苍术麸炒后增量成分研究

刘佳鑫 李古月 才谦

1.中国医科大学附属第一医院，辽宁沈阳110000；2.中国医科大学药学院，辽宁沈阳110000；3.辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600

苍术麸炒后增量成分研究

刘佳鑫1，2李古月1，2才谦3

1.中国医科大学附属第一医院，辽宁沈阳110000；2.中国医科大学药学院，辽宁沈阳110000；3.辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600

目的明确苍术麸炒后的增量成分并建立该成分的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法对生苍术和麸炒苍术的色谱图进行比较，并与对照品进行比对，确定麸炒后的增量成分；增量成分的含量测定采用高效液相色谱法，色谱条件为Tigerkin C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）色谱柱；流动相为乙腈-水（5∶95）；检测波长为284 nm；柱温为25℃；流速为1.0 mL/min。结果5-羟甲基糠醛是苍术麸炒后的主要增量成分；测定了14个不同地区市售苍术片及自制的麸炒苍术片中5-羟甲基糠醛的含量，发现麸炒苍术中该成分的量高于生苍术片2倍以上。结论麸炒导致苍术中5-羟甲基糠醛的含量增加。

苍术；麸炒；5-羟甲基糠醛；含量测定

苍术为菊科植物茅苍术Atractylodeslancea（Thunb.）DC.或北苍术Atractylodes Chinensis（DC.）koidz.的干燥根茎。性温，味辛、苦，归脾、胃、肝经。具有燥湿健脾、祛风散寒之功效，用于脘腹胀满、泄泻、水肿、脚气、痿风湿痹痛、风寒感冒、夜盲等症[1]。《中国药典》（2010年版）收载有生苍术和麸炒苍术。苍术中含有5%～9%的挥发油，由一系列的倍半萜、聚乙烯炔类及少量的酚类、有机酸类成分组成；非挥发性成分主要有氨基酸多炔类化合物倍半萜糖苷等水溶性成分以及少量糠醛[2-4]。文献报道，由于麦麸的吸附作用导致苍术麸炒后挥发油的含量下降[5]，挥发油中的聚乙烯炔类成分和倍半萜类成分的含量也有所下降[6]；除挥发性成分外，有文献报道苍术中的多糖类成分在麸炒后含量也下降[7]。根据苍术麸炒后健脾作用增强这一传统理论[8]，笔者推测苍术麸炒后某些成分的含量应该有所增加。本文通过对比苍术麸炒前后的高效液相图谱，明确了苍术麸炒后的增量成分为5-羟甲基糠醛，并采用高效液相色谱法建立了麸炒前后5-羟甲基糠醛的含量测定方法，采用此方法测定了14个不同来源的生苍术和自行炮制的麸炒苍术中5-羟甲基糠醛的含量，初步明确苍术麸炒后增量成分的含量变化情况。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100series高效液相色谱仪（美国安捷伦科技有限公司）；Tigerkin C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）色谱柱（大连思普精工有限公司）；KH-300B型超声清洗器（昆山禾创超声仪器有限公司）；sartoriusCP225D型电子天平（十万分之一，德国sartorius公司）。

1.2 试药

5-羟甲基糠醛对照品，购自上海源叶生物科技有限公司，经液相色谱用归一化法测定，纯度均大于98%。苍术药材或饮片购自全国14个地区，由辽宁中医药大学药用植物教研室王冰教授鉴定为菊科植物茅苍术Atractylodes lancea（Thunb.）DC.或北苍术Atractylodes Chinensis（DC.）koidz.。麸炒品按《中国药典》(2010年版)麸炒方法自行炮制。乙腈（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；娃哈哈纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司）。

2 方法与结果

2.1 苍术麸炒后增量成分研究的方法和结果

2.1.1 色谱条件Tigerkin C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，流动相（乙腈-0.25%磷酸水）梯度洗脱，检测波长为257 nm，柱温25℃，流速1.0 mL/min，进样量10 μL，按表1梯度进行洗脱。

2.1.2 生苍术和麸炒苍术供试品溶液的制备分别取

生苍术和麸炒苍术饮片粉碎过筛（60目），各精密称取2.0 g，置于250 mL圆底烧瓶中，加入80 mL水，加热回流提取2 h，过滤，浓缩滤液，再用石油醚（60～90℃）连续萃取两次，弃去石油醚层，浓缩水层定容至5 mL容量瓶中，过0.22 μm微孔水膜，备用。

2.1.3 5-羟甲基糠醛对照品溶液的制备取5-羟甲基糠醛对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.01 mg的溶液，即得。

表1 二元梯度洗脱表

图1 生苍术和麸炒苍术供试品溶液高效液相色谱图（波长=257 nm）

2.1.4 结果生苍术和麸炒苍术供试品溶液的高效液相色谱见图1。由生苍术和麸炒苍术的高效液相色谱图对比结果可知，麸炒后保留时间约为21 min的色谱峰的峰面积明显增加，推测其为苍术麸炒后的增量成分。

