三种金花茶叶的薄层色谱鉴别研究*

1.广西中医药大学，广西 南宁 530001；2.广西分析测试研究中心，广西 南宁 530022； 3.广西中药质量标准研究重点实验室，广西 南宁 530012

金花茶(Camelliachrysantha)是山茶科山茶属金花茶组金花茶系植物。它是广西壮族民间的一种传统中草药，其叶味微苦、涩，性平，主治痢疾，疮疡[1]。现代研究证实，金花茶叶具有抑制恶性肿瘤、抑制肝癌作用，还具有降血脂、抗氧化和防止动脉粥样硬化等作用[2-5]。金花茶暂未录入 《中华人民共和国药典》，关于其质量控制标准的规定，目前尚属空白，且金花茶品种较多，至今已知的金花茶有32种和7个变种[6]，不同品种含有的具体化学成分差别仍需进一步研究。文献报道金花茶中含有齐墩果酸[7]、芦丁[8]、人参皂苷Rg1[9]等化学成分，因此本实验分别对普通、东兴、显脉金花茶叶中该三种已知化学成分进行了薄层色谱鉴别研究，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)；KQ-5200B型超声波清洗器(昆山市超声清洗器有限公司)； ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂)；100mm×0.5mm点样毛细管(国药集团化学试剂有限公司)；929薄层制版器(四川省中药研究所重庆贝可得仪器技术公司)。

1.2 试剂 人参皂苷Rg1、齐墩果酸、芦丁标准品(批号分别为：110703-200323；110709-200304；100080-201408；中国食品药品检定研究院)；薄层层析硅胶G(青岛海洋化工有限公司分厂)；薄层层析硅胶GF254(青岛海洋化工有限公司)；10cm×10cm硅胶G薄层层析板 (自制)；10cm×10cm GF254硅胶薄层层析板 (自制)；10cm×10 cm聚酰胺薄膜(上海摩速科学器材有限公司)；所用试剂均为分析纯。

1.3 药材 普通金花茶、东兴金花茶、显脉金花茶叶，于2013年7月采集于广西防城港市，由广西中医药研究院中药研究所赖茂祥研究员鉴定为普通金花茶(Camellianitidissima)、东兴金花茶(Camelliatunghinensis)、显脉金花茶(CamelliaeuphlebiaMerr.ex Sealy)。阴干，粉碎机粉碎，过70目筛，即得。

2 方法与结果

2.1 齐墩果酸TLC鉴别

2.1.1 对照品溶液的制备 称取齐墩果酸标准品适量置于5ml容量瓶中，纯甲醇溶解，制得每毫升约含0.04mg齐墩果酸的对照品溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备 分别称取1g普通金花茶、东兴金花茶、显脉金花茶药材，置于具塞锥形瓶中，加入95%乙醇50ml，静置浸泡30min，超声提取1h；过滤，取续滤液，蒸干，残渣用甲醇溶解，置于5ml容量瓶中，定容，得供试品A(普通金花茶)、B(东兴金花茶)、C(显脉金花茶)。

2.1.3 薄层色谱鉴别方法 普通硅胶板点样，取齐墩果酸对照品溶液、供试品A、供试品B、供试品C点样，点样量为9μl，石油醚-乙酸乙酯-丙酮(7∶2∶1)为展开剂，预饱和10min，10%硫酸乙醇溶液显色，105℃的烘箱中烘7min，紫外灯(365nm)下检视。结果见图1。在齐墩果酸对照品斑点相同位置上，三个品种中普通金花茶齐墩果酸斑点明显，显脉金花茶齐墩果酸斑点较淡，东兴金花茶齐墩果酸未见明显斑点。

2.2 芦丁TLC鉴别

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品适量置于5ml容量瓶中，纯甲醇溶解，制得每毫升约含0.04mg芦丁的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 分别称取1g普通金花茶、东兴金花茶、显脉金花茶药材，置于具塞锥形瓶中，加40ml氯仿溶液，60℃恒温水浴锅中加热回流1h，过滤，弃去氯仿液，挥干药渣，0.5ml蒸馏水搅拌润湿，加入10ml水饱和正丁醇溶液，超声处理30min，过滤，取滤液蒸干，残渣用甲醇溶解并定容至5ml容量瓶中制得供试品D(普通金花茶)、E(东兴金花茶)、F(显脉金花茶)。

2.2.3 薄层色谱鉴别方法 GF254硅胶板点样，点样量9μL，乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(9∶2∶1∶0.1)为展开剂，预饱和10min，展毕除去展开剂后于紫外灯光(254nm)下检视。结果见图2。在芦丁对照品斑点相同位置上，三个品种中普通金花茶芦丁斑点明显，显脉金花茶芦丁斑点较淡，东兴金花茶芦丁未见斑点。

