5种食物对小鼠接触性炎症反应及血清IL－4和IL－17的影响

李 婷 胡 阳陈向明 张海清 俞爱华 王国江

5种食物对小鼠接触性炎症反应及血清IL－4和IL－17的影响

李 婷 胡 阳∗陈向明 张海清 俞爱华 王国江

目的: 明确香菇、辣椒、带鱼、羊肉和海虾5种食物对慢性变应性接触性皮炎(CACD)小鼠模型炎症反应及血清IL－4和IL－17表达的影响。方法: 36只小鼠用2，4－二硝基氟苯诱导建立CACD模型，5种食物煎煮后灌胃，对照组予纯水灌胃。测量每组耳厚度和耳重量并用ELISA检测血清IL－4和IL－17水平。结果: 与对照组相比，辣椒和羊肉明显增加耳厚度、耳重量和血清IL－17水平(P＜0.05)；带鱼和海虾对小鼠耳厚度和耳重量无明显影响(P＞0.05)，但显著下调血清IL－4水平(P＜0.05)；香菇对各项指标均无影响(P＞0.05)。结论: 辣椒和羊肉可能通过上调血清IL－17水平加重CACD小鼠模型炎症反应。

慢性变应性接触性皮炎； 耳厚度； 耳重量； 细胞因子

中医将容易激发宿疾复发或加重现有疾病的食物称为“发物”，且十分重视对“发物”的忌口，但“发物”忌口常受西医质疑。香菇、辣椒、带鱼、羊肉和海虾是常用食物，同时也是中医传统认为的“发物”。1本实验观察其对慢性ACD小鼠模型的影响，为临床过敏性患者忌口提供实验依据。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 实验动物为6～8周龄清洁级，体重18～22 g的雌性BALB/C小鼠，由上海斯莱克动物中心提供，实验动物合格证号:scxk(沪)2008－0016。在一定的温度和湿度环境中，光照12 h，黑暗12 h，标准饲料喂养1周后进行实验。2，4二硝基氟苯购自上海化学试剂公司，丙酮购自上海试剂厂。小鼠IL－4和IL－17 ELISA试剂盒购自美国R＆D公司(批号20121102)。电子分析天平(FA1004)购自上海精密科学仪器有限公司，直径8 mm的圆形皮肤打孔器购于上海市医疗器械公司，数显游标卡尺购自上海量具刃具厂，酶标仪(型号ELX－800)购自BIO－TEK公司。香菇、辣椒、带鱼、羊肉和海虾各500克，分别加纯水煎煮并浓缩至2 g/mL，置4℃保存，5天内用完，灌胃前加热至25℃。

1.2 方法

1.2.1 建立CACD小鼠模型 参照文献，2第1次涂药前24 h(第0天)，小鼠腹部剃毛，面积约3 cm2，实验第1天在去毛部位涂0.5%DNFB(溶剂为丙酮∶橄榄油＝4∶1的混合液)20μL致敏，实验第6天、第13天、第20天和第27天在小鼠右耳内外侧涂0.2%DNFB 10μL各1次，共4次激发。

1.2.2 实验分组及喂食发物 36只小鼠致敏后随机分成6组，分别为香菇组、辣椒组、带鱼组、羊肉组、海虾组及对照组，每组6只，从第26天开始，分别对发物各组灌胃对应食物煎煮液；对照组予纯水灌胃，每日2次，每次量以0.2 m L/10 g计算。另有6只健康小鼠不做任何处理，作为空白组。第29天处死各组小鼠取材备用。

1.3 观察指标及方法

1.3.1 用电子数显卡尺测量小鼠左、右耳中部的厚度，每只耳朵测量3次，取平均值，计算左右耳厚度差。

1.3.2 耳重量 处死小鼠后，用直径8 mm的打孔器，分别钻取小鼠左、右耳中部的组织，用电子天平称重，计算左右耳重量差。

1.3.3 细胞因子 眼眶采血法取小鼠血液1 mL，凝血后离心分离血清，使用酶免疫法测定血清细胞因子，检测步骤按试剂盒说明书进行，将反应板放入酶标仪于450 nm波长处测各孔吸光值，通过标准曲线计算各孔IL－4和IL－17的浓度值(单位为pg/mL)。

1.4 统计学方法 采用SPSS 16.0统计软件进行one－way ANOVA分析，所有数据采用¯x±s表示，以P＜0.05表示有统计学意义。

2 结果

2.1 第4次激发后48 h，肉眼观察小鼠右耳皮肤炎症反应明显，表现为红肿、糜烂、渗出、结痂。

2.2 各组小鼠耳厚度及耳重量 辣椒组和羊肉组的耳厚度差和耳重量差明显高于对照组(P＜0.05)。其余各组与对照组之间无统计学差异(P＞0.05)，见表1。

表1 各组耳厚度差和耳重量差的比较

2.2 各组小鼠血清IL－4和IL－17水平 对照组、香菇组、辣椒组、带鱼组、羊肉组、海虾组和空白组的IL－4的水平分别为171.50±3.30、176.09±5.86、177.23± 4.80、163.50±3.32、166.11±1.98、161.49±4.78和137.74±9.28；IL－17的水平分别为78.11±2.93、80.78 ±4.43、87.59±4.49、76.52±1.99、90.66±0.47、75.70± 4.06和63.00±2.35。与空白组比较，各组的血清IL－4和IL－17水平均显著升高(P＜0.05)。与对照组比较，辣椒组和羊肉组IL－17水平显著升高(P＜0.05)，IL－4水平无明显差异(P＞0.05)；带鱼组和海虾组IL－4水平明显下降(P＜0.05)，IL－17水平无明显差异(P＞0.05)；香菇组的IL－4和IL－17水平均无明显差异(P＞0.05)。

