足细胞标记蛋白及上皮钙黏素在糖尿病肾病中的表达及分析

杨 邱，李 亚

(深圳市人民医院内科,广东 深圳 518000)

随着老龄化社会的到来以及人们生活、饮食习惯的改变，糖尿病发生率越来越高。糖尿病本身并不导致患者死亡，但是如果血糖控制不理想，引起微小血管病变，则对患者的健康和生命造成严重威胁。其中糖尿病肾病就是十分常见且严重的并发症之一[1]。本研究通过对糖尿病肾病患者足细胞标记蛋白(podocalyxin,PCX)及其他指标表达情况进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1临床资料 选取2012年1月至2012年10月期间深圳市人民医院肾内科行肾活检的糖尿病肾病患者100例，其中男53例、女47例，年龄22～68(49.2±5.6)岁。所有患者均符合《1999年WHO对糖尿病肾病的诊断标准》[2]，且排除其他系统严重疾病，排除原发肾病，感染性疾病。所有患者近期均无酮症酸中毒发生。测定所有患者的24 h尿白蛋白排泄率(urinary albumin excretion rates，UAER)和血清肌酐(serum creatinine，SCr)水平并据此将患者分为4组。A组28例，男16例、女12例，年龄22～67(49.2±5.3)岁；UAER<30 g/24 h，SCr≤135 μmol/L。B组30例，男15例、女15例，年龄23～68(49.2±5.2)岁；UAER(30～299) mg/24 h，SCr≤135 μmol/L。C组22例，男12例、，女10例，年龄22～68(49.2±5.7)岁；UAER≥300 mg/24 h，SCr≤135 μmol/L。D组20例，男10例、女10例，年龄23～68(49.1±5.3)岁；UAER≥300 mg/24 h，SCr>135 μmol/L。另外，选取同期健康体检者20例作为对照组，男10例、女10例，年龄22～68(49.2±5.2)岁。5组人群在性别、年龄等方面均差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法

1.2.1标本采集 搜集5组人群清晨第一次排尿的中段尿液10 mL，以5 cm离心半径，转速2000 r/min离心10 min(离心机选择北京时代北利离心机有限公司生产的GT10-1)，抛弃上清，留取200 μL尿沉渣，保存于-20 ℃环境，以备测定尿液PCX。在同一日留取24 h尿液，进行UAER和尿蛋白定量测定。取清晨空腹肘静脉血2 mL，待测定糖化血红蛋白(hemoglobin A1c，HbA1c)水平和血清可溶性E-钙黏素水平。

1.2.2PCX检测 采用PCX单抗包被在酶标板上，标准品与样品中的PCX与单抗结合，在加入酶标抗体后可以在板上形成免疫复合物，随后加入酶底物四甲基联苯胺，出现蓝色后再加入终止液，颜色转为黄色。使用上海精科仪器公司生产UV765紫外可见分光光度计吸光度进行测定，计算得到蛋白浓度。

1.2.3其他指标 采用免疫分析法测定所有受试者HbA1c水平；采用酶联免疫吸附剂测定法测定所有受试者血清可溶性上皮钙黏素水平。

2 结 果

2.1糖尿病肾病患者与对照组病程、HbA1c水平的比较 B组患者病程显著长于A组，C、D两组患者病程显著长于A、B两组(P<0.05)，C、D两组病程之间差异无统计学意义(P>0.05)；A、B、C、D组患者HbA1c水平均显著高于对照组(P<0.05)，但此四组患者之间差异无统计学意义(P>0.05)(表1-1、表1-2)。

表1-1 糖尿病肾病患者与对照组病程、HbA1c水平的比较

表1-2 糖尿病肾病患者与对照组病程、HbA1c水平多重比较结果

2.2糖尿病肾病患者与对照组SCr、UAER、尿蛋白水平的比较 B、C、D三组SCr均显著高于A组及对照组，且D组显著高于B、C两组(P<0.05)，而A组与对照组之间以及B、C两组之间差异无统计学意义(P>0.05)；糖尿病肾病患者UAER水平显著高于对照组，且B、C、D组显著高于A组，C、D组显著高于B组(P<0.05)，而C、D两组之间差异无统计学意义(P>0.05)；尿蛋白定量分析，B、C、D组显著高于A组和对照组，且C、D组显著显著高于B组(P<0.05)，而A组和对照组之间以及C、D组之间差异无统计学意义(P>0.05)(表2-1、表2-2)。

2.3糖尿病肾病患者与对照组PCX、上皮钙黏素水平的比较 糖尿病肾病患者PCX、上皮钙黏素水平均显著高于对照组，且B、C、D组显著高于A组，C、D组显著高于B组(P<0.05)，C、D两组之间差异无统计学意义(P>0.05)(表3-1、表3-2)。

