柴黄双解颗粒薄层色谱鉴别研究
2014-03-31于远洋贾天柱
于远洋 贾天柱
[摘要] 目的 建立柴黄双解颗粒薄层色谱鉴别方法，为制定其质量标准提供实验依据。 方法 采用薄层色谱鉴别法鉴别方中黄芩、大黄、青蒿、大青叶和草果。 结果 薄层色谱鉴别中色谱斑点清晰，阴性空白无干扰。 结论 所建立的鉴别方法专属性强，方法可靠，可作为柴黄双解颗粒的定性控制方法。
[关键词] 柴黄双解颗粒；黄芩；大黄；青蒿；大青叶；草果；薄层色谱
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2014）01-120-03
柴黄双解颗粒由大黄、黄芩、青蒿、大青叶、草果等9味中药组成，是用于外感发热、表里俱热之痹证的中药复方制剂。经多年临床试验，其疗效确切值得进一步推广，因此我们参照有关文献[1-8]用薄层色谱法对处方中大黄、黄芩、青蒿、大青叶和草果进行鉴别研究；表明该鉴别专属性强，重现性好，无干扰，可用于质量控制。
1 实验材料
1.1 仪器
电子分析天平（赛多利斯），三用紫外分析仪（上海光谱仪器有限公司）硅胶G板、高效硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂）。
1.2 试剂与药品
柴黄双解颗粒（自制），甲醇、磷酸均为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司），水为纯化水，其余试剂均为分析纯，黄芩甙对照品（批号：110715-201016），靛兰对照品（批号：0716-200005），大黄对照药材（批号：0902-200006）、青蒿对照药材（批号：1016-9902）、草果对照药材（批号：121550-200501）。
2 方法与结果
2.1 大黄的鉴别
采用中国药典2010年版一部大黄鉴别项下的薄层色谱法进行鉴别，斑点不明显，现采用普通硅胶G板，石油醚（30～60℃）-乙酸甲酯-甲酸（15∶5∶1）为展开剂。特征斑点明显。阴性无干扰。
2.1.1 供试品溶液的制备 取本品1.5g，加水10mL水充分溶解，置圆底烧瓶中，加盐酸1mL，水浴回流30min，立即冷却，置分液漏斗中，用乙醚分2次提取，每次15mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿1mL使溶解。
2.1.2 阴性空白液的制备 取缺大黄处方药，同工艺制备；同供试品方法处理。
2.1.3 阳性对照液的制备 取大黄对照药材0.1g，加甲醇20mL，浸泡1h，滤过，取滤液5mL，置圆底烧瓶中，水浴蒸干，残渣加水10mL，加盐酸10mL，同供试品方法处理。
2.1.4 薄层鉴别 吸附剂：硅胶G薄层板；展开剂：石油醚（30～60℃）-乙酸甲酯-甲酸（15∶5∶1）；点样量：各2μL；显色：紫外灯（365nm）下检视。置氨气中熏后，日光下检视。结果：（1）供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点。阴性无此斑点。（2）供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同的5个红色斑点。阴性无此斑点。即方法重复性良好，阴性液无干扰。见图1。
1.阴性空白；2.阳性对照；3.111101供试品；
4.111102供试品；5.111103供试品
2.2 青蒿的鉴别
采用高效硅胶G板、石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯（6∶3.5）为展开剂，效果理想。
2.2.1 供试品溶液的制备 取本品3g加水10mL水充分溶解，精密吸取5mL，置分液漏斗中，用氯仿萃取2次，每次15mL，合并氯仿液，蒸干，残渣加无水乙醇2mL使溶解。
2.2.2 阳性对照液的制备 取青蒿对照药材2g，加水40mL，同流30min，滤过，取滤液5mL，同供试品方法处理。
2.2.3 阴性空白液的制备 取缺青蒿处方药，同工艺制备，同供试品方法处理。
2.2.4 薄层鉴别 吸附剂：高效硅胶G薄层板；展开剂：石油醚（60～90℃）-醋酸乙酯（6∶3.5）；点样量：各2μL；展距：6cm；显色：紫外灯（365nm）下检视。结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同的蓝色荧光斑点，阴性无此斑点。即方法重复性良好，阴性液无干扰。见图2。
2.3 黄芩的鉴别