图2 麸炒苍术色谱峰紫外吸收图（保留时间为21 min）

笔者进一步采用DAD检测器测定保留时间为21 min色谱峰的紫外图谱，见图2。从图2中可以看出该吸收峰的最大吸收波长是284 nm，在230 nm也有吸收峰，根据该化合物吸收峰所在的波长和两个吸收峰强度之间关系，推测此紫外图谱所对应的化合物可能是5-羟甲基糠醛。

为证实21 min的吸收峰对应的化合物就是5-羟甲基糠醛，按上述色谱条件，将苍术供试品溶液和5-羟甲基糠醛对照品溶液各进样10 μL，得液相色谱图。见图3、4。从图3和图4可以看出，5-羟甲基糠醛对照品的保留时间就是21 min，与苍术麸炒后含量增加较大的色谱峰的保留时间一致，因此确定5-羟甲基糠醛为苍术麸炒后增量成分。

图3 苍术供试品的高效液相色谱图

图4 5-羟甲基糠醛对照品的高效液相色谱图

图6 供试品的高效液相色谱图

2.2 5-羟甲基糠醛含量测定的方法和结果

2.2.1 色谱条件Tigerkin C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱；流动相为乙腈-水（5∶95）；检测波长为284 nm；柱温为25℃；流速为1.0 mL/min；进样量为10 μL。

2.2.2 对照品溶液的制备精密称取5-羟甲基糠醛对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.01 mg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备取本品粉末（过60目筛）约0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇溶液10 mL，称定质量，超声处理（功率250 W，频率50 KHz），放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，定容至25 mL棕色量瓶中，过0.45 μm微孔滤膜即得。谱图见图5、6。

图5 5-羟甲基糠醛对照品的高效液相色谱图

2.2.4 线性关系考察精密吸取5-羟甲基糠醛对照品溶液（质量浓度为0.0091 mg/mL）2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0 μL注入高效液相色谱仪中，测定峰面积，以进样量（μg）为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，得回归方程为Y=5924.8X+3.7667，r=0.9991，提示5-羟甲基糠醛在0.0182～0.1092 μg范围内具有良好的线性关系。

2.2.5 精密度试验取同一供试品溶液（产地：湖北衡阳），连续进样6次，每次10 μL，测得5-羟甲基糠醛峰面积的RSD为1.9%，表明该方法的精密度良好。

2.2.6 稳定性试验精密吸取同一供试品溶液（产地：湖北衡阳），分别于0、2、4、8、12、48 h进样，测得5-羟甲基糠醛色谱峰面积的RSD为2.5%，表明该供试品溶液在配制后48 h内测定，稳定性良好。

2.2.7 重复性试验取本品（产地：湖北衡阳），精密称定，共6份。按前述方法测定5-羟甲基糠醛的含量，结果平均含有量为0.011%，RSD为2.9%，重复性良好。

2.2.8 加样回收率试验精密称取本品（产地：湖北衡阳，5-羟甲基糠醛含有量为0.011%）0.25 g，共6份，加入质量浓度为0.0091 mg/mL的5-羟甲基糠醛对照品溶液3 mL，按前述方法制备和测定。测定结果提示：本方法回收率在98.3%～99.8%之间，RSD为2.1%，符合有关规定。

2.2.9样品测定结果分别测定了14个地区生苍术片及自制的麸炒苍术片中5-羟甲基糠醛的含量，结果见表2。

表2 生苍术和麸炒苍术中5-羟甲基糠醛含量测定结果（n＝3）

3 讨论

3.1 苍术麸炒前后5-羟甲基糠醛的含量变化情况

本文在通过高效液相色谱法对比生苍术和麸炒苍术的色谱图，并与对照品进行比对，确定了苍术麸炒后5-羟甲基糠醛的含量增加较大，是苍术麸炒的主要增量成分之一。在此基础上，建立生苍术和麸炒苍术中5-羟甲基糠醛的含量测定方法，通过测定不同地区收集的生苍术和自行炮制的麸炒苍术中5-羟甲基糠醛的含量可以看出，虽然不同地区的苍术中5-羟甲基糠醛的含量有差异，但麸炒后5-羟甲基糠醛的含量均有所增加[9-11]。

3.2 5-羟甲基糠醛含量增加的原因

结合苍术麸炒前后多糖的含量下降的测定结果，分析5-羟甲基糠醛含量增加的原因可能是苍术在麸炒加热过程中所含有的糖类成分和氨基酸发生了Maillard反应[12-13]，导致该反应的产物之一5-羟甲基糠醛的含量增加。

