RHOA/ROCK-2信号通路在甲状腺髓样癌中的表达及意义

汪颖厚，陈安杰，王斌，杨栋，辛世杰，蔡相军

（1.中国人民解放军第202医院普通外科，沈阳110812；2.中国医科大学附属第一医院血管甲状腺外科，沈阳110001）

RHOA/ROCK-2信号通路在甲状腺髓样癌中的表达及意义

汪颖厚1，陈安杰1，王斌1，杨栋2，辛世杰2，蔡相军1

（1.中国人民解放军第202医院普通外科，沈阳110812；2.中国医科大学附属第一医院血管甲状腺外科，沈阳110001）

Expression of RHOA/ROCK-2 Signaling Pathway in Medullary Thyroid Carcinoma and Its ClinicalSignificance

采用免疫组织化学染色方法检测RHOA、ROCK-2蛋白在甲状腺髓样癌（MTC）组织及癌旁组织中的表达情况。结果显示：MTC中RHOA、ROCK-2蛋白表达水平较癌旁甲状腺组织中明显增高，二者的表达与患者的性别、年龄及TNM分期无关，而ROCK-2与淋巴结转移有关。RHOA、ROCK-2的表达可能对MTC的发生和发展有重要作用。

甲状腺髓样癌；RHOA；ROCK-2；转移；免疫组织化学

甲状腺髓样癌（medullary thyroid carcinoma，MTC）是甲状腺癌中比较少见的类型，约占所有甲状腺恶性肿瘤的4%～10%［1］，属中度恶性甲状腺癌。MTC具有多灶性的特点，淋巴结转移出现较早，且有遗传倾向，预后一般［2］。近年来甲状腺癌发病率迅速增加，MTC的发病率也随之升高［3］，但导致其发生发展的具体机制目前尚未明确。研究表明，RET和RAS原癌基因突变可导致甲状腺滤泡旁C细胞内外区蛋白构象的改变，诱导细胞增生过度而发生恶变，引发MTC［4］。而细胞的恶性增殖与多种信号通路的异常激活密切相关。RHOA/ROCK-2信号通路受多种上游因子的调控，通过调节其下游NFκB的转录活性，在众多生理及病理过程中发挥作用，尤其在细胞的增殖、骨架重排、迁移和代谢以及血管重塑等方面起着关键作用［4，6］。实验证明，RHOA、ROCK-2蛋白在多种恶性肿瘤中存在过表达，并在其发生、发展及侵袭过程中起重要作用［7］。然而，RHOA/ROCK-2在MTC中的表达及作用目前鲜有报道。本研究拟检测RHOA、ROCK-2蛋白在MTC中的表达水平，旨在探讨RHOA/ROCK-2信号通路是否与MTC的发生、发展存在相关性。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源及一般资料：收集中国人民解放军第202医院及中国医科大学附属第一医院2008年至2012年术后病理确诊为MTC的石蜡样本30例，包括癌组织及癌旁组织。30例石蜡样本中，男14例，女14例；年龄24～74岁，中位年龄47岁。依据2013年NCCN标准临床分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期6例，Ⅲ期6例，Ⅳ期11例。有淋巴结转移者17例，无淋巴结转移者13例。

1.1.2 主要试剂：RHOA、ROCK-2多克隆抗体（Santa Cruz公司，美国）均为大鼠抗人抗体，兔抗大鼠二抗（北京中杉金桥公司）；SP法免疫组织化学试剂盒、DAB显色液（福州迈新公司）。

1.2 方法

组织形态学检查：取标本中段做4 μm切片，行HE染色及免疫组织化学染色（RHOA抗体稀释比例为1∶100，ROCK-2抗体稀释比例为1∶400）。奥林巴斯AX70U、BX61+DP71成像系统采集图像，在高倍镜下随机计数4个视野，以细胞质呈棕黄色为阳性，计算阳性细胞率，以无阳性细胞或阳性细胞＜10%为阴性（-），阳性细胞≥10%为阳性（+）。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 组织学检查结果

30例MTC及癌旁组织中，RHOA在MTC组织中呈阳性表达27例，阳性表达率90.00%（27/30），ROCK-2在MTC组织中呈阳性表达24例，阳性表达率83.33%（24/30）；癌旁甲状腺组织中无RHOA阳性表达，阳性表达率为0（0/30），癌旁甲状腺组织中ROCK-2阳性表达1例，阳性表达率3.33%（1/30）（图1）。RHOA、ROCK-2在MTC组织中的表达显著高于癌旁组织（P＜0.01），差异有统计学意义（表1）。