由于黄芩甙极性较大，甲醇溶液点样量为5μL时拖尾严重，分离效果不好，现改为1μL，吸附剂为高效硅胶GF254薄层板。
2.3.1 供试品溶液的制备 取本品3g加水10mL水充分溶解，精密量取2mL，加甲醇4mL，摇匀，滤过。
2.3.2 阳性对照液的制备 取黄芩甙对照品，加甲醇制成每1mL含1mg的溶液。
2.3.3 阴性空白液的制备 取缺黄芩处方药，同工艺制备，同供试品方法处理。
2.3.4 薄层鉴别 吸附剂：高效硅胶GF254薄层板；展开剂：醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1）；点样量：各1μL；展距：6cm；显色：10%三氯化铁乙醇溶液。结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同的蓝黑色斑点，阴性无此斑点。即方法重复性良好，阴性液无干扰。见图3。
2.4 大青叶的鉴别
因大青叶中的靛玉红含量太少斑点不清晰，故鉴别大青叶中的靛蓝。
2.4.1 供试品溶液 取本品6g加水20mL水充分溶解，精密量取15mL，加氯仿15mL萃取一分离氯仿层，水浴蒸干，残渣加无水乙醇1mL使溶解。
2.4.2 阳性对照液的制备 取靛兰对照品加氯仿制成每1mL含0.5mg的溶液。
2.4.3 阴性空白液的制备 取缺大青叶处方药，同工艺制备，同供试品方法处理。
2.4.4 薄层鉴别 吸附剂：高效硅胶G薄层板；展开剂：甲苯-苯-醋酸乙酯-氯仿（2∶2∶1∶4）；点样量：各5μL；展距：4cm；结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同的蓝色斑点，阴性无此斑点。即方法重复性良好，阴性液无干扰。见图4。
2.5 草果的鉴别
2.5.1 供试品溶液的制备 取本品6g加水20mL水充分溶解，精密量取10mL，用石油醚（30～60℃）萃取两次，每次15mL，合并石油醚，水浴上浓缩至1mL。
2.5.2 阳性对照液的制备 另取草果对照药材2g，加水30mL，回流30min，滤过，滤液用石油醚（30～60℃）萃取2次，每次30mL，合并石油醚液，水浴上浓缩至1mL。
2.5.3 阴性空白液的制备 取缺草果处方药，同王艺制备，同供试品方法处理。
2.5.4 薄层鉴别 吸附剂：硅胶G薄层板；展开剂：甲苯-醋酸乙酯（9∶4）；点样量：各1μL；展距：7cm；显色：喷以10%的磷铝酸乙醇液，在105℃烘约5min。结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同的暗紫色斑点，阴性无此斑点。即方法重复性良好，阴性液无干扰。见图5。
2.6 柴胡、金银花、蒲公英、重楼鉴别
经实验，相互间有干扰，鉴别方法有待进一步研究。
3 讨论
鉴于方中药味较多，为了达到使标准更加稳定可靠的目的，本实验选取了黄芩，大黄，青蒿、大青叶
和草果5味药材进行鉴别来控制本方的质量，能够多方面综合反映药品的内在质量，本实验在黄芩，青蒿、大青叶和草果的定性鉴别中，采用《中国华人民共和药典》2010版定性鉴别，供试品中大黄的鉴别采用普通硅胶G板，使用石油醚（30～60℃）-乙酸甲酯-甲酸（15∶5∶1）为展开剂，特征斑点明显，阴性无干扰。经多次实验证明以上辨别方法灵敏，简便易行，重现性好，可作为其质量控制方法。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部） [S].北京：中国医药科技出版社，2010：20，22，184，205，222，243，263，282，331.
[2] 徐先祥，夏伦祝.薄层扫描法测定肝豆灵片中大黄素的含量[J].安徽医药，2005，10（1）：37-38.
[3] 汤新兰.牛黄解毒片中大黄鉴别方法的探讨[J].海峡药学，2008，20（3）：86-87.
[4] 杨晓娟.健胃丸中白芍、黄芪、苦参的薄层色谱鉴别[J].辽宁中医杂志，12005，32（6）：588.
[5] 蔡清宇，王敏，郝特.柴桂解表颗粒的薄层色谱鉴别[J].海军总医院学报，2008，21（2）：50-51.
[6] 张贵君.常用中药鉴定大全[M].哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1997：466-467.
[7] 李光喜.青梅感冒冲剂中的五指柑和青蒿的薄层色谱鉴别[J].广东药学院学报，2004，2（20）：104-105.
[8] 梁威，刘元，文志云，等.TLC法定性鉴别清火片中3味中药[J].中国民族民间医药，2009，15（1）：10-11.
