胃癌中HSP70、NF-κB p65的表达及临床意义

陈宏书，刘丹丹，侯 妍

(1.潍坊市益都中心医院消化内科，山东 青州 262500； 2.青州市妇幼保健院妇产科，山东 青州 262500)

胃癌作为全球最常见的恶性肿瘤之一，其病死率在恶性肿瘤中居第二位。胃癌的发病由多基因参与、多因素影响、多步骤进行，到目前为止其确切发病机制尚未完全阐明，近年来大量研究认为，细胞凋亡和细胞增殖异常可能在胃癌的发生、发展中发挥重要的作用[1]。热激蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)是一种普遍存在于生物细胞中的高度保守的蛋白质，具有抗细胞凋亡和细胞保护等生物学功能，可能在胃癌细胞增殖的转录调控过程中起某种作用[2]。核因子κB(nuclear factor κB,NF-κB)p65属于真核细胞转录因子家族，可能与肿瘤细胞增殖、侵袭和转移等有密切关系。本研究采用免疫组织化学法检测60例胃癌标本中HSP70、NF-κBp65蛋白的表达情况，并分析两者与胃癌病理特征的关系，探讨其在胃癌发生、发展中的作用。

1 材料与方法

1.1材料 收集2011年8月至2012年5月益都中心医院经病理诊断确诊为胃癌并行胃癌根治术的60例胃癌组织标本。其中男44例、女16例，年龄41～79(59.5±3.21)岁。根据WHO分类标准，组织学分型为高分化腺癌17例、中分化腺癌22例、低分化腺癌21例。所有患者术前均未接受任何放化疗及免疫治疗。另取距胃癌病灶5 cm以上癌周正常的癌旁胃组织，经病理诊断所取癌旁胃组织均未检测到任何癌细胞。

1.2方法 切除标本后将其置于10%甲醛中经固定、包埋，制作成切片后，经微波抗原修复，用免疫组织化学法监测HSP70、NF-κBp65水平，鼠抗人HSP70抗体、鼠抗人NF-κBp65抗体均购于武汉博士德公司，二氨基联苯胺显色试剂盒及二步法所用免疫组织化学检测试剂均购自北京中杉生物科技有限公司，严格按照说明书操作进行。

1.3判定标准 NF-κBp65阳性细胞结果为：胞质出现棕黄色颗粒状沉淀；HSP70阳性结果为：胞质呈现棕黄染色或胞核出现伴有棕黄颗粒的细胞。光镜下观察，HSP70、NF-κBp65着色细胞>10%为阳性[3-4]。

1.4统计学方法 应用SPSS 17.0统计软件进行数据分析，计数资料采用χ2检验，相关性采用Spearman等级相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1HSP70、NF-κBp65在胃癌和癌旁胃组织中的表达 与癌旁胃组织相比，胃癌组织中NF-κBp65、HSP70阳性表达率均高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。

2.2HSP70、NF-κBp65在胃癌中的表达与胃癌病理的关系 组织分化程度越低，HSP70、NF-κBp65阳性表达率越高，且随肿瘤的浸润而增高，有淋巴结转移者比无转移者高(P<0.05)(表1)。

2.3胃癌组织中NF-κBp65与HSP70表达间的关系 胃癌组织中NF-κBp65和HSP70的表达呈正相关(rs=0.271,P<0.05)(表2)。

3 讨 论

目前研究认为，细胞增殖与凋亡不平衡是胃癌形成的病理基础，胃癌不仅仅是一种细胞增殖和分化异常的疾病,同时也与细胞凋亡的异常有密切的关系，大量凋亡相关因子能够参与凋亡信号调控，加速胃癌的发生、发展[5]。其中，HSP70、NF-κBp65可能在细胞凋亡通路中起着重要的作用。

表1 NF-κBp65与HSP70的表达与胃癌病理的关系

表2 胃癌组织中NF-κBp65与HSP70表达间的关系

NF-κB是一类能够特异地识别并结合DNA的蛋白二聚体转录因子，当细胞受到细胞内、外的各种刺激时，NF-κB可发生磷酸化和泛素化后失活，并使NF-κB释放、激活后进入细胞核内，与靶基因上的顺式调节元件κB位点发生特异性结合，调控一系列抗凋亡基因和促生长基因的表达[6]。国内外研究证实[7-8]，NF-κB信号通路是目前癌症治疗中很有研究价值的干预靶点。本研究结果显示，胃癌组NF-κBp65的阳性率显著高于癌旁组织，且其表达与胃癌浸润深度、分化程度及淋巴结转移等有相关性，这与Sasaki等[9]研究结果大致相同，提示NF-κBp65可能在胃癌的发生、发展中发挥着重要作用，对胃癌的治疗及预后有一定的指导意义。目前，对于NF-κB在胃癌中的作用机制尚不明确，可能与NF-κB参与细胞凋亡的调控有关，NF-κB活化后可上调抑凋亡蛋白的表达进而抑制细胞凋亡，并能通过抑制Jun氨基末端激酶的活性抑制凋亡。