2.2 RHOA、ROCK-2的表达与MTC临床病理特征的关系

如表2所示：RHOA、ROCK-2的表达均与患者的性别、年龄及TNM分期无关，而ROCK-2与淋巴结转移有关，差异有统计学意义（P＜0.04）。

3 讨论

甲状腺癌是最常见的内分泌恶性肿瘤，而MTC较少见，其恶性程度明显高于甲状腺乳头状腺癌（papillary thyroidcarcinoma，PTC）和甲状腺滤泡状腺癌（follicular thyroid carcinoma，FTC）［8］。文献报道，MTC的10年生存率约为80%，而PTC和FTC的10年生存率分别为92%和90%［2］。目前公认的MTC主要发病原因是由RET基因突变引起，大量研究已确认RET基因突变是MTC发病的主要分子病因学基础［4］，约94%的遗传性MTC和70%的散发性MTC是由RET基因突变引起。但MTC是否还有其他发病机制，目前尚无定论。恶性肿瘤的发生、发展与组织细胞内的基因变化关系密切，某个或多个基因的缺失或激活都可能造成细胞的恶性增殖。RHOA/ROCK-2信号通路受多种上游因子调控，也可以影响多个下游因子，目前已知该通路与Wnt及Notch等多个经典信号通路存在着极为紧密的关系［9，10］，而国内外已有文献报道Wnt信号通路与甲状腺恶性肿瘤的发生发展密切相关［11，12］。RHOA/ROCK-2信号通路一旦被激活，将会影响其下游多种因子，如转录因子NFκB、基质金属蛋白酶（matrixmetallo proteinase，MMP）、金属蛋白酶组织抑制因子（tissue inhibitor of metallo proteinase，TIMP）等，从而参与肿瘤的发生、发展及浸润和转移［13］。

图1 癌旁组织及MTC HE染色及RHOA、ROCK-2免疫组织化学结果×200

表1 RHOA、ROCK-2在MTC及癌旁组织中的组织学检查结果分析

表2 RHOA/ROCK-2信号通路与PTC临床病理特征的关系

目前为止，RHOA/ROCK-2信号通路与MTC发生、发展的相关研究甚少。本研究采用免疫组织化学技术检测了MTC中RHOA、ROCK-2蛋白的表达情况，并根据免疫组织化学结果评估RHOA、ROCK-2与MTC患者的年龄、性别、肿瘤分期及淋巴结转移的相关性。免疫组织化学检测结果发现：30例MTC及癌旁组织中，MTC中RHOA阳性27例（90.00%），ROCK-2阳性24例（83.33%），癌旁甲状腺组织中RHOA阳性0例（0），癌旁甲状腺组织中ROCK-2阳性1例（3.33%），RHOA、ROCK-2在MTC中的表达明显高于癌旁组织。统计学结果显示：RHOA、ROCK-2的表达均与患者的性别、年龄及TNM分期无关，而ROCK-2的表达与淋巴结转移有关。

本研究结果证明RHOA、ROCK-2在MTC中表达水平明显升高，且MTC患者ROCK-2的高表达与肿瘤淋巴结转移有关。尽管这些结果不能直接证明RHOA/ROCK-2信号通路与MTC的发生、发展存在着必然的联系，但结合国外及其他领域的相关研究结果［14］，RHOA、ROCK-2极有可能与MTC乃至所有甲状腺肿瘤的发生和发展存在相关性。本研究例数相对较少，未检测RET基因的变异情况，而且缺乏RHOA、ROCK-2基因水平的相关研究，今后我们会完善与之相关的基因水平实验，并在细胞水平上继续探寻RHOA/ROCK-2信号通路与MTC的增殖、迁移、侵袭等方面的相关性。总之，阐明RHOA/ROCK-2信号通路对MTC发生、发展的作用机制有着重要的医学价值。

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（编辑 王又冬）

R736.1

A

0248-4646（2014）04-0364-03

汪颖厚（1986-），男，医师，硕士.

王斌，E-mail：202wangbin@sina.com

2013-12-19

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