2.3 人参皂苷TLC鉴别

2.3.1 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品适量，纯甲醇溶解，制得每毫升约含0.04mg人参皂苷Rg1的对照品溶液。

2.3.2 供试品溶液的制备 分别精密称取1g普通金花茶、东兴金花茶、显脉金花茶药材，置于具塞锥形瓶中，加50%乙醇50ml，静置浸泡30min，超声提取1h；过滤，取续滤液，蒸干，残渣用甲醇溶解，置于5ml容量瓶中，定容，得供试品G(普通金花茶)、H(东兴金花茶)、I(显脉金花茶)。

2.3.3 薄层色谱鉴别方法 普通硅胶板点样，点样量为12μl，氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶8∶4.4∶1.6)为展开剂，预饱和10min，10%硫酸乙醇溶液显色，105℃的烘箱中烘10min，紫外灯(365nm)下检视。结果见图3。在人参皂苷Rg1对照品斑点相同位置上，三个品种中普通金花茶人参皂苷Rg1斑点明显，显脉金花茶人参皂苷Rg1斑点较淡，东兴金花茶人参皂苷Rg1未见明显斑点。

3 讨论

3.1 展开剂的选择 在齐墩果酸TCL鉴别展开剂的选择中，分别考察了石油醚-乙酸乙酯-丙酮(7∶2∶1)、正己烷-乙酸乙酯(10∶3)、氯仿-甲醇-冰醋酸(20∶1∶0.2)为展开剂，结果以石油醚-乙酸乙酯-丙酮(7∶2∶1)为展开剂展开斑点成点、清晰、圆整，干扰少；在芦丁TCL鉴别展开剂选择中，分别考察了乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(9∶2∶1∶0.1)、乙醇-丙酮-水(7∶5∶6)、乙酸乙酯-甲酸-水(8∶1∶1)为展开剂，结果以乙酸乙酯-甲醇-水-甲酸(9∶2∶1∶0.1)为展开剂展开斑点成点、清晰、圆整，干扰少；在人参皂苷Rg1的TCL鉴别展开剂选择中，分别考察了氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶8∶4.4∶1.6)、氯仿-乙酸乙酯-甲醇-丙酮-甲酸(5∶1∶1∶1∶0.2)、氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)为展开剂，结果以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(3∶8∶4.4∶1.6)为展开剂展开斑点成点、清晰、圆整，干扰少。

3.2 显色剂的选择 在齐墩果酸和人参皂苷Rg1显色剂的选择中，分别以10%硫酸乙醇溶液、3%香草醛～5%硫酸乙醇溶液显色，结果均显示以10%硫酸乙醇溶液显色斑点清晰，检视效果好。

3.3 提取方法的选择 在齐墩果酸提取条件的选择中，取普通金花茶叶分别用50%乙醇、95%乙醇、50%甲醇、95%甲醇超声提取，制得4份供试品溶液，同一薄层色谱条件展开，结果显示95%乙醇提取的样品溶液中齐墩果酸斑点最为清晰、明显；在芦丁提取条件的选择中，取普通金花茶叶分别用50%乙醇、95%乙醇、50%甲醇、95%甲醇超声提取，另按照2.2.2样品溶液的制备的方法提取，共制得5份样品溶液，同一薄层色谱条件展开，结果以2.2.2样品溶液制备的方法所得的斑点成点、最清晰、干扰少；在人参皂苷Rg1提取条件的选择中，取普通金花茶叶分别用50%乙醇、95%乙醇、50%甲醇、95%甲醇超声提取，另按《中国药典》中人参的人参皂苷Rg1薄层鉴别[10]方法提取，共制得5份供试品溶液，同一薄层色谱条件展开，结果显示50%乙醇提取的样品溶液中人参皂苷Rg1斑点最为清晰、明显、干扰斑点少。

3.4 薄层板的选择 在芦丁薄层板的选择中，分别考察了普通硅胶板、GF254硅胶板、聚酰胺薄膜进行比较，结果以GF254硅胶板上芦丁斑点成点、清晰、圆整，干扰少，故以GF254硅胶薄层层析板作为金花茶叶中芦丁鉴别的薄层板。

4 结论

本实验薄层色谱结果显示，不同品种的金花茶中化学成分基本相似，但相同成分的含量相差较大，这三种成分均以普通金花茶中含量最高，东兴金花茶中含量最低。但是，这三种成分是否为金花茶的主要药效成分及这些成分含量的高低与金花茶的药理作用相关性，还有待于进一步研究。

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