脉管复康片抗凝、镇痛及抗炎作用研究

周剑宇，王瑞清，王林元，马晓君，黄银峰，屈胜胜，朱映黎，周恬恬

·药理毒理·

脉管复康片抗凝、镇痛及抗炎作用研究

周剑宇1，王瑞清3，王林元2，马晓君3，黄银峰2，屈胜胜2，朱映黎2，周恬恬2

目的：观察脉管复康片抗凝血、镇痛、抗炎作用。方法：分别采用抗凝血实验、醋酸扭体实验、二甲苯致小鼠耳肿胀实验，观察脉管复康片的活血，镇痛以及抗炎作用。结果：2g/kg脉管复康片的凝血时间明显延长，差异显著（P＜0.05）；2g/kg脉管复康片的15min扭体次数明显减少，差异非常显著（P＜0.01）；1g/kg与0.5g/kg脉管复康片的15min扭体次数明显减少，差异显著（P＜0.05）；2g/kg脉管复康片小鼠耳肿胀度明显降低，差异显著（P＜0.05）。结论：脉管复康片具有抗凝血、镇痛、抗炎作用。

脉管复康片；脉管炎；抗凝；镇痛；抗炎

血栓闭塞性脉管炎及深部静脉血栓形成属于中医“脉痹”、“脱疽”范畴，其病机特点是在脏腑功能失调的基础上感受寒湿或湿热蕴结至痹阻脉络，气血不畅，阳气不能到达肢端而致坏疽。中医目前治疗该病以活血祛瘀中药为主[1]。脉管复康片是由乳香、没药、郁金、丹参、鸡血藤等中药制备而成，功效活血化瘀，通经活络，止痛生肌，临床用于瘀血阻滞，血脉不畅引起的脉管炎、硬皮病、动脉硬化性下肢血管闭塞症[2～4]。本研究旨在通过抗凝、镇痛、抗炎实验研究脉管复康片活血化瘀、通经活络、止痛生肌的功效。

1 材料

1.1 实验动物

ICR小鼠，雄性，18-22g，由斯贝福（北京）实验动物科学技术有限公司提供，合格证号：SCXK（京）2011-0004。

1.2 受试药

脉管复康片：由天津同仁堂集团股份有限公司提供，批号C90031，生产日期2013020。

阿司匹林片：拜耳医药保健有限公司，国药准字J20080078，批号BJ04335，有效期至2016.7.10，有效期60个月。

1.3 试剂

冰醋酸，分析纯（500mL/瓶），北京化工厂生产，生产批号20130108。

1.4 仪器用品

计数器；计时器；电子天平；7mm打孔器；微量移液器；1mL注射器；载玻片；4号注射针头。

2 方法

2.1 抗凝实验

取ICR小鼠，按随机数表方法将动物分为5组，分别为溶液对照组，阿司匹林组20mg/kg，脉管复康片2g成药/kg，脉管复康片1g成药/kg，脉管复康片0.5g成药/kg。动物在22±0.5℃恒温条件，12h为昼夜周期环境下饲养，自由饮水和饮食。适应饲养5天后，灌胃给药，灌胃剂量为0.2mL/10g，每天一次。各组药物均以0.1%CMC溶液稀释至所需浓度，溶液对照组给以等体积的0.1%CMC溶液。给药5天，于第5天给药60min后，用毛细管眼眶取血，滴于载玻片上，血滴直径约0.5mm，立即用秒表记时，每隔10s用清洁的4号注射针头自血滴边缘向里轻轻拨动，观察有无血丝挑起。从采血开始至挑起血丝止即为凝血时间。记录凝血时间[5]。

2.2 镇痛实验

取ICR小鼠，按随机数表方法将动物分为5组，分别为溶液对照组，阿司匹林组200mg/kg，脉管复康片2g成药/kg，脉管复康片1g成药/kg，脉管复康片0.5g成药/kg。动物在22±0.5℃恒温条件，12h为昼夜周期环境下饲养，自由饮水和饮食。适应饲养5天后，灌胃给药，灌胃剂量为0.2mL/10g，每天一次。各组药物均以0.1%CMC溶液稀释至所需浓度，溶液对照组给以等体积的0.1%CMC溶液。给药3天，于第3天给药90min后，每只小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液（0.1mL/10g，i.p.，醋酸溶液临用前配制），立即将小鼠放入观察箱中观察。观察标准：腹部内凹，伸展后肢，臀部抬高计算为一次数。记录小鼠15min内的扭体次数[5,6]。

