多波长 RP-HPLC法同时测定肥儿丸中木香烃内酯、 去氢木香内酯、 去氢二异丁香酚

刘晓哲

（河南省南阳市药品检验所， 河南 南阳 473059）

多波长 RP-HPLC法同时测定肥儿丸中木香烃内酯、 去氢木香内酯、 去氢二异丁香酚

刘晓哲

（河南省南阳市药品检验所， 河南 南阳 473059）

目的 建立同时测定肥儿丸 （煨肉豆蔻、木香等） 中木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚的方法。方法 采用 HPLC法， C18色谱柱； 以乙腈-水 （70 ∶30） 为流动相； 体积流量 1.0 mL/min； 检测波长 225 nm （ 木香烃内酯、 去氢木香内酯）， 274 nm （去氢二异丁香酚）。 结果 根据回归方程， 3 种成分线性范围分别为木香烃内酯10.834 ～216.68 μg/mL， r2=0.999 6； 去氢木香内酯 9.506 ～190.12 μg/mL， r2=0.999 4； 去氢二异丁香酚 5.782 ～115.64 μg/mL， r2=0.998 9。 平均回收率分别为木香烃内酯 98.4%， RSD为 0.66% （n=6）； 去氢木香内酯 99.1%，RSD为 1.16% （n=6）； 去氢二异丁香酚 98.1%， RSD为 1.25% （n=6）。 结论 该方法经济适用， 操作简便、 准确，重复性好，可用于肥儿丸的质量控制。

高效液相色谱；肥儿丸；木香烃内酯；去氢木香内酯；去氢二异丁香酚

肥儿丸收载于 《中国药典》 2010 年版一部［1］，由煨肉豆蔻、 木香、六神曲 （炒）、 炒麦芽、 胡黄连、槟榔、使君子仁共七味药组成，处方来源于《太平惠民和剂局方》 卷十，具有健胃消积、驱虫的功效。临床上用于小儿消化不良，虫积腹痛，面黄肌瘦，食少腹胀泄泻诸症。方中肉豆蔻具有温中行气，涩肠止泻的功能；木香具有行气止痛，健脾消食的功效。 目前该制剂的质量标准［1］只有几味药的显微及薄层鉴别，尚无对药味进行定量的方法。有报道，用高效液相色谱法测定肥儿丸中肉桂酸［2］， 但同时测定肥儿丸中木香烃内酯、 去氢木香内酯、去氢二异丁香酚尚未见文献报道。本实验以去氢二异丁 香酚［3-9］、 木香烃 内酯、 去氢木香内酯［10-15］为指标成分， 采 用多波 长 RP-HPLC法同时测定，该方法操作简便、准确、重复性好，为肥儿丸质量标准的提升提供了依据。

1 仪器与试药

Agilent1200 液相色谱仪， 配有 1200 系统 （ 四元泵、自动进样器、柱温箱、可变波长紫外检测器） ， Agilent色 谱 化 学 工 作 站； Sartorious BP211D电子天平；WT-1200 超声波清洗器 （济宁万通超声仪器设备厂）。

去氢二异丁香酚 （ 批号 111838-201102）、 木香烃内酯 （批号 111524-201107）、去氢木香内酯（批号 111525-201008） 对照品均购自于中国食品药品检定研究院。

肥儿丸 （北京同仁堂股份有限公司同仁堂制药厂，批 号 0013317、 1013040、1013255）；方中七味药材为市售并经本所中药室鉴定。

乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 乙腈-水 （70 ∶30） 为流动相， 采用等度洗脱； Welchrom C18色谱柱 （4.6 mm×250 mm， 5 μm）； 柱温为室温； 体积流量 1.0 mL/min；检测波长为 225 nm （0 ～12.5 min） （木香烃内酯、去氢木香内酯）， 274 nm （12.5 ～50 min） （去氢二异丁香酚）；进样量10 μL。色谱图见图 1。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 分别精密称取减压干燥至恒重的木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚对照品适量， 置同一量瓶中， 加 70%乙腈配制成质量浓度分别为 0.541 7、0.475 3、 0.289 1 mg/mL的混合对照品贮备溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取肥儿丸样品，剪碎，混匀， 取约1 g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加70%的乙腈25mL， 密塞， 称定质量，浸泡过夜， 超声提取 30 min， 放冷至室温， 再称定质量，用 70%的乙腈溶液补足减失的质量， 摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过， 取续滤液， 作为样品溶液。