表2-1 糖尿病肾病患者与对照组SCr、UAER、尿蛋白水平的比较

表2-2 糖尿病肾病患者与对照组SCr、UAER、尿蛋白水平多重比较结果

表3-1 糖尿病肾病患者与对照组PCX、上皮钙黏素水平的比较

表3-2 糖尿病肾病患者与对照组PCX、上皮钙黏素水平多重比较结果

3 讨 论

糖尿病肾病是临床常见的糖尿病并发症。在病变早期，主要表现为肾小球内压力升高，灌注压和滤过率提高，逐渐出现肾小球毛细血管基膜增厚以及系膜基质增多，直至最终发展成为肾小球硬化[3]。在临床上对糖尿病肾病患者进行干预的关键在于早期发现，早期治疗。但是临床中，传统用来评价肾脏损害的指标往往受到生理状态、病理状态以及药物等因素的干预而缺乏准确性。

足细胞是高度分化的，紧贴于肾小球基膜外的一层疏松细胞，也是肾小球基膜滤过屏障的重要构成组织，同时也是肾小球各种损伤的靶器官[4]。随着研究的深入以及人们关注度的增加，足细胞损伤在糖尿病肾病病程中的作用越来越受到关注。因此，有学者提出通过PCX对糖尿病肾病患者肾小球损害情况进行判断[5]。作为最早发现的足细胞分化成熟的标志性蛋白，PCX由肾小球内皮细胞以及足细胞合成，并在足细胞分化成熟的过程中始终固定于足细胞顶膜，对足细胞骨架的形成和维持均具有重要的作用[6]。而且PCX带有少量负电荷，可以作为肾小球基膜的电荷屏障，通过电荷之间的排斥作用，维持足突间的结构。当肾脏受损早期，足细胞顶膜区的PCX可脱落进入尿液中，从而使尿液中PCX水平增加，即PCX升高可早于足细胞从基膜脱落；随着肾脏损伤的进一步增加，脱落的足细胞碎片中的PCX也会进入尿液，尿液中PCX水平会进一步升高。因此，通过尿液PCX检测，可以在早期发现糖尿病肾病，并对其严重程度有所判断[7]。

血管内皮是机体最大也是最重要的内分泌器官，钙黏素可以在细胞间正常连接中发挥重要的维护作用。上皮钙黏素对于维持内皮细胞的特异性、完整性以及极性都有重要的意义，仅在血管内皮细胞表面表达，同时也是导致内皮损伤和血管通透性增高的各因素作用的靶位。因此当上皮钙黏素水平增高时，往往可以间接判断微血管内皮细胞的受损情况[8]。

在本研究中A、B、C、D 4组肾功能损害程度逐渐加重，其PCX、上皮钙黏素水平与健康体检者相比均显著升高，且B、C、D组显著高于A组，C、D组显著高于B组，说明在UAER和SCr出现异常之前，患者的PCX、上皮钙黏素水平已经发生了改变，且随着肾脏损害程度的加重，这种改变越发显著。

因此，可以认为PCX、上皮钙黏素表达水平可以在糖尿病肾病早期反映肾脏损害程度，其敏感性优于UAER和SCr。

[1] 钱晓玲,闫彩凤,张蕊,等.初诊2型糖尿病患者尿PCX和Nephrin及单核细胞趋化蛋白-1联合检测对早期糖尿病肾病的预测价值[J].临床医药实践,2012,21(12):933-938.

[2] Hanley AJ,Karter AJ,Williams K,etal.Prediction of type 2 diabetes mellitus with alternative definitions of the metabolic syndrome:the Insulin Resistance Atherosclerosis Study[J].Circulation,2005,112(24):3713-3721.

[3] Lin MH,Chen HY,Liao TH,etal.Determination of time-dependent accumulation of d-lactate in the streptozotocin-induced diabetic rat kidney by column-switching HPLC with fluorescence detection[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci,2011,879(29):3214-3219.

[4] 董婷,袁伟杰.肾素-血管紧张素系统活性亢进参与糖尿病肾病足细胞的损伤[J].中华肾脏病杂志,2012,28(4):341-345.

[5] 罗长青,张春.糖尿病肾病足细胞损伤机制研究进展[J].临床肾脏病杂志,2012,12(5):199-201.

[6] 龙香菊.糖尿病肾病足细胞损伤机制研究进展[J].内科,2009,4(4):629-632.

[7] 刘志红,李世军,陈朝红,等.糖尿病肾病患者足细胞病变的临床病理特征[J].肾脏病与透析肾移植杂志,2003,12(2):144-148.

[8] 陈立平,周巧玲,彭卫生,等.足细胞超微结构及其相关分子表达变化在糖尿病肾病发病中的作用[J].中南大学学报:医学版,2007,32(4):620-625.