2.3 抗炎实验

取ICR小鼠，按随机数表方法将动物分为5组，分别为溶液对照组，阿司匹林组200mg/kg，脉管复康片2g成药/kg，脉管复康片1g成药/kg，脉管复康片0.5g成药/kg。动物在22±0.5℃恒温条件，12h为昼夜周期环境下饲养，自由饮水和饮食。适应饲养5天后，灌胃给药，灌胃剂量为0.2mL/10g，每天一次。各组药物均以0.1%CMC溶液稀释至所需浓度，溶液对照组给以等体积的0.1%CMC溶液。给药7天，于第7天给药60min后，将二甲苯滴于小鼠右耳正反面，0.02mL/只，20min后将小鼠脱颈处死，沿耳廓基线剪下两耳，用7mm打孔器分别在同一部位打下圆耳片，电子天平称重，以左右耳片重量之差为小鼠耳肿胀度（mg），表示炎症反应强度，并计算肿胀抑制率[5]。

耳肿胀度(mg) = 右耳重量－左耳重量

肿胀抑制率(%) = (溶液对照组平均肿胀度－给药组平均肿胀度) / 溶液对照组平均肿胀度×100%。

3 数据分析

4 结果

4.1 脉管复康片对小鼠凝血时间的影响

与溶液对照组比较阿司匹林组的凝血时间明显延长，差异显著（P＜0.05）； 2g/kg脉管复康片的凝血时间明显延长，差异显著（P＜0.05）。见表1。

表1 脉管复康片对小鼠凝血时间的影响（n=10）

4.2 脉管复康片对小鼠醋酸致痛模型扭体次数的影响

与模型组比较阿司匹林组的15min扭体次数明显减少，差异非常显著（P＜0.01）；2g/kg脉管复康片的15min扭体次数明显减少，差异非常显著（P＜0.01）；1g/kg脉管复康片与0.5g/kg脉管复康片的15min扭体次数明显减少，差异显著（P＜0.05）。见表2。

表2 脉管复康片对小鼠醋酸致痛模型扭体次数的影响（n=15）

4.3 脉管复康片对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响

与溶液对照组比较阿司匹林组小鼠耳肿胀度明显降低，差异显著（P＜0.05）；2g/kg脉管复康片小鼠耳肿胀度明显降低，差异显著（P＜0.05）。见表3。

表3 脉管复康片对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响（n=12）

5 讨论与分析

血栓闭塞性脉管炎与血管内皮损伤、血流动力学改变及血液凝固性增高等因素密切相关，这些因素导致微循环障碍及组织的缺血、缺氧而发病。疼痛是该病最突出的症状，开始时疼痛源自动脉痉挛，常因血管壁与周围组织中的末梢感受器受刺激引起。当动脉内膜发生炎症并因血栓引起动脉闭塞后，即可产生缺血性疼痛。血栓闭塞性脉管炎受损血管呈一种非动脉粥样硬化、非化脓性炎症状态。研究显示[7]血栓闭塞性脉管炎患者内皮依赖性血管舒张功能减弱，炎性介质水平明显升高，在疾病急性期，血管损伤以血栓形成和炎性反应为主。Halacheva K[8]等研究证实血栓性脉管炎患者血管壁中白细胞、单核巨噬细胞浸润明显，内皮细胞表达细胞间粘附分子-1、血管细胞粘附分子-1和E选择素明显升高，TNF-α在单核细胞和内皮细胞顶部呈阳性。