HSP是一类高度保守的蛋白质，由于其具有提高细胞对应激耐受性等生物功能，故又称为应激蛋白。HSP70作为HSP家族中重要一员，在维持细胞结构稳定方面发挥着至关重要的作用。已有实验证实，HSP70在某些肿瘤组织中的表达与在正常组织中的表达不同[10]。HSP70作为分子伴侣能够提供结合蛋白，协同参与抗原加工、递呈等过程，在机体的抗感染免疫、自身免疫，特别是在肿瘤免疫中发挥着重要作用。同时，HSP70作为分子伴侣，还能够与原癌基因和抑癌基因直接作用，从而调控肿瘤细胞的增殖。本研究证实，HSP70在胃癌和癌旁胃组织中均有表达，胃癌组织HSP70阳性表达率显著高于癌旁组织，且随肿瘤浸润程度加重，阳性率升高。这与吴永梅等[11]的研究结果一致，推测HSP70可能是作为一种重要的基因参与胃癌细胞增殖的过程，HSP70 可通过与多种原癌基因及抑癌基因相互作用，从而调节肿瘤细胞的增殖。此外，由于癌细胞较正常细胞中变性蛋白含量明显增多，机体细胞需要合成更多HSP来应对此种变化，故使HSP70呈现高表达。

本研究发现，HSP7及NF-κBp65在胃癌组织中呈明显正相关(P<0.05)，提示HSP7与 NF-κBp65均参与了胃癌的发生、发展过程，而HSP70可能参与了NF-κBp65的激活物IKK复合体的组成，进而引起NF-κBp65的转录增强，两者的关系还需进一步研究。

综上所述，HSP7及NF-κBp65在胃癌组织中特异性高表达，可能在胃癌的发生、发展中发挥了重要的作用，两者相互协同抑制肿瘤细胞凋亡可能是其中机制之一。联合检测HSP7及NF-κBp65可能有助于评估胃癌的转移及预后，对胃癌的临床诊治提供一定的依据。

[1] 陈美霓,许静洪,赵菊梅.HSP抑制剂17-AAG对胃癌SGC-7901细胞生长周期和凋亡的影响[J].南方医科大学学报,2013,33(2):271-275.

[2] McConnell KW,Fox AC,Clark AT,etal.The role of heat shock protein 70 in mediating age-dependent mortality in sepsis[J].J Immunol,2011,186(6):3718-3725.

[3] Schmid RM,Adler G.NF-kappaB/rel/IkappaB: implications in gastrointestinal diseases[J]. Gastroenterology,2000,118(6):1208-1228.

[4] Weinberger SR,Dalmasso EA,Fung ET.Current achievements using Protein Chip Array technology[J]. Curr Opin Chem Biol,2002,6(1):86-91.

[5] Cory S,Huanng DC,Adams JM.The Bel-2 family:roles in cell survival and oneogenesis[J].Oneogene,2003,22(53):8590-8607.

[6] 王韶华,崔东来,谢永强，等.环氧合酶-2,核因子-κB异常表达与胃癌关系的探讨[J].北京医学, 2006，28(2)：84-86.

[7] Hillman GG,Kucuk O,Joiner MC,etal.Potentiation of radiation-induced cell killing by genistein in prostate cancer[J].J Nutr,2004,134(5):1258-1259.

[8] 张永胜,王志强,贾淑.PCNA与NF-κBp65在胃癌组织中的表达及临床意义[J].医学综述,2012,18(7):1083-1085.

[9] Sasaki N，Morisaki T，Hashizume K，etal.Nuclear factor-kappa Bp65(RelA) translation factor is constitutively activated in human gastric carcinoma tissue[J].Clin Cancer Res,2001,7(12):4136-4142.

[10] Doubrovin M,Che JT,Serganova I,etal.Monitoring the induction of heat shock factor 1/heat shock protein 70 expression following 17-allylamino-demethoxygel danamycin treatment by positronemission tomography and optical reporter gene imaging[J].Mol Imaging, 2012,11(1):67-76.

[11] 吴永梅,居来提,谢会忠.慢性萎缩性胃炎热休克蛋白70(HSP70)表达的相关研究[J].中国现代医学杂志,2010,20(2):179-182,195.