DOG1、CD117和Ki67在胃肠道间质瘤中的表达及其与临床病理因素和危险度的相关性

曾祥，李岩，裴冬梅

（中国医科大学附属盛京医院1.社会服务部；2.消化内科，沈阳110004）

DOG1、CD117和Ki67在胃肠道间质瘤中的表达及其与临床病理因素和危险度的相关性

曾祥1，李岩2，裴冬梅1

（中国医科大学附属盛京医院1.社会服务部；2.消化内科，沈阳110004）

目的探讨DOG1、CD117和Ki67在胃肠道间质瘤中表达及其与临床病理因素的相关性和危险度的关系。方法应用免疫组化方法检测DOG1、CD117和Ki67在66例GIST中表达情况，并对病例进行危险度分级，分析上述免疫组化指标与临床病理相关因素和危险度之间的关系。结果在66例GIST中，DOG1表达阳性率为93.94%，CD117表达阳性率为65.15%，其中CD117阴性的GIST中DOG1阳性表达率为82.61%。DOG1和CD117阳性表达率与性别、年龄、部位、肿瘤大小、核分裂数、危险度之间差异均无统计学意义（P＞0.05）。但DOG1表达阳性率高于CD117，差异有统计学意义（P＜0.01）。Ki67增殖指数＜1%，1%～5%和＞5%的例数分别为15例、20例、24例。Ki67增殖指数在GIST中阳性表达率为89.39%，Ki67的阳性表达与性别、年龄、部位之间差异无统计学意义（P＞0.05），而与肿瘤大小、核分裂数及危险度之间差异有统计学意义（P＜0.01），并且Ki67增殖指数与肿瘤大小、核分裂数及危险度之间均呈正相关（r=0.488、r=0.425、r=0.550）。在CD117阳性的GIST中，Ki67阳性表达率高于DOG1阳性的GIST，两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）。结论在GIST中，DOG1比CD117有更高的敏感性，Ki67增殖指数的表达可与肿瘤大小、核分裂数一起作为判断危险度及预测预后的重要指标。

胃肠道间质瘤；DOG1；CD117；Ki67增殖指数；危险度

胃肠道间质瘤（gastrointestinal stromal tumors，GIST）是最常见的胃肠道间叶源性肿瘤［1］。由Mazur和Clark提出并命名。GIST发生的中心事件是C-kit和PDGFRa获得功能性突变［2］。病理诊断主要依靠肿瘤组织中CD117的阳性表达，但近年来在越来越多的GIST中CD117表达阴性，误诊漏诊率较高。DOG1基因是最新发现的GIST特异性标志物［3］，对于CD117阴性的GIST的诊断具有重要意义。而对于GIST的生物学行为评估，宜以危险程度代替良恶性。目前主要依据是肿瘤大小和核分裂象计数。本文通过对66例GIST标本进行光镜观察及免疫组化检测，进一步探讨GIST中DOG1、CD117和Ki67的表达特征及其危险度分级的关系。

1 材料与方法

1.1 材料

收集中国医科大学附属盛京医院2010年11月至2012年8月间66例资料完整，诊断明确的GIST石蜡标本。其中来源于胃47例，肠道17例，腹腔2例；男性26例，女性40例，平均年龄58.18岁（24～78岁），中位年龄57岁。

1.2 方法

1.2.1 DOG1、CD117和Ki67的表达：所有标本均经10%甲醛液固定，常规石蜡包埋，4 μm厚切片，HE染色，光镜观察。采用SP法检测DOG1、CD117和 Ki67的表达情况，用相同SP法检测的阳性切片做阳性对照，PBS代替一抗为阴性对照，染色步骤和抗体稀释度均按照说明书进行。

