miR-200c在胃癌组织中的表达及其临床意义

黄 俊，伍菲菲，贺利恒，张志伟*

(1.南华大学 肿瘤研究所，湖南 衡阳 421001；2.邵阳医学高等专科学校， 湖南 邵阳 422000；3.娄底市中心医院，湖南 娄底 417000)



miR-200c在胃癌组织中的表达及其临床意义

黄 俊1,2，伍菲菲1,3，贺利恒1，张志伟1*

(1.南华大学 肿瘤研究所，湖南 衡阳 421001；2.邵阳医学高等专科学校， 湖南 邵阳 422000；3.娄底市中心医院，湖南 娄底 417000)

目的：探讨miR-200c(Homo sapiens miR-200c)在人胃癌组织的表达改变情况及其临床意义。方法：采用原位杂交检测40例正常人群胃黏膜组织以及121例胃癌患者组织中miR-200c的表达情况。结果：原位杂交实验证实miR-200c在胃癌组织中表达显著下调。在121例胃癌组织中，miR-200c的表达水平与胃癌临床分期(P<0.05)以及淋巴结转移(P<0.01)情况显著相关。结论：miR-200c在胃癌组织中表达下调，其下调程度与胃癌临床分期以及淋巴结转移情况相关。

miR-200c；胃癌；临床意义

众所周知，miRNA是分子生物学研究的热点，人类miRNA充当肿瘤基因或抑瘤基因的作用，调控其靶基因的表达及相关信号通路，在肿瘤的发生、发展和转归过程中发挥重要作用[1]。研究表明，miRNA-200c通过靶基因ZEB1上调RASSF1A表达，从而抑制乳腺癌细胞的EMT效应[2]，且miR-200c在乳腺癌细胞和乳腺癌干细胞中表达下调[3-4]。以上研究结果提示，miR-200c表达下调可能在肿瘤的发生发展过程中起重要作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料

正常胃黏膜组织样本40例，胃癌组织样本121例，上述组织芯片均由中山大学肿瘤防治中心惠赠。

原位杂交探针：miR-200c miRCURYTM LNA custom detection probes (美国Exiqon公司)。

1.2 原位杂交

60℃烤片2h，二甲苯脱蜡，第1缸15min，第2缸25min，无水乙醇脱二甲苯5min；100%、85%、70%梯度酒精复水各5min，无酶水洗；3%过氧化氢室温处理8min，无酶水洗1min×3次；3%胃蛋白酶37℃消化20min，PBS水洗5min×3次，无酶水洗1min×1次；1%多聚甲醛室温固定10min，无酶水洗1min×3次；滴加适量预杂交液以覆盖组织，55℃预杂交2h；将miR-200c探针按说明稀释于灭菌无酶水中，终浓度为31nM，滴加适量杂交液以覆盖组织，55℃杂交过夜，次日用2×SSC缓冲液洗5min×2次，0.5×SSC，0.2×SSC缓冲液洗各15mim×1次；滴加封闭液，37℃封闭30min；滴加生物素化鼠抗地高辛，室温孵育2h，PBST缓冲液洗5min×4次；滴加SABC，室温孵育30min，PBST缓冲液洗5min×3次；DAB显色，0.75mL蒸馏水中加A、B、C显色液各一滴，混匀，滴加至标本上，显微镜下控制显色，充分水洗；苏木素染色，充分水洗，中性树胶封片保存。

1.3 统计学分析

2 结果

2.1 原位杂交检测miR-200c在胃癌及正常胃黏膜组织中表达情况

原位杂交结果表明，在121例胃癌芯片组织中，miR-200c阳性表达51例，阳性率为42.1%；40例正常胃黏膜组织中，miR-200c阳性表达31例，阳性率为77.5%，两组比较差异显著，具有统计学意义(P<0.01)。

2.2 miR-200c表达与胃癌临床病理参数之间的关系

原位杂交结果显示，miR-200c在121例胃癌组织中，70例低表达，51例高表达。采用软件分析发现，miR-200c的表达与胃癌患者的性别、年龄、细胞分化程度无显著相关性，差异无统计学意义 (P>0.05)；miR-200c的表达随着临床分期的升高而降低，III～IV期胃癌组织中miR-200c的表达显著低于I～II期胃癌组织中的表达，差异具有统计学意义(P<0.05)；胃癌患者中，有淋巴结转移患者的miR-200c表达显著低于无淋巴结转移者，差异具有统计学意义(P<0.01)。

3 讨论

miR-200家族包括miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-429，其是从两个染色体位点转录而来。miR-200b-200a-429簇位于染色体1p36，miR-200c-141簇位于染色体12p13[1]。最近，有研究报导miR-200家族与肿瘤的发生发展显著相关，如卵巢癌、子宫内膜癌、肺癌以及胃癌等[5]。研究显示，miR-200家族是抑癌基因，并且调控EMT。miR-200直接靶向EMT诱导转录因子ZEB1和ZEB2，而ZEB1和ZEB2可抑制钙黏蛋白的表达。miR-200也通过靶向β-catenin mRNA 抑制β-catenin/Wnt 信号通路[3]，从而突出了miR-200在肿瘤中的侵袭和转移作用。

本研究通过原位杂交实验证实miR-200c在胃癌组织中表达显著下调。在121例胃癌组织中，miR-200c的表达水平与胃癌临床分期以及淋巴结转移呈负相关，提示miR-200c可能作为胃癌的预后相关分子。miRNA作为肿瘤基因或抑瘤基因这一发现为肿瘤发病机制的研究提供了新思路，也为肿瘤的防治、诊断、分子分型、预后以及疗效监测甚至辅助治疗提供了新策略。笔者将继续深入研究miR-200c在胃癌中的功能，系统阐明其参与胃癌发生发展可能的分子机制，为胃癌的防治提供理论依据和实验基础。

[1] TANG H, DENG M, TANG Y, et al. miR-200b and miR-200c as prognostic factors and mediators of gastric cancer cell progression[J].Clin Cancer Res,2013,19(20):5602-5612.

[2] ILIOPOULOS D,LINDAHL-ALLEN M,POLYTARCHOU C,et al.Loss of miR-200 inhibition of Suz12 leads to polycomb-mediated repression required for the formation and maintenance of cancer stem cells[J]. Mol Cell,2010,39(5):761-772.

[3] SHIMONO Y, ZABALA M, CHO RW, et al. Downregulation of miRNA-200c links breast cancer stem cells with normal stem cells[J]. Cell,2009,138(3):592-603.

[4] HOWE EN, COCHRANE DR, RICHER JK. Targets of miR-200c mediate suppression of cell motility and anoikis resistance[J].Breast Cancer Res, 2011,13(2):R45.

[5] CEPPI P, MUDDULURU G, KUMARSWAMY R, et al. Loss of miR-200c expression induces an aggressive, invasive, and chemoresistant phenotype in non-small cell lung cancer[J]. Molecular Cancer Research,2010(8):1207-1216.

(责任编辑：尹晨茹)

2013-12-24

国家自然科学基金(81101643)

黄俊(1982-)，男，邵阳医学高等专科学校讲师，研究方向为胃癌发病分子机制。

张志伟，南华大学肿瘤研究所副教授，硕士生导师，研究方向为胃癌发病分子机制。

R735.2

A

1673-2197(2014)08-0103-01