3 讨论

从本研究结果来看，辣椒、羊肉耳廓炎症肿胀明显，其耳厚度差、耳重量差显著高于对照组。带鱼、海虾、香菇对小鼠耳廓炎症反应无明显影响。5种“发物”各自所含的某些成分可能对慢性皮炎的发生发展有一定的影响。国外学者从食物成分分析认为花生四烯酸、前列腺素等变应性活性介质会加重过敏性疾病，相反n－3不饱和脂肪酸有利于过敏性疾病康复。3羊肉、带鱼和海虾均为高脂肪食物，n－3多不饱和脂肪酸含量低而花生四烯酸含量较高，4相反水生生物的带鱼和海虾含有丰富的n－3多不饱和脂肪酸；3辣椒和香菇为低脂肪食物，但辣椒中辣椒素可导致血管扩张等神经源性炎症效应，5香菇中的香菇多糖具有免疫调节作用。6

多次外用半抗原刺激小鼠皮肤或耳组织，皮肤炎症反应从以Th1占优势的免疫反应转为以Th2为主的慢性炎症反应，类似人类AD。2，7外周血和皮损中Th2细胞亚群占优势是慢性皮炎发病重要机制之一，新近发现的Th17细胞在慢性皮炎的发生发展中也同样发挥着重要作用。8IL－4为Th2型细胞因子，持续高表达会加重慢性皮炎皮损炎症反应，8IL－17是Th17细胞产生的主要细胞因子，能诱导角质形成细胞产生多种炎性因子，调节趋化因子及黏附分子表达，促进中性粒细胞活化和向炎症部位募集，加重局部炎症反应。8本实验参照文献制作了小鼠CACD模型，我们发现该模型血清IL－4和IL－17水平较造模前明显升高，说明造模成功。本研究还显示辣椒组和羊肉组小鼠血清IL－17水平较对照组明显升高，IL－4水平与对照组之间差异不明显，推测辣椒、羊肉可能通过上调IL－17表达来加重小鼠慢性炎症反应。

1何以蓓，汤军.中医“发物”的概念、分类及其临床意义.浙江中西医结合杂志，2009，19(11):674－676.

2Morioka Y，Yamasaki K，Leung D，etal.Cathelicidin antimicrobial peptides inhibit hyaluronan－induced cytokine release and modulate chronic allergic dermatitis.J Immunol，2008，181(6): 3915－3922.

3 Devereux G，Seaton A.Diet as a risk factor for atopy and asthma.Allergy Clin Immunol，2005，115(6):1109－1117.

4罗建学.羊肉脂肪酸的研究概况.肉类研究，2010，(1):12－15.

5梁晨，韩盛玺.辣椒素临床应用的研究进展.华西药学杂志，2008，23(2):185－187.

6张海岚，周建平，边洪荣.香菇有效成分研究综述.华北煤炭医学院学报，2004，6(1):35－36.

7 Jin H，He R，OyoshiM，etal.Animalmodelsof atopic dermatitis.J Invest Dermatol，2009，129(1):31－40.

8 Yamanaka K，Mizutani H.The role of cytokines/chemokines in the pathogenesisof atopic dermatitis.Curr Probl Dermatol，2011，41:80－92.

(收稿:2014－03－31)

Effects of five foods on the inflammatory reaction and IL－4，IL－17 in m icemodel of CACD

LITing，HU Yang，CHEN Xiang-ming，et al.Department of Dermatology，Nanxiang Hospital of Jiading，Shanghai，201802

Objective:To determine the effects ofmushroom，chillies，ribbonfish，mutton and sea shrimp on contact dermatitis inmicemodel.Methods:The contact dermatitismodel was constructed by DNFB.The mice were divided into 5 groups and fed with the soup of5 foods by gavage and themice in control group were fed with water.Ear thickness and weightweremeasured.The levels of IL－4 and IL－17 in serum were detected by ELISA.Results:Compared with control group，the ear thickness and weight，and the levels of IL－17 were increased in the chillies group andmutton group(P＜0.05).Therewas no changes in ear thickness and weight in ribbonfish and sea shrimp group，but the level of IL－4 decreased(P＜0.05).There were no significant differences in the ear thickness and ear weight changes，and the serum levels of IL－4 and IL－17 between mushroom group and control group(P＞0.05).Conclusion:Chillies andmuttonmay aggravate the inflammatory reaction in contact dermatitis by upregulating IL－17 expression.

chronic allergic contact dermatitis；ear thickness；ear weight；cytokine

上海市嘉定区科委课题(编号:2010019)

上海市医学重点专科B类建设项目(编号:ZK2012B18)

上海市嘉定区南翔医院，201802

∗通信作者