1.2.2 结果判定：DOG1、CD117染色定位于细胞质或细胞膜，为棕色或棕黄色颗粒。每张切片观测10个高倍镜视野内阳性肿瘤细胞数；DOG1着色肿瘤细胞数＞10%为阳性，CD117着色肿瘤细胞数＞5%为阳性表达，否则为阴性。Ki67表达定位于细胞核，呈棕黄色颗粒。每例切片随即选择10个HPF，记数其中1 000个细胞中的阳性细胞数，以阳性细胞数的百分数表示Ki67增殖指数。统计阳性细胞数，取平均值。Ki67染色结果按增殖指数＜1%，1%～5%（包括1%和5%），＞5%分为3个等级。

1.2.3 危险度分级：选择细胞生长最活跃区，连续50个HPF（×400）观察进行核分裂计数。采用2008年NIH专家组讨论的原发GIST切除后风险分级标准［4］，分为极低度、低度、中度和高度4级（表1）。

表1 原发GIST切除后风险分级Tab.1 Proposed modification of consensus classification for selecting patients with GIST for adjuvant therapy

1.3 统计学处理

应用SPSS 18.0统计软件，采用Pearson χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 DOG1、CD117的表达与临床病理因素的相关性

66例GIST中，DOG1阳性（图1A）62例，阳性率93.94%（62/66）。CD117阳性（图1B）43例，阳性率65.15%（43/66）。在CD117阴性的GIST中DOG1阳性19例，阳性率为82.61%（19/23）。DOG1比CD117有更高的敏感性，差异有统计学意义（P＜0.01）。但DOG1、CD117的表达与性别、年龄、部位、肿瘤大小、核分裂数、危险度之间差异无统计学意义（P＞0.05，表2）。

2.2 Ki67的表达与GIST危险度的相关性

66例GIST中，Ki67增殖指数阴性（图1C），＜1%（图1D），1%～5%（图1E）和＞5%（图1F）的例数分别为7、15、20、24例。Ki67的阳性表达与性别、年龄、部位均差异无统计学意义（P＞0.05）。但Ki67的表达与肿瘤大小、核分裂数及危险度之间差异有统计学意义（P＜0.01，表1）。并且Ki67增殖指数与肿瘤大小、核分裂数及危险度之间均呈正相关（r=0.488、r=0.425、r=0.550）（图2A、2B、2C）。

2.3 DOG1、CD117的表达与Ki67的相关性

DOG1阳性的62例GIST中，Ki67表达的阳性率为91.94%（57/62）。CD117阳性的43例GIST中，Ki67表达的阳性率93.02%（40/43）。CD117阳性的GIST，Ki67的阳性表达率高于DOG1阳性的GIST，两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）。

表2 DOG1、CD117和Ki67在GIST中的表达与临床病理因素和危险度的相关性Tab.2 Expression of DOG1，CD117 and Ki67 in GIST and their correlation with clinicopathological features and risk rank

3 讨论

GIST是一种胃肠道的间叶源性肿瘤。依据2008年《中国胃肠道间质瘤诊断治疗共识》，GIST定义为［5］：GIST是一类特殊的、通常CD117免疫表型阳性的胃肠道最常见的间叶源性肿瘤，组织学上由梭形细胞、上皮样细胞、偶或多形性细胞排列成束状或弥漫状图像，免疫表型上表达C-Kit基因蛋白产物Kit（CD117），由突变的C-Kit基因或血小板源性生长因子受体（PDGFRA）基因驱动。现认为起源于胃肠道的Cajal细胞，占胃肠道肿瘤的1%～4%［6，7］。目前，病理诊断是GIST最主要的诊断方式，其诊断主要依靠病理组织学及免疫组织化学，以CD117阳性表达为诊断标准。

图1 DOG1、CD117和Ki67在胃肠道间质瘤中的免疫组化结果SP×200Fig.1 Immunohistochemical staining for DOG1，CD117 and Ki67 in GIST SP×200

图2 Ki67增殖指数与肿瘤大小、核分裂数及危险度的相关性Fig.2 Relationship between Ki67 expression and tumor size，tumor mitotic count and risk rank