3.3 5-羟甲基糠醛的药理作用

5-羟甲基糠醛是葡萄糖等单糖化合物在高温或弱酸等条件下脱水产生的一个醛类化合物，一般经炮制或加热后含量会升高。现阶段对于5-羟甲基糠醛探讨存在着很大的争论。有报道称该化合物对人体横纹肌和内脏有毒副作用等。但近年来有研究发现，5-羟甲基糠醛具有抗氧化、抗心肌缺血、Ca2+拮抗活性以及改善血液流变学等对人体有益的作用[14-15]。本文发现苍术麸炒后5-羟甲基糠醛的含量增加，但其是否是苍术麸炒后健脾作用增强的原因还需进行进一步的研究。

3.4 检测波长和洗脱方式的确定

本文在进行生苍术和麸炒苍术高效液相色谱图比较时，发现波长为257 nm时色谱峰较多，故采用此波长进行测定。同时为使各色谱峰较好地分离，流动相采用梯度洗脱的方式；而在进行5-羟甲基糠醛的含量测定时，则采用该化合物的最大吸收波长284 nm作为检测波长，同时为了操作简便，在保证5-羟甲基糠醛良好分离度的前提下，流动相采用等度洗脱的方式。

[1]国家药典委员会.中国药典[S].一部.北京：中国医药科技出版社，2010：150-151.

[2]关颖丽.苍术化学成分的现代研究进展[J].人参研究，2007，（1）：28-33.

[3]欧阳臻，江涛涛，缪亚东，等.苍术的化学成分、道地性和药理活性研究进展[J].时珍国医国药，2006，10（17）：1936-1938.

[4]李霞，王金辉，李铣，等.北苍术化学成分的研究[J].沈阳药科大学学报，2002，9（3）：178.

[5]王爱武，田景奎，耿晖，等.苍术炒制前后挥发油成分的研究[J].华西药学杂志，2004，19（6）：417-418.

[6]刘玉强，才谦，贾天柱.麸炒前后苍术中3种成分的HPLC测定[J].中成药，2013，35（1）：131-135.

[7]霍岩，刘玉强，才谦.不同来源的苍术麸炒前后多糖的含量测定[J].中国实验方剂学杂志，2013，19（9）：96-98.

[8]朴盛树，朴钟旭，原思通.中药苍术炮制历史沿革研究[J].中国药学杂志，2000，35（6）：87.

[9]傅春升，王琰，李玥，等.黄柏-苍术药对不同比例配伍中生物碱含量的变化[J].中国药房，2013，24（27）：2549-2551.

[10]王庆庆，庞谦，赵明，等.茅苍术水提液及其不同极性部位对幽门螺杆菌的体外抑制作用研究[J].中国药房，2012，23（43）：4042-4044.

[11]刁继红，杨绍群，刘爽，等.关苍术HPLC指纹图谱研究及白术内酯Ⅰ和Ⅲ的含量分析[J].中国药房，2012，23（39）：3714-3717.

[12]刘振丽，巢志茂.何首乌炮制后化学成分的变化及中药中的Maillard反应[D].北京：中国中医科学院，2006.

[13]魏征，曹玉娜，曾林燕.Maillard反应产物的提取、分离及分析方法研究进展[J].中国药房，2013，24（23）：2194-2196

[14]傅紫琴，王明艳，蔡宝昌.5-羟甲基糠醛（5-HMF）在中药中的研究现状探讨[J].中华中医药学刊，2008，26（3）：508-510

[15]赵玲，张兰，李雅莉，等.5-羟甲基糠醛对脑缺血再灌注模型小鼠学习记忆及脑部自由基的影响[J].中国药房，2007，18（13）：974-976.

Study on the incremental composition in Atractylodis Rhizoma after being stir-fried with wheat bran

LIU Jiaxin1,2LI Guyue1,2CAI Qian31.The First Affiliated Hospital of China Medical University,Liaoning Province,Shenyang110000,China;2.Pharmacy College of China Medical University,Liaoning Province,Shenyang110000,China;3.Pharmacy College of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Liaoning Province,Dalian116600,China

Objective To clarify the incremental composition in Atractylodis Rhizoma after being stir-fried with wheatbran and establish the methods of determining the content of 5-HMF in crude and processed Atractylodis Rhizoma. Methods By comparing the HPLC chromatography of crude and processed Atractylodis Rhizoma,the incremental composition was clear.The content determination was carried out using a Tigerkin C18column(5 μm,4.6 mm×250 mm)with the mobile phase of acetonitrile-water(5∶95).The detection wavelength was set at 284 nm.Column temperature was maintained at 25℃.Flow rate was 1.0 mL/min.Results 5-HMF was the incremental composition;the contents of 5-HMF in crude and processed Atractylodis Rhizoma collected from different regions were determined and the contents of 5-HMF in processed Atractylodis Rhizoma were higher over two times than crude ones.Conclusion Processing Atractylodis Rhizoma with wheat bran can increase the content of 5-HMF.

Atractylodis Rhizoma;Process with wheat bran;5-HMF;Content determination

R284.1

A

1673-7210（2014）02（b）-0105-04

2013-09-25本文编辑：卫轲）

国家自然科学基金资助项目（编号81202919）；国家中医药管理局中医药行业科研专项项目（编号201107 00712）。