人参皂苷对胃癌术后化疗患者血清VEGF的影响

谢晓东，朱永康

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，约占消化道肿瘤的62%，是世界范围内致死率居第二位的恶性肿瘤。在我国，胃癌发病率和死亡率均很高，2012年新发胃癌患者占全球胃癌二分之一多。由于胃癌早期症状不明显，且对胃癌开展早期筛查的国家很少，大部分患者明确诊断时已为晚期或有远处转移，手术多无法实现根治性切除，手术后易出现转移复发，患者的远期生存率低。众多研究表明，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)在胃癌发生、发展过程中起到重要作用。人参皂苷具有多靶点抗肿瘤血管生成作用，具有选择性地抑制肿瘤细胞浸润和转移的作用。本研究纳入胃癌术后化疗加人参皂苷、单纯化疗患者以及门诊浅表性胃炎患者，通过比较不同组别术前、术后血清VEGF的检测值，评价人参皂苷对胃癌患者血清VEGF的影响，为进一步提高胃癌综合疗效提供新的治疗思路。

1 资料与方法

1.1 方法设计 选取2009年2月至2013年12月江苏省中医院收治的胃癌患者94例，其中男63例，女31例，平均年龄48.00岁。采取前瞻性研究方法，42例术后采用FOLFOX4方案化疗，为对照组，以14天为1个周期；52例患者术后采用FOLFOX4化疗+口服参一胶囊(主要成分为人参皂苷Rg3，吉林亚太制药有限公司生产，批号20010103，具体用法：20 mg，每天2次，连续服用30d为1个疗程)方案进行治疗，为实验组。患者术前均未接受化放疗；术后病理组织学分型:高、中分化组(乳头状腺癌和管状腺癌) 共38例, 低分化组(黏液腺癌、印戒细胞癌、低分化腺癌和未分化癌) 共56例。手术结束后对胃癌标本进行淋巴结解剖、取材、分站, 按照美国癌症联合委员会(AJCC) 公布的TNM分期标准(2002年, 第6版) 进行术后病理分期。T分期: Tis 4例, T1 21例, T2 17例, T3 48例, T4 4例, N分期: N0 34例, N1 40例, N2 14例, N3 6例。另纳入门诊浅表性胃炎患者30例为正常组，平均年龄37.43岁。分别在术前、术后第1、3、6个月这4个时间点对正常组、对照组、实验组的血清VEGF进行检测，比较不同组别在相同时间点血清VEGF浓度、同一组别在不同时间点的血清VEGF浓度，以及对照组和实验组术后6个月肿瘤复发情况、复发患者与未复发患者血清VEGF浓度。通过病历记录、门诊随诊以及电话等方式进行随访，以进行病情记录和血液标本采集。

1.2 主要实验试剂和器材

采血管(BD Vacutainer，英国)、人VEGF ELISA 检测试剂盒(R&D，美国)、离心机(BECKMAN，美国)、恒温摇床(江苏太仓科教仪器厂)、移液器(Eppendorf，德国)酶标仪(BIORAD，德国)。

1.3 标本的采集、处理与检测

实验组、对照组患者于入院次日清晨空腹、正常组患者随机清晨空腹抽取外周静脉血10 ml，室温放置30～60 min后3 000 r/min离心10 min，抽取上层血清放至2 ml Eppendort管中，于-80 ℃冰箱保存待测。采用双抗体夹心ELISA法进行检测。

1.4 随访方法

所有病例均进行了随访，在术前、术后1、3、6个月分别进行标本采集和病情记录，以病例记录、门诊、电话等方式进行。通过肿瘤标记物、CT、胃镜检查确诊复发病例。

1.5 病例的脱落与处理

当受试者脱落后，可以采取预约家访、电话、邮件等各种方式与受试者取得联系，询问理由，记录末次服药的时间，完成现有的评估项目。因药物不良反应或治疗无效而退出试验的病例，根据受试者具体病情，按照诊疗规范选择治疗方案。凡是入选的患者，无论是否脱落，均需记录和保留病例实验资料。

1.6 统计学方法

使用t检验或非参数检验对不同组别和各组不同时间点的血清VEGF浓度进行比较，采用χ2检验或确切概率法比较对照组及实验组术后6个月肿瘤复发情况。使用SPSS19.0统计分析软件进行分析。采取α=0.05的双侧检验。

2 结果

2.1 纵向比较——各组不同时间点VEGF浓度比较(表1) 对照组VEGF浓度均高于正常组(P<0.05)。术前、术后1个月、术后3个月：实验组血清VEGF浓度均高于正常组(P<0.05)；术后6个月：实验组血清VEGF浓度与正常组比较，差异无统计学意义(P>0.05)；术前、术后1个月、术后3个月：实验组与对照组的血清VEGF浓度未见显著差异，但实验组血清VEGF浓度较对照组下降的更为明显；术后6个月：实验组血清VEGF浓度显著低于对照组(P<0.05)。

