锦灯笼和枸杞子水提液对乳酸菌的促生作用

姜 琦，风 兰，辛 毅，李新莉

（大连医科大学生物技术系，辽宁大连 116044）

锦灯笼和枸杞子水提液对乳酸菌的促生作用

姜 琦，风 兰，辛 毅，李新莉

（大连医科大学生物技术系，辽宁大连 116044）

目的 研究锦灯笼和枸杞子对乳酸菌的促生作用，为微生态制剂的开发及中药合理使用提供理论依据。方法 将不同浓度的锦灯笼和枸杞子水提液添加到乳酸菌的体外生长培养基中，37℃培养48h，活菌计数。结果 2％和5％的锦灯笼以及0.5％和1％的枸杞子对乳酸菌生长具有明显的促进作用（P＜0.01），5％的锦灯笼促进乳酸菌生长的效果最好，菌数分别是对照组的1.6倍左右，但随着药物浓度的增加，两种药物促乳酸菌生长的作用显著减弱。结论 一定浓度的锦灯笼和枸杞子水提液能够促进乳酸菌的生长。

锦灯笼；枸杞子；乳酸菌；促生作用

人体肠道中益生菌和致病菌协调并存又相互制约，形成复杂而稳定的微生态环境［1］。其中，乳酸菌黏附于肠上皮细胞表面，在增强机体免疫力、降解有毒物质、激活免疫应答等方面发挥着重要作用［2］，且能够促进宿主的消化、吸收和肠胃功能［3］。

锦灯笼Physalis alkekengi L var.francheti（Mast.）Makino又名挂金灯、酸浆、红姑娘，具有清热解毒、利咽化痰、利尿等功效［4］。枸杞子为宁夏枸杞Lycium barbarismL.的干燥成熟果实，用于治疗虚劳精亏、腰膝酸痛、眩晕耳鸣、内热消渴、血虚萎黄、目眩不明等证［5］。二者为茄科植物，且药食同源，主要成分为甾体、多糖、蛋白质、黄酮等。其中，酸浆多糖（Physalis alkekengi var.francheti polysaccharide，PPSB）和枸杞多糖（Lycium barbarism polysaeeharide，LPB）均有抗衰老［6－7］、增强机体免疫力的功效。

乳酸菌是人体肠道中正常的优势菌群，在维持人体肠道微生态平衡，增强机体免疫力，合成人体所需的某些营养物质等方面发挥重要作用。大量文献表明，中药提取物能够促进肠道正常有益菌群的生长，可维护机体微生态平衡。曹国文等［8］选用党参、黄芪、山楂等对乳酸杆菌进行体外培养，促进了乳酸杆菌的增殖。丁轲等［9］研究了白术、黄芪、陈皮、党参、麦芽等15种中药，结果表明这些中药都对乳酸杆菌有不同程度的促进作用。本实验初步研究锦灯笼和枸杞子对乳酸菌的体外促生作用，为微生态制剂的开发及中药合理使用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器 锦灯笼、枸杞子购自大连市中药房；乳酸细菌培养基：山东省青岛海博生物技术有限公司；琼脂粉：北京奥博星生物技术有限责任公司；氯化钠、氯化钡、硫酸等均为分析纯：上海国药集团化学试剂有限公司。Lactobacillus delbrueckii ATCC 7830德氏乳酸杆菌由大连医科大学生物技术系提供。

RE－52A型旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；SHZ－82恒温振荡器：常州国华电器有限公司；DHG－9071A型电热恒温鼓风干燥箱：上海申光仪器仪表有限公司；HC－3018R高速冷冻离心机：安徽中科中佳科学仪器有限公司；SE－CJ－2FD洁净工作台：上海博迅实业有限公司医疗设备厂。

1.2 实验方法

1.2.1 中药水提液制备：称取锦灯笼和枸杞子各100g，分别加水1L，浸泡1h，煎煮1h，过滤，滤渣加同量水再煎1次［10］，合并滤液蒸发浓缩至250 ml，生药含量为0.4g／ml。115℃高压灭菌15min后放冰箱备用。

1.2.2 培养基制备：以乳酸细菌液体培养基为基础培养基，分别添加体积分数分别为2％、5％、7％和10％的锦灯笼水提液，得到锦灯笼乳酸细菌固体培养基；以乳酸细菌液体培养基为基础培养基，分别添加体积分数分别为0.5％、1％、1.5％和2％的枸杞子水提液，得到枸杞子乳酸细菌固体培养基，二者均补足水分后于115℃高压灭菌15min。乳酸细菌固体培养基为乳酸细菌液体培养基加1％的琼脂粉。

1.2.3 菌液制备：将德氏乳酸杆菌划线接种于乳酸细菌固体培养基上，37℃厌氧条件下培养48h，用接种环刮取少量菌苔，加无菌生理盐水配成每毫升

（1～2）×108集落形成单位（colony forming unit，CFU）的菌悬液［11］，稀释10 000倍备用。

1.2.4 细菌计数法：将锦灯笼和枸杞子乳酸细菌固体培养基各20ml倾入无菌平皿中，待冷却凝固后，吸取备用菌悬液10μl于平皿内，用无菌玻耙涂布均匀，以不加药液的乳酸细菌固体培养基为对照，37℃厌氧条件下培养48h，进行活菌计数［12］，每个实验浓度重复3次。