2.3 阴性样品溶液的制备 分别取不加煨肉豆蔻、木香的空白样品按照供试品溶液项下的制备方法，制成阴性对照品溶液，即得。

2.4 线性关系考察 精密量取木香烃内酯、 去氢木香内酯、 去氢二异丁香酚对照品贮备液 1、 2、5、10、20 mL置 50 mL量瓶中， 用 70%乙腈稀释至刻度， 制成标准系列溶液。 按照 “2.1” 项色谱条件测定， 分别进样5 μL， 测得峰面积的积分值。以对照品质量浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。结果：木香烃内酯回归方程为A=12.495C-18.258， 相关系数 r2=0.999 6， 进样量在 10.834 ～216.68 μg/mL范围内呈现良好线性； 去 氢 木 香 内 酯 回 归 方 程 为 A=21.12C-30.361， 相关系数 r2=0.999 4， 进样量在 9.506 ～190.12 μg/mL范围内呈现良好线性； 去氢二异丁香酚回归方程为 A=93.274C+61.402， 相关系数r2=0.998 9， 进样量在 5.782 ～115.64 μg/mL范围内呈现良好线性。

图1 对照品 （A）、 供试品 （B）、 缺煨肉豆蔻阴性供试品 （C）、 缺木香阴性供试品 （D） HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatogram s of reference substances（ A） 、 sam Ple（ B） 、 negative sam Ple w ithou t roasted M yristicae Semen（ C） and negative samPle without Aucklandiae Radix （ D）

2.5 稳定性试验 取同一肥儿丸供试品溶液 （批号 0013317）， 按照 “2.1” 项下色谱条件， 分别于0、 2、 4、 6、 8 h 进样， 测定峰面积值， 计算得木香烃内酯 RSD为 0.91%、去氢木香内酯 RSD为0.83%、 去氢二异丁香酚 RSD为 1.37%， 证明该溶液在8 h内稳定性良好。

2.6 精密度试验 取同一肥儿丸供试品溶液 （批号 0013317），按照 “2.1” 项下色谱条件， 连续进样 6 次， 进样量 10 μL， 测定峰面积， 计算得木香烃内 酯 RSD为 0.86%、 去 氢 木 香 内 酯 RSD为0.62%、 去氢二异丁香酚为 0.99%， 表明该方法精密度良好。

2.7 重 复 性 试 验 取 同 一 批 肥 儿 丸 （ 批 号0013317） 6 份， 按照供试品溶液制备项下方法平行制备6 份供试品溶液， 按照 “2.1” 项下色谱条件测定， 进样量 10 μL， 将测得的木香烃内酯、 去氢木香内酯、去氢二异丁香酚的峰面积分别代入“2.4” 项下的回归方程计算。 结果含木香烃内酯平均质量分数为 0.393 mg/g， RSD为 0.81%； 去氢木香内酯平均质量分数为 0.285 mg/g，RSD为0.94%； 去氢二异丁香酚平均质量分数为 0.199 mg/g， RSD为 1.17%。 表明该 方法有 较 好的重复性。

2.8 加样回收试验 称取已知含有量的肥儿丸（批号 0013317） 6 份， 精密称取 0.5 g（约相当于木香烃 内 酯 0.196 mg/g； 去 氢 木 香 内 酯 0.143 mg/g； 去氢二异丁香酚 0.099 mg/g）， 分别置 25 mL量瓶中，精密加入对照品溶液 （木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚的质量浓度分别为0.054 17、 0.047 53、 0.028 91 mg/mL） 3 mL， 加入 70%乙腈 20 mL， 放置过夜， 超声提取 30 min，放冷至室温， 用 70%乙腈稀释至刻度， 摇匀， 用0.45 μm微孔滤膜滤过， 作为样品溶液。 按照“2.1” 项下色谱条件进行测定， 将测得的木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚的峰面积分别代入 “2.4”项下的回归方程计算。 结果见表1～3。

2.9 样品测定 取肥儿丸 3 批， 按 “2.2.2” 项下的制备方法制备样品溶液，按照 “2.1” 项下色谱条件测定，将测得的木香烃内酯、去氢木香内酯、 去氢二异丁香酚的峰面积分别代入 “2.4” 项下的回归方程计算，结果见表4。