表1 不同时间点在各组间的VEGF比较

2.2 横向比较——不同组别VEGF浓度比较(表2) 正常组：在各时间点均无显著差异；对照组：术后1个月较术前显著下降(P<0.01)，术后3个月较术后1个月有进一步下降趋势，但差异不显著(P>0.05)，而术后6个月较术后3个月则有轻度升高趋势，但未见显著差异(P>0.05)；实验组：术后1个月较术前显著下降(P<0.01)，术后3个月较术后1个月进一步下降(P<0.05)，术后6个月较术后3个月又进一步下降(P<0.05)，且基本降至正常人群水平，与同期正常组无显著差异(P>0.05)。

表2 各组在不同时间点的VEGF比较

2.3 复发情况比较 对照组术后6个月复发6例，复发率14.29%，实验组术后6个月复发3例，复发率5.77%，实验组复发率显著低于对照组(P<0.05)。对照组及实验组所有复发患者术后6个月的血清VEGF浓度均值为(363.14±149.48 pg/ml)，而所有未复发患者的血清VEGF浓度均值为(138.47±84.92 pg/ml)，复发患者显著高于未复发患者(P<0.01)。各组在不同时间点VEGF变化趋势图见图1。

图1 各组在不同时间点VEGF变化趋势图

3 讨论

胃癌是人类常见恶性肿瘤之一，其发病率在全世界范围内一直居高不下。尽管全球各国都对胃癌的研究投入巨大的人力和物力，胃癌仍然是第二大肿瘤相关死亡病因，其死亡率仅次于肺癌、肝癌。我国是胃癌高发病率、高致死率的国家，全球每年新发病例近百万，其中50%以上在中国[1]，全球因胃癌死亡80万人中仅中国就占35%[2-3]。现有的研究表明VEGF是目前已知的作用最强、特异性最高的血管生成调控因子[4]，肿瘤组织及患者血清中VEGF的表达对判断肿瘤生物学行为、病情进展、治疗效果及术后生存期等方面具有重要价值。在多种恶性肿瘤的相关研究中，如肝癌、乳腺癌、神经胶质瘤等均发现VEGF 的高表达与肿瘤的生长、转移及浸润有关[5-6]。胃癌患者血清VEGF 水平也同样升高，这在中晚期胃癌中表现尤为明显。故由此认为VEGF参与了胃癌的发生发展及转移，并与肿瘤的浸润和转移密切相关[7-8]。

在本研究中证实了胃癌患者血清内VEGF浓度显著高于非胃癌患者，提示检测胃癌患者血清VEGF浓度可作为诊断指标之一。而术后患者血清VEGF浓度较术前显著下降，并且随化疗的进行，血清VEGF浓度进一步下降，而术后复发患者的血清VEGF浓度则显著高于未复发患者。这些均提示血清VEGF浓度可以作为胃癌诊断、疗效评估、预后及复发情况评价的最有力的指标之一。

内皮抑素是目前活性最强的血管生成抑制剂，人参皂苷Rg3是在内皮抑素N 端添加了9个独特氨基酸序列，其药效及稳定性均得到明显提高，可抑制脑部肿瘤患者血清可溶性VEGF 的表达水平。其主要机制是通过抑制肿瘤的血管形成, 诱导细胞凋亡，具有多靶点抗肿瘤血管生成作用，从而具有抗肿瘤作用[9]。有研究发现，采用联合口服人参皂苷Rg3治疗方案能明显降低浅表性膀胱癌和晚期大肠癌患者的VEGF水平[10-11]。另有实验发现人参皂苷Rg3能明显抑制肿瘤生长和转移，如肝癌[12]、乳腺癌[13]、肺癌[14]、膀胱癌[15]、卵巢癌[16]等，人参皂苷Rg3通过促进肿瘤细胞凋亡在抑制肿瘤细胞生长、转移起着重要作用[17]。但人参皂苷Rg3在胃癌治疗方面的研究鲜见报道。本研究中实验组患者术后血清VEGF浓度进行性下降，程度较对照组更为明显，术后6个月复发率显著低于对照组，提示人参皂苷Rg3能够通过抑制肿瘤的血管形成, 诱导细胞凋亡，抑制胃癌转移与复发。

综上所述, 人参皂苷Rg3可明显降低胃癌患者术后血清VEGF浓度，抑制胃癌细胞的生长, 并呈浓度、时间依赖关系,并降低胃癌术后患者的复发率，有助于提高胃癌化疗的疗效。人参皂苷Rg3 是防治胃癌复发与转移的可行性途径之一。通过分析人参皂苷Rg3的生物活性，研究者已经发现它具有多靶点、高活性的特性[10-17], 因此进一步研究拓宽其抗肿瘤谱, 采取单药、联合用药的方法预防和治疗肿瘤将会有广阔的前景。

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