（收稿日期：2013-10-22）
2.5 草果的鉴别
2.5.1 供试品溶液的制备 取本品6g加水20mL水充分溶解，精密量取10mL，用石油醚（30～60℃）萃取两次，每次15mL，合并石油醚，水浴上浓缩至1mL。
2.5.2 阳性对照液的制备 另取草果对照药材2g，加水30mL，回流30min，滤过，滤液用石油醚（30～60℃）萃取2次，每次30mL，合并石油醚液，水浴上浓缩至1mL。
2.5.3 阴性空白液的制备 取缺草果处方药，同王艺制备，同供试品方法处理。
2.5.4 薄层鉴别 吸附剂：硅胶G薄层板；展开剂：甲苯-醋酸乙酯（9∶4）；点样量：各1μL；展距：7cm；显色：喷以10%的磷铝酸乙醇液，在105℃烘约5min。结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同的暗紫色斑点，阴性无此斑点。即方法重复性良好，阴性液无干扰。见图5。
2.6 柴胡、金银花、蒲公英、重楼鉴别
经实验，相互间有干扰，鉴别方法有待进一步研究。
3 讨论
鉴于方中药味较多，为了达到使标准更加稳定可靠的目的，本实验选取了黄芩，大黄，青蒿、大青叶
和草果5味药材进行鉴别来控制本方的质量，能够多方面综合反映药品的内在质量，本实验在黄芩，青蒿、大青叶和草果的定性鉴别中，采用《中国华人民共和药典》2010版定性鉴别，供试品中大黄的鉴别采用普通硅胶G板，使用石油醚（30～60℃）-乙酸甲酯-甲酸（15∶5∶1）为展开剂，特征斑点明显，阴性无干扰。经多次实验证明以上辨别方法灵敏，简便易行，重现性好，可作为其质量控制方法。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部） [S].北京：中国医药科技出版社，2010：20，22，184，205，222，243，263，282，331.
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[4] 杨晓娟.健胃丸中白芍、黄芪、苦参的薄层色谱鉴别[J].辽宁中医杂志，12005，32（6）：588.
[5] 蔡清宇，王敏，郝特.柴桂解表颗粒的薄层色谱鉴别[J].海军总医院学报，2008，21（2）：50-51.
[6] 张贵君.常用中药鉴定大全[M].哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1997：466-467.
[7] 李光喜.青梅感冒冲剂中的五指柑和青蒿的薄层色谱鉴别[J].广东药学院学报，2004，2（20）：104-105.
[8] 梁威，刘元，文志云，等.TLC法定性鉴别清火片中3味中药[J].中国民族民间医药，2009，15（1）：10-11.
（收稿日期：2013-10-22）
2.5 草果的鉴别
2.5.1 供试品溶液的制备 取本品6g加水20mL水充分溶解，精密量取10mL，用石油醚（30～60℃）萃取两次，每次15mL，合并石油醚，水浴上浓缩至1mL。
2.5.2 阳性对照液的制备 另取草果对照药材2g，加水30mL，回流30min，滤过，滤液用石油醚（30～60℃）萃取2次，每次30mL，合并石油醚液，水浴上浓缩至1mL。
2.5.3 阴性空白液的制备 取缺草果处方药，同王艺制备，同供试品方法处理。
2.5.4 薄层鉴别 吸附剂：硅胶G薄层板；展开剂：甲苯-醋酸乙酯（9∶4）；点样量：各1μL；展距：7cm；显色：喷以10%的磷铝酸乙醇液，在105℃烘约5min。结果：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同的暗紫色斑点，阴性无此斑点。即方法重复性良好，阴性液无干扰。见图5。
2.6 柴胡、金银花、蒲公英、重楼鉴别
经实验，相互间有干扰，鉴别方法有待进一步研究。
3 讨论
鉴于方中药味较多，为了达到使标准更加稳定可靠的目的，本实验选取了黄芩，大黄，青蒿、大青叶
和草果5味药材进行鉴别来控制本方的质量，能够多方面综合反映药品的内在质量，本实验在黄芩，青蒿、大青叶和草果的定性鉴别中，采用《中国华人民共和药典》2010版定性鉴别，供试品中大黄的鉴别采用普通硅胶G板，使用石油醚（30～60℃）-乙酸甲酯-甲酸（15∶5∶1）为展开剂，特征斑点明显，阴性无干扰。经多次实验证明以上辨别方法灵敏，简便易行，重现性好，可作为其质量控制方法。
[参考文献]
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[4] 杨晓娟.健胃丸中白芍、黄芪、苦参的薄层色谱鉴别[J].辽宁中医杂志，12005，32（6）：588.
[5] 蔡清宇，王敏，郝特.柴桂解表颗粒的薄层色谱鉴别[J].海军总医院学报，2008，21（2）：50-51.
[6] 张贵君.常用中药鉴定大全[M].哈尔滨：黑龙江科学技术出版社，1997：466-467.
[7] 李光喜.青梅感冒冲剂中的五指柑和青蒿的薄层色谱鉴别[J].广东药学院学报，2004，2（20）：104-105.
[8] 梁威，刘元，文志云，等.TLC法定性鉴别清火片中3味中药[J].中国民族民间医药，2009，15（1）：10-11.
（收稿日期：2013-10-22）
