温差大影响分析结果。本次实验建立的HPLC方法用于甘露醇溶液的含量测定具有操作简便、线性关系良好、重现性好、精密度高、回收率高等优点，含量测定结果显示3批供试品的甘露醇含量均符合质量标准。

综上所述，通过随机抽取3批含结晶的甘露醇注射液经加温溶解后进行初步的质量评价，结果表明加温溶解后的甘露醇注射液符合该药品的质量标准，通过加温溶解甘露醇结晶的方法是有效的。但若是结晶经加温溶解结果不理想的，即可见异物检查结果不佳或是肉眼可见悬浮物、不溶性微粒的应避免使用。同时在甘露醇注射液临床供应紧缺，需应用加热方法溶解甘露醇结晶时，建议一次性处理3瓶以上有结晶的甘露醇注射液，以免药品质量问题贻误临床治疗。

[1]Burness C B,Keating G M．Mannitol dry powder for inhalation:in patients with cystic fibrosis[J]．Drugs,2012,72（10）:1411-1421．

[2]Smith S,Reader A,Drum M,et al．Anesthetic efficacy of a combination of 0．5 M mannitol plus 127．2 mg of lidocaine with 50 μg epinephrine in inferior alveolar nerve blocks:a prospective randomized,single-blind study[J]．Anesth Prog,2013,60(1):3-10．

[3]Grape S,Ravussin P．PRO:osmotherapy for the treatment of acute intracranial hypertension[J]．J Neurosurg Anesthesiol,2012, 24(4):402-406．

[4]李民,马瑜,谢康．浅析甘露醇注射液易结晶的原因及解决办法[J]．中国临床医药研究杂志,2006,12(162):81．

[5]孟素红．一种甘露醇结晶的溶解方法[J]．中国实用护理杂志,2005,21 (1):45．

[6]刘云华．巧用开水器散发的热量溶解甘露醇结晶[J]．中国实用护理杂志,2007,23(31):76．

[7] 严芳琴．可调式温控暖垫防止甘露醇结晶[J]．护理学杂志,2010,25(6): 57-58．

[8]尤炜．20%甘露醇注射液结晶溶解方法研究进展[J]．当代医学,2012, 18(19):23-24．

[9] 国家药典委员会．中国药典[S],二部,北京:化学工业出版社,2010:附录29、44、71、76．

[10]Sakellaridis N,Pavlou E,Karatzas S,et al．Comparison of mannitol and hypertonic saline in the treatment of severe brain injuries[J]．J Neurosurg,2011,114（2）:545-548．

Quality evaluation of mannitol injection after crystallization dissolved by heating

ObjectiveTo evaluate the quality of mannitol injection after the crystallization was dissolved by heating．MethodsThree batches of crystallized mannitol injection were selected randomly．The samples of selected batches were heated on the top of the water heater to completely dissolve the crystal．pH value was measured by acidity meter,insoluble particles were check by microscopic counting method,visible foreign matters were check by lamp test,and content of mannitol was determination by high performance liquid chromatography(HPLC)．ResultsThe pH value of three batches was 5．70±0．21,5．50±0．28 and 5．50±0．16,respectively,which met the pH standard of mannitol injection(4．5～6．5)．Insoluble particles met quality standards by examination．Visible foreign matter was not found in 3 batches of test samples,and there was only little white dots in 3 bottles．The amount of mannitol measured by HPLC was 98．0%was 97．9%and 99．5%of the labeled value in 3 batches test samples，respectively,which met the quality standards of mannitol injection．ConclusionHeating is the effective method to dissolve the mannitol crystallization．The mannitol injection after crystallization dissolved by heating can meet the drug quality standard．

Mannitol Injection Mannitol crystalpH value High performance liquid chromatography