DOG1是由人类11q13上的CCND1-EMS1基因座所编码的8次穿膜蛋白［8］，由West［9］提出的选择性地高表达于GIST的基因，国外文献报道在GIST中的表达率可达90%～95%［3～10］，其表达对于上皮样胃间质瘤、PDGFRA突变间质瘤、胃肠道外间质瘤、转移性间质瘤以及儿科间质瘤都有较好的敏感性和特异性，且表达不依赖于KIT或PDGFRA基因的突变状态［11］。Miettinen等［10］对1 168例不同部位、不同病理分型的GIST进行免疫组化研究，结果发现DOG1阳性率高达94.4%，说明DOG1有较高的敏感性。本研究66例GIST中，DOG1阳性表达率93.94%，CD117阳性表达率65.15%。DOG1的阳性表达率明显高于CD117，两者之间差异有统计学意（P＜0.01）。可见DOG1与CD117联合诊断可以提高GIST的诊断率，并减少误诊漏诊率。

关于GIST的良恶性，目前比较公认的是所有GIST均应被视为具有恶性潜能的肿瘤，但其恶性程度分级尚没有一个统一标准，大多认为与肿瘤大小及核分裂数有关，既往采用较公认的2002版美国国立卫生署（NIH）的危险度分级［12］。2008年NIH专家组重新讨论了GIST的分级标准，并在2008版的《中国胃肠道间质瘤病理共识意见》中将原发肿瘤部位和肿瘤破裂也作为预后的评估标准。将GIST按照危险程度分为极低度、低度、中度、高度共4级。本研究分析了DOG1、CD117的表达情况与GIST危险度分级之间的关系，结果发现DOG1和CD117的阳性表达率在不同危险度之间均没有显著差异，故不能作为判断GIST危险度的指标。

Ki67增殖指数是与增殖细胞相关的核抗原，仅分布于核内，其功能被认为与细胞的有丝分裂密切相关，一种反映细胞分裂和增值活性的标志物，已在临床广泛使用。本研究显示Ki67在极低危险度、低危险度、中危险度、高危险度的GIST中表达的阳性率分别为62.50%、90.91%、93.33%、95.24%，Ki67的表达在极低、低危险度与中、高危险度组组有显著性差异（P＜0.01），并且Ki67增值指数阳性表达率越高，危险度也越高，两者间呈正相关，提示Ki67增值指数可能是判断危险度和预测预后的有效指标。

综上，DOG1可作为诊断GIST或鉴别非GIST的一个敏感的重要标记物，对于CD117阴性的病例，建议联合检测DOG1，使病理学诊断更客观和完整，因此DOG1的检测更值得在GIST的诊断和鉴别诊断中推广。对于Ki67增殖指数临床病理中检测方便、易行，有助于对GIST预后的判断，可与肿瘤大小及核分裂数一起作为临床判定GIST危险度及预后的重要指标。

［1］Rutkowski P，Symonides M，Zdzienicki M，et al.Developments in targeted therapy of advanced gastrointestinal stromal tumors［J］.Recent Pat Anticancer Drug Discov，2008，3（2）：88-89.

［2］Gomes AL，Gouveia A，Capelinha AF，et al.Molecular alterations of KIT and PDGFRA in GISTs evaluation of a Portuguese series［J］.J Clin Pathol，2008，61（2）：203-208.

［3］Liegl B，Horniek JL，Corless CL，et al.Monoclonal antibody DOG1.1 shows higher sensitivity than KIT in the diagnosis of gastrointestinal stromal tumors，including inusualsubtypes［J］.Am J Surg Pathol，2009，33（3）：437-446.

［4］Joensuu H.Risk stratification of patients diagnosed with gastrointestinal stromal tumor［J］.Hum Pathol，2008，39（10）：1411-1419.