表1 木香烃内酯的加样回收率试验结果Tab.1 Results of recovery tests for costunolide

表2 去氢木香内酯的加样回收率试验结果Tab.2 Results of recovery tests for dehydrocostus lactone

表3 去氢二异丁香酚的加样回收率试验结果Tab.3 Resu lts of recovery tests for dehydrodiisoeugenol

表 4 肥儿丸中有效成分的测定结果 （n=3）Tab.4 Determ ination of active com Ponents in Feier Pills（n=3）

3 讨论

3.1 提取方法的选择 使用乙醇、 甲醇、 乙腈、70%乙腈冷浸过夜后超声提取 30 min、 60min 几种方法进行提取比较，结果显示 70%乙腈冷浸过夜的方法有利于样品很好溶散，目标成分有效溶出，故选择 70%乙腈冷浸过夜后超声 30 min 提取。

3.2 流动相的选择 分别采用乙腈-水 （70 ∶30）、乙腈-0.3%磷酸溶液 （70 ∶30） 及甲醇-水 （70 ∶30） 为流动相， 结果分离效果均良好。 因乙腈-水（70 ∶30） 简便易行，故选乙腈-水为流动相。

3.3 吸收波长的选择 用紫外分光光度计分别对对照品溶液进行 200 ～300 nm波长范围的扫描， 木香烃内酯、 去氢木香内酯在 225 nm处有最大吸收；去氢二异丁香酚在 274 nm波长处有最大吸收。为了使被检测成分更好地检出， 利用 Agilent 1200 紫外检测器可变波长功能， 选择 225 nm作为木香烃内酯和去氢木香内酯的检测波长， 274 nm作为去氢二异丁香酚的检测波长。

3.4 对待侧成分干扰的考察 取不加煨肉豆蔻、木香的空白样品按照供试品溶液项下的方法，制成溶液，按 “2.1” 项下色谱条件测定， 均不干扰木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚的测定；取煨肉豆蔻、木香的药材按照供试品溶液项下的方法，分别制成木香样品溶液和煨肉豆蔻样品溶液， 按 “2.1”项下色谱条件测定， 木香样品溶液除木香烃内酯、去氢木香内酯未检出其他色谱峰，煨肉豆蔻样品溶液除去氢二异丁香酚，其他色谱峰均与木香烃内酯、去氢木香内酯、去氢二异丁香酚分离良好，不干扰目标成分的测定。

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Sim ultaneous determ ination of costunolide， dehydrocostus lactone， dehydrodiisoeugenol in Feier Pills by m ultiwavelength RP-HPLC

LIU Xiao-zhe
（Nanyang Institute for Drug Control， Nanyang 473059， China）

AIM To establish a method for simultaneously determining the levels of costunolide， dehydrocostus lactone， and dehydrodiisoeugenol in Feier Pills（ Myristicae Semen， Aucklandiae Radix， etc.） .METHODS The quantitative analysiswas carried outon a column of Kromasil C18by HPLC， by using amobile phase of acetonitrile-water under a flow rate of1.0 mL/min.225 nm for costunolide and dehydrocostus lactone， 274 nm for dehydrodiisoeugenol as the detection wavelength.RESULTS The linear ranges of costunolide， dehydrocostus lactone， and dehydrodiisoeugenol fell within the ranges of 10.834-216.68 μg/m L， 9.506-190.12 μg/mL，5.782-115.64 μg/mL， respectively.The three components showed good linear correlations（r2= 0.999 6， 0.999 4， 0.998 9）.The recoverieswere98.4%for costunolide， 99.1%for dehydrocostus lactone，98.1%for dehydrodiisoeugenol， respectively.The relative standard deviations were 0.66%， 1.16%， and 1.25%， respectively.CONCLUSION The method is simple， economical， accurate， reproducible and convenient for the quality control over Feier Pills.

HPLC； Feier Pills；costunolide； dehydrocostus lactone； dehydrodiisoeugenol

R927.2

： A

： 1001-1528（2014）01-0098-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.01.024

2013-01-07

刘晓哲 （1966—）， 女， 副主任药师， 研究方向： 药品检验。 Tel： 13683779534