1.3 统计学方法 采用SPSS 10.0进行统计学分析，连续型变量采用“均数±标准差（±s）”进行统计学描述，组间均数比较采用方差分析。

2 结果

见表1。不同种类、浓度的中草药对乳酸菌的作用不完全相同。其中，2％和5％的锦灯笼对德氏乳酸杆菌生长表现出显著的促进作用（P＜0.01），5％锦灯笼促进乳酸菌生长效果最好，菌数是对照组菌数的1.6倍左右，但随着药物浓度的增加，这种促生长作用减弱。0.5％和1％的枸杞子也显著促进乳酸菌的生长（P＜0.01），菌数是对照组的1.4倍左右，随着药物浓度的增加，促生长作用也减弱。

表1 锦灯笼和枸杞子对乳酸菌生长的影响（±s，n＝3）

表1 锦灯笼和枸杞子对乳酸菌生长的影响（±s，n＝3）

注：与0.0％药物浓度组比较，＊＊P＜0.01。

锦灯笼浓度／％活菌数／（108 CFU／ml）枸杞子浓度／％活菌数／（108 CFU／ml）0.0 1.60±0.02 0.0 1.60±0.02 2.0 1.71±0.02＊＊0.5 2.25±0.13＊＊5.0 2.48±0.07＊＊1.0 2.34±0.09＊＊7.0 0.65±0.03＊＊1.5 0.87±0.14＊＊10.0 0.51±0.02＊＊2.0 0.61±0.02＊＊

3 讨论

本实验首次考察了不同浓度的锦灯笼和枸杞子水提液对德氏乳酸杆菌的促生作用。结果表明，不同的中草药及其浓度对乳酸菌的作用不完全相同，适宜浓度的锦灯笼和枸杞子可以促进乳酸菌的生长，但随着药物浓度的增加，促生长作用也减弱。结果表明两药对乳酸菌的促生效应呈一定的剂量依赖关系，过低或过高剂量均会影响其疗效。其原因可能为：①德氏乳酸杆菌的增殖主要利用糖类［13］，对蛋白质的利用率低。当中药含量低时，多糖含量较多而蛋白质较少，促进其增殖；当中药含量高时，蛋白质起了主要作用，抑制德氏乳酸杆菌的增殖［13］，所以低浓度的锦灯笼和枸杞子水提液能够促进乳酸菌的增殖，而高浓度则抑制生长。②中药成分复杂，可能同时存在某些促生长因子或抑制因子，中药对乳酸菌生长的影响受药液种类、浓度及菌种的耐受性等多种因素的影响。因此，随着锦灯笼和枸杞子药物浓度的增大，其中某些抑制因子发挥主导作用，促生长作用随之减弱。③乳酸菌等益生菌通过分泌到细胞外的各种酶如α－D－半乳糖苷酶、D－木糖苷酶等来分解利用中药益生元，促进益生菌生长繁殖［14］。

总之，一定浓度的锦灯笼和枸杞子水提液能够促进乳酸菌的生长，为微生态制剂的开发及中药合理使用提供了理论依据。这种中药微生态制剂若与抗生素合用，会减弱药物对益生菌的抑制和杀死作用，维持肠道菌群平衡。中药以其独特性能如天然性、整体调节、扶正祛邪、双向调节等作用，将有可能在一定程度上解决抗生素带来的不良反应［15］，并在治病防病、调节机体免疫功能、平衡肠道微生态平衡等方面发挥一定的作用，但这类中药中具体的促生作用物质基础尚有待于进一步研究。

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Growth－Promoting Effects of Physalis alkekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino and Lycium barbarumL.on Lactobacillus

JIANG Qi，FENG Lan，XIN Yi，LI Xin－li
（Department of Biotechnology，Dalian Medical University，Liaoning Dalian 116044，China）

Objective To study the growth－promoting effects of Physalis alkekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino and Lycium barbarumL.on Lactobacillus and to provide a theoretical basis for the development of microecologics and proper use of traditional Chinese medicines.Methods Different concentrations of water extracts of P.alkekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino and L.barbarumL.were added into the in vitro culture medium of Lactobacillus delbrueckii，and then viable count was performed after 48hof culture at 37℃.Results The growth of L.delbrueckii was significantly promoted by 2％and 5％water extracts of P.alkekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino and 0.5％and 1％of water extracts of L.barbarumL.（P＜0.01）；5％water extract of P.alkekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino had the best growth－promoting effect，and it led to an about 1.6－fold increase in the number of bacteria as compared with that in the control group.However，the growthpromoting effects of the two medicines decreased significantly as their concentrations increased.Conclusion The growth of Lactobacillus can be promoted by certain concentrations of water extracts of P.alkekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino and L.barbarumL.

Physalis alkekengi L.var.franchetii（Mast.）Makino；Lycium barbarumL.；Lactobacillus；Growth－promoting effect

R285.5

A

10.3969／j.issn.2095－7246.2014.02.027

2013－07－11）

辽宁省高等教育本科教学改革研究项目（辽教发［2012］130－772）

姜琦（1991－），女，在读本科生

李新莉，linxinlibio＠163.com