脉管复康片组方由丹参、鸡血藤、郁金、乳香、没药五味中药组成。本药组方中丹参活血祛瘀、凉血消痈，既针对血瘀的病因，又针对脉管炎易引起感染而凉血消痈以抗炎；鸡血藤行血补血、舒筋活络；郁金活血、止痛、行气既针对病因又针对疼痛症状；乳香、没药消肿生肌、活血止痛，起到对证及促进肌肉生长作用。全方共奏活血化瘀，痛经活络，止痛生肌之效。有研究报道[9,10]丹参具有降低血小板聚集，抗凝血、抑制纤维细胞增殖的作用，丹参还可通过抑制细胞对IL-1、IL-6和TNF-α等炎症介质的释放环节使机体产生明显抗炎作用。Li等[11]研究9种藤本植物的抗炎作用时发现，鸡血藤乙醇提取物（除去多酚类化合物）对除COX-2以外的与抗炎作用有关的酶均具有抑制作用，表明鸡血藤具有一定的抗炎作用。有研究[12,13]表明郁金提取物具有明显的抗炎、镇痛作用，镇痛机制可能与降低炎症细胞因子的表达，参与抑制炎症反应有关。郑杭生等[14]研究表明乳香、没药提取物中挥发油具有镇痛作用，醇提部分则可以明显增强挥发油的镇痛效果。陈婷等[15]实验证实乳香和没药配伍可增强抗炎效应。

凝血时间主要反映凝血因子被激活至纤维蛋白形成所需的时间。抗凝血实验结果显示脉管复康片可以延长小鼠凝血时间的作用，说明脉管复康片可影响小鼠内源性凝血途径产生抗凝作用，具有活血化瘀功效。腹腔注射醋酸可刺激小鼠腹膜引起持久的疼痛反应，致使小鼠出现“扭体反应”，醋酸扭体实验结果表明脉管复康片可减少小鼠扭体次数，具有明显的外周镇痛作用。二甲苯涂抹于小鼠耳廓两面后，由于其刺激作用，可引起鼠耳局部毛细血管充血，通透性增加，渗出增多，发生水肿，表现出红、肿、热、痛等炎性症状，二甲苯致小鼠耳肿胀实验结果表明脉管复康片可降低鼠耳肿胀度，具有明显的抗炎作用。本研究显示脉管复康片具有抗凝血、镇痛、抗炎作用，其作用机制有待进一步研究。

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（责任编辑：陈思敏）

Study on the anticoagulant, analgesic and anti-inflammatory effects of Maiguan Fukang Tablets

ZHOU Jian-yu1, WANG Rui-qing3, WANG Lin-yuan2, MA Xiao-jun3, HUANG Yin-feng2, QU Sheng-sheng2, ZHU Ying-li2, ZHOU Tian-tian2//(1. Chengde Medical University,Chengde 067000,Beijing 100029,China; 2.China Beijing University of Chinese Medicine, Beijing 100029;3. Tianjin Tongrentang Group by Share Ltd,Tianjin,300385.)

Objective:To study the anticoagulant, analgesic and anti- infammatory effects of Maiguan Fukang Tablets on mice.Method:The anti- coagulation experiments, acetic acid writhing test, xylene-induced mouse ear swelling experiment were used to observe the blood circulation-promoting, analgesic and anti- infammatory effects of Maiguan Fukang Tablets.Result:Compared with the control group, the coagulation time of 2g/kg Maiguan Fukang Tablets(P ＜0.05) group was prolonged obviously. The mice writhing times within 15min of 2g/kg(P ＜0.01),1g/ kg(P ＜0.05) and 0.5g/kg (P ＜0.05)Maiguan Fukang Tablets group were reduced obviously. The ear swelling of mice in 2g/kg Maiguan Fukang Tablets group (P＜0.05) were decreased obviously.Conclusion:Maiguan Fukang Tablets has anticoagulant, analgesic, anti-infammatory effects.

Maiguan Fukang Tablets; vasculitis; anticoagulation; analgesia; anti-Infammation

R 285

A

1674-926X(2014)03-008-03

1.承德医学院，河北 承德 067000 2.北京中医药大学，北京 100029 3.天津同仁堂集团股份有限公司，天津 300385

周剑宇，男，助教，在读博士，研究方向：中药药理 Tel:18810951597 Email:zhoujianyu1@163.com

王林元，男，副教授，研究方向：中药产业化应用Tel:64287912 Email:wanglinyuan110@vip.163.com

2013-09-09