［5］中国胃肠道间质瘤专家组.中国胃肠道间质瘤诊断治疗共识［J］.中国病理学杂志，2009，38（10）：697-702.

［6］Rubin BP.Gastrointestinal stromal tumours：an update［J］.Histopathology，2006，48（1）：83-96.

［7］Codess CL，Heinrieh MC.Molecular pathobiology of gastrointestinal stromal sarcomas［J］.Ann Rev Pathol，2008，2（3）：557-586.

［8］Espinosa I，Lee CH，Kim MK，et al.A novel monoclonal antibody against DOG1 is a sensitive and specific marker for gastrointestinal stromal tumors［J］.Am J Surg Pathol，2008，32（2）：210-218.

［9］West RB，Corless CL，Chen X，et al.The novel marker，DOG1，is expressed ubiquitously in gastrointestinal stromal tumors irrespective of KIT or PDGFRA mutations status［J］.Am J Pathol，2004，165（1）：107-113.

［10］Miettinen M，Wang ZF，Lasota J，et al.DOG1 antibody in the differential diagnosis of gastrointestinal stromal tumors.A study of 1840 cases［J］.Am J Surg Pathol，2009，33（9）：1401-1408.

［11］Lee CH，Liang CW，Espinosa I，et al.The utility of discovered on gastrointestinal stromal tumor 1（DOG1）antibody in surgical pathology-the GIST of it［J］.Adv Anat Pathol，2010，17（3）：222-232.

［12］Fletcher CD，Berman JJ，Corless C，et al.Diagnosis of gastrointestinal stromal tumors：a consensus approach［J］.Hum Pathol，2002，33（5）：459-465.

（编辑 裘孝琦）

Expression of DOG1，CD117 and Ki67 in GastrointestinalStromalTumorsand Their Correlation with ClinicopathologicalFeaturesand Risk Rank ofGISTs

ZENG Xiang1，LIYan2，PEIDong-mei1
（1.DepartmentofSocialService，Shengjing Hospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110004，China；2.DepartmentofGastroenterology，Shengjing Hospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo investigate the expression of DOG1，CD117，and Ki-67 in gastrointestinal stromal tumors and explore their relationship with the clinicopathological factors and risk rank of GISTs.MethodsImmunohistochemical method was adopted to detected the expression of DOG1，CD117，and Ki67 in 66 cases of GIST.The risks in all cases were also ranked.The correlation between immunohistochemical indicators and clinicopathological factors and risk ranks of GISTs were analyzed.ResultsAmong the 66 GISTs，the positive rates of DOG1 and CD117 were 93.94%and 65.15%.The positive rate of DOG1 in CD117 negative GISTs was 82.61%.had There were no significant difference among groups in gender，age，position，tumor size，tumor mitotic count in the expression of DOG1 and CD117 and risk rank（P＞0.05）.However，DOG1 was more sensitive than CD117（P＜0.01）.The number of cases with Ki67 proliferation indices＜1%，1%-5%and＞5%were 15，20，and 24，respectively. The positive rate of Ki67 was 89.39%.No significant difference was found in the expression of Ki67 among groups in gender，age，and position（P＞0.05）.Nevertheless，e Ki67 protein expression waspositively correlated with the tumorsize，tumormitotic countand risk rank（P＜0.01）（r=0.488，r=0.425，r=0.550）.The positive rate of Ki67 was a little bit higher in CD117 positive GISTs than the these DOG1 positive cases，but there was no significant difference（P＞0.05）.ConclusionDOG1 has higher sensitivity than CD117 in GISTs.Ki67 protein，tumor size，and tumor mitotic countwere risk indicatorsfor GISTs and could be predictors forprognosis.

gastrointestinal stromal tumors；DOG1；CD117；Ki67；risk rank

R735

A

0258-4646（2014）05-0449-05

曾祥（1986-），男，住院医师，硕士.

李岩，E-mail：yanli0227@126.com

2013-12-04

网络出版时间：