连翘子药材质量标准研究

2014-04-01魏惠华黄孝春贾建华玄振玉

中成药 2014年4期

魏惠华，郭静，黄孝春，贾建华，玄振玉

(苏州玉森新药开发有限公司，江苏苏州 215123)

连翘为木犀科植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果实，为中医常用的清热解毒药，历来被视为疮家要药，其性微寒，味苦。具有清热解毒、消肿散结之功能。秋季果实初熟尚带绿色时采收，除去杂质，蒸熟，晒干，习称“青翘”，筛取种子，习称“连翘心，连翘子”。中医用于清心热、治疗热病、心烦、不寐等症。《温病条辨》卷一记载的清宫方及其加减方治疗太阴温病，神昏谵语者。现代临床报道使用连翘心治疗呃逆[1]。对连翘子化学成分的研究，目前尚不多见，但已有报道连翘子中连翘酯苷的量明显高于青翘及老翘[2-11]。连翘子中油类成分α-蒎烯、ß-蒎烯、松油烯-4-醇、α-柠檬烯等和果皮挥发油所含化学成分基本一致，种子中挥发油含有量高于果皮，约为果皮的10倍[12-15]。《中国药典》2010年版一部收载的连翘药材分为青翘和老翘两种[16]，连翘按青翘采收，基本能保留连翘子，而按老翘采收，则其中的连翘子往往被当作杂质而除去，这导致了连翘子这一宝贵药材资源的大量浪费。

本实验为了更好地控制连翘子质量，对连翘子的显微鉴别、薄层鉴别和成分测定进行了研究。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Sartorius BS110S分析天平(万分之一级)；硅胶G薄层预制板(青岛海洋化工厂)；美国Agilent系列HPLC色谱仪包括Agilent 1100 series，G1314 VWD检测器，Agilent色谱工作站；756 CRT紫外-可见分光光度计；BM 1000显微镜(江南永新光学有限公司)；SX2-4-10型箱式电阻炉(上海亚明热处理设备公司)。

1.2 试药甲醇(HPLC，TEDIA公司出品)；冰醋酸，石油醚、乙酸乙酯、丙酮(分析纯，中国医药集团上海化学试剂公司)；连翘酯苷A对照品(中国食品药品检定研究院，批号111810-201102，纯度为93.2%)；连翘子均购自安徽省亳州市厚朴药业有限责任公司，经上海中医药大学可燕老师鉴定为木犀科植物连翘Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的种子。

2 方法与结果

2.1 显微鉴别本品横切面：种皮表皮为1列细胞组成，细胞方形或四方形，排列整齐，外壁稍增厚，内含油滴；下层为数列不规则薄壁细胞。胚乳细胞含糊粉粒和脂肪油滴。粉末棕褐色。种皮表皮细胞表面观细胞呈多角形，垂周壁平直，略增厚，内含油滴；横切面观细胞呈正方形或长方形，长70～150 μm，宽70～98 μm，排列整齐。胚乳细胞含糊粉粒和脂肪油滴。见图1。

图1 连翘子横切面图及粉末图

2.2 薄层色谱鉴别取本品粉末1.5 g，加石油醚(30～60 ℃)50 mL，加热回流1 h，滤过，弃去滤液，药渣挥干，加50%甲醇40 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加50%甲醇10 mL使溶解，作为供试品溶液。另取连翘酯苷A对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2010年版一部附录IV B)试验，吸取上述2种溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-水(5∶5∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。见图2。

1.连翘酯苷A 2～11.连翘子药材

2.3 挥发油、水分、灰分、浸出物检查根据《中国药典》2010年版一部附录XD挥发油测定甲法、IX H水分测定第二法、IX K灰分测定法，X A浸出物测定法对10批连翘子药材进行检查，结果见表1。

表1 不同批连翘子挥发油、水分、灰分、浸出物检查

2.4 连翘酯苷A测定

2.4.1 色谱条件 Global-SP-120-5-C18-BP色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；以甲醇-水-冰醋酸(33∶67∶0.2)为流动相；检测波长为332 nm；体积流量为1.0 mL/min。理论塔板数按连翘酯苷A峰计算应不低于8 000。

2.4.2 对照品溶液的制备取干燥至恒重的连翘酯苷A对照品10 mg，精密称定，置25 mL量瓶中，加50%甲醇溶解，定容摇匀；精密量取上述母液1 mL置10 mL量瓶中，加50%甲醇定容摇匀，即得。

2.4.3 供试品溶液的制备取本品粉末约1.5 g，精密称定，加石油醚50 mL，加热回流1 h，滤过，弃去滤液，药渣挥干，精密加入50%甲醇40 mL，称定质量，加热回流1 h，放冷，加50%甲醇补足减失的质量，滤过，精密量取续滤液1 mL至25 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。

2.4.4 系统适用性试验在上述确立的色谱条件基础上，分别精密吸取“2.4.2”项下对照品溶液及“2.4.3”供试品溶液各10 μL，对照品溶液连续进样5针，计算结果表明，5次峰面积的RSD为0.2%，拖尾因子为1.15。理论塔板数按连翘酯苷A计算为10 021，分离度10.66。

2.4.5 专属性试验分别取空白溶剂、对照品、连翘子供试品注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件，进样10 μL，测定，结果溶剂无干扰，方法专属性好，见图3。

1.连翘酯苷A

2.4.6 线性关系精密称取连翘酯苷A对照品10.02 mg，置100 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取0.50、1.0、2.0、4.0、6.0、8.0 mL，分置于10 mL量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，以峰面积积分值为纵坐标，连翘酯苷A对照品进样量为横坐标进行回归计算，得回归方程为y=1 463.4x-11.586，r=0.999 9，连翘酯苷A在0.046 7～0.747 1 μg范围内线性关系良好。

2.4.7 稳定性试验精密吸取供试品溶液10 μL，分别于0、4、8、12、24 h进样，记录峰面积，RSD为0.5%，表明供试品溶液在24 h内稳定，能满足测定要求。

2.4.8 重复性试验平行取同批样品6份(批号20120325)，按供试品制备方法处理，测定。结果连翘酯苷A平均含有量为2.93%，RSD为0.9%。表明本方法的重复性良好。

2.4.9 中间精密度试验使用不同型号的高效色谱仪，由不同人员于不同时间进行试验。实验结果表明，12份样品测定结果的RSD为1.0%，表明精密度良好。

2.4.10 加样回收率试验取本品粉末(批号20120325，连翘酯苷A含有量为2.93%)9份，每份0.75g，分别加入对照品约17.6、22.0、26.4mg各3份，按“2.4.3”项下制备供试品溶液。按上述色谱条件测定连翘酯苷A，计算准确度，本方法平均回收率为100.3%，RSD为1.9%。结果表明，准确度良好，符合定量测定的要求，见表2。