黑龙江省部分规模化奶牛场布鲁菌病血清抗体回顾性检测与示范场净化效果评价

邵建伟，刘洪涛，曹永生，张润祥，曹 翀，彭统全，张永根，张维银，甘文平，罗清华，高明春，6，王君伟，6

（1.东北农业大学动物医学学院，黑龙江 哈尔滨150030；2.东北农业大学动物科技学院，黑龙江 哈尔滨150030；3.黑龙江省奶业协会，黑龙江 哈尔滨150001；4.黑龙江省农垦科学院畜牧兽医研究所，黑龙江 哈尔滨150038；5.黑龙江飞鹤原生态牧业股份有限公司，黑龙江 齐齐哈尔164800；6.国家奶牛产业技术体系，北京 海淀100193）

布鲁菌病为常见的人兽共患传染病，牛、羊、猪等家畜均为此病易感动物，患病动物出现生殖器官炎症、流产、不育等病理现象，人患此病后可引起波状热、心内膜炎、关节炎和骨髓炎等，严重危害畜牧业的发展和人类健康。为调查黑龙江省奶牛布鲁菌病血清抗体阳性率并验证布鲁菌病净化示范场的净化效果进行评价，采用动物布鲁菌间接ELISA（I-ELISA）及竞争ELISA（C-ELISA）抗体检测试剂盒，对东北区奶牛传染病血清样本库（国家奶牛产业技术体系基础任务）中2009-2011年间采集自黑龙江省不同地区规模化奶牛场（包括净化示范场）的4 830份奶牛血清进行了回顾性检测与分析，以期为布鲁菌病的防制提供参考依据。

1 材料与方法

被检血清：国家奶牛产业技术体系东北区奶牛传染病血清样本库黑龙江省部分样本，共计4 830份。

检测试剂：布鲁菌I-ELISA及C-ELISA血清抗体检测试剂盒，购自哈尔滨平河生物制品有限公司。检测程序：按照试剂盒操作说明书与相关文献进行[1-3]。血清样本先用I-ELISA方法进行检测，I-ELISA检测为阳性的样本，再采用C-ELISA方法进行检测，经C-ELISA方法检测出的阳性样本，最终结果定为阳性。

2 结果

2009-2011年各年度的血清抗体检测结果见表1～表3。4830份奶牛血清样本经I-ELISA初检，共检测出布鲁菌抗体阳性血清739份。初检出的阳性血清再经C-ELISA检测，最终确定的布鲁菌抗体阳性血清592份，阳性率为0～10.88%。表1～表3中标记为E*、F*的牛场为两个布鲁菌病净化牛场，对其2009-2011年连续3年的跟踪监测结果表明，这两个牛场始终保持在净化水平，其布鲁菌病防控经验值得借鉴。

表1 2009年7个奶牛场血清样本布鲁菌病血清抗体阳性检测结果

表1中的D牛场具有高布鲁菌病感染率（10.88%），此牛场送检的465份虎红阳性血清，经I-ELISA检测后，阳性数为327，再经C-ELISA确诊后，阳性数实际为272，牛场按此结果进行控制，流产率已大幅降低。以上结果可证实高感染背景对灵敏度高的筛选方法影响更大[5]，因而C-ELISA确诊程序在此类牛场中显得尤为重要。

表2 2010年6个奶牛场血清样本布鲁菌病血清抗体阳性检测结果

表3 2011年7个奶牛场血清样本布鲁菌病血清抗体阳性检测结果

图1为2011-2012年度对2个规模化奶牛场布鲁菌病血清抗体的10次监测结果。经过2011年6月-11月的5次“检疫+扑杀”的净化流程后，这2个规模化奶牛场的布鲁菌血清抗体阳性率逐渐下降为零，且2011年12月与2012年的1月的两次连续检测阳性率均为零。在2012年6月、12月的两次检测中阳性率也为零，说明这2个规模化牛场已达到净化水平，其布鲁菌病净化程序与防控措施适宜。

图1 黑龙江省2个规模化奶牛场2011-2012年布鲁菌病血清抗体监测结果

3 讨论

黑龙江省布鲁菌病疫情发病情况，从已公开文献上看也不容乐观。2005年朱占波[5]从黑龙江省4个奶牛场的流产胎儿体内分离到6株流产型布鲁菌，对4个奶牛场的104头流产母牛进行血清学检测，其中85头布鲁菌病血清抗体显阳性，疑似11头。杨华[6]等对黑龙江省2007-2008年奶牛布鲁菌病流行情况进行了血清学调查，共检测血清6 163份，其中阳性97份，阳性率为1.57%。

此次基于奶牛血清样本库的布鲁菌病血清抗体阳性率的回顾性检测结果显示，黑龙江部分规模化奶牛场布鲁菌病血清抗体阳性率为0～10.88%之间，总体阳性率较低，但仍有个别奶牛场阳性率较高，这是由于个别奶牛场主疫病防控意识淡薄，牛场检疫、防疫工作不到位所致。2009-2011年间对E*、F*两个布鲁菌病净化牛场的跟踪监测结果表明，这两个布鲁菌病净化牛场能维持本场的净化水平，说明它们所采取的“检疫+扑杀”的布鲁菌病净化程序与防控措施是卓有成效的，具有实践意义。

Ⅰ与Ⅱ2个规模化奶牛场的布鲁菌病血清抗体持续监测显示，5次检测与捕杀程序使其感染率逐渐下降为零，并在随后为期一整年的5次跟踪监测中感染率均为零，说明这2个规模化奶牛场已达到布鲁菌病净化标准，这2个奶牛场采用的“检疫+扑杀”的布鲁菌病净化程序具有实践意义。

布鲁菌病的净化是一项持久的工作，OIE承认的几个无布鲁菌病国家如加拿大、澳大利亚等国的布鲁菌病根除战役均进行了30～50年才得以完成[7]。因此，黑龙江省等15省市要在2015年达到布鲁菌病控制标准，布病净化工作仍然紧迫而繁重。依据上述布鲁菌病净化牛场的经验，只要程序得当，辅以“壮士断腕以全质”的决心执行，相信我国的布鲁菌病短期内控制与长期根除的目标是科学可行的。

[1] Matope G，Muma JB A，Nielsen K，Skjerve，etal.E.Evaluation of sensitivity and specificity of RBT，c-ELISA and fluorescence polarisation assay for diagnosis of brucellosis in cattle using latent class analysis[J].Vet Immunol Immunopathol，2011，141（1-2）：58-63.

[2]Godfroid J，Nielsen K，Saegerman C.Diagnosis of brucellosis in livestock and wildlife[J].CroatMed J，2010，51（4）：296-305.

[3]Grushina T，Atshabar B Yu W，Nielsen K，et al.Universal indirect enzyme-linked immunosorbent assay formonitoring of human and animal brucellosis in Kazakhstan[J].Vaccine，2010，28（5）：46.

[4]Nielsen K，Yu W L.Serological diagnosis of brucellosis[J].Prilozi，2010，31（1）：65-89.

[5]朱战波，崔玉东，朴范泽，等.流产布氏杆菌的检测及生物型PCR鉴定[J].中国病原生物学杂志，2008，08：574-576.

[6]杨华，高明春，王君伟，等.黑龙江省部分奶牛场奶牛布氏杆菌病血清学调查[J].中国兽医杂志，2010，46（9）：36-37.

[7] McDonald W L，Jamaludin R，Mackereth G，et al.Characterization of a Brucella sp.strain as amarine-mammal type despite isolation from a patientwith spinal osteomyelitis in New Zealand[J].JClin Microbiol，2006，44：63-70.