HPLC法测定勐海县晒青毛茶儿茶素单体含量的研究

蔡 丽，梁名志，夏丽飞，杨盛美，李晓霞，陈 枚，李友勇，冉隆珣

（1.云南省农业科学院茶叶研究所，云南 勐海 666201；2.云南省茶树种质资源创新与配套栽培技术工程研究中心，云南 勐海 666201）

勐海县地处高原山区，海拔高低相差极大，地貌类型多样，气候类型复杂，气温垂直落差异常显著，其自然条件非常适宜茶树生长，且大部分茶园为天然生态茶园。不同地区所产的晒青毛茶在品质上差异较大，而晒青毛茶是普洱茶的主要原料，它的好坏决定了普洱茶品质的优劣[1-4]。儿茶素是茶叶中最主要的生物活性成分之一，占茶叶干重的12%~24%；主要包括没食子酸（GA）、表没食子儿茶素（EGC）、右旋儿茶素（C）、表儿茶素（EC）、表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）、表儿茶素没食子酸酯（ECG）等成分[5-6]。

试验采用高效液相色谱法对勐海县普洱茶主要产区的晒青毛茶儿茶素单体进行测定，以期揭示不同地区所产晒青毛茶中儿茶素单体成分及含量的差异，为构建茶叶指纹图谱提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

供试茶叶样品为2010年春季在勐海县10个主要产茶乡镇按一芽一叶标准采摘15个古树茶样和10个生态茶样；试验主要试剂有儿茶素类化合物标样（美国SIGM A公司）、甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、乙酸（色谱纯）等；试验主要仪器有超纯水仪（Millipore公司）、分析天平（Denver公司）、水浴锅（北京精瑞科技有限公司）、离心机（Beckman公司）、高效液相色谱仪（Waters公司）。

1.2 试验方法

1.2.1 晒青毛茶样品的前处理 高温杀青晒干，每个茶样得干茶样约300 g备用。工艺流程为鲜叶→摊青→杀青→晒干→磨样→分析。准确称取茶粉1.000 0 g，加入80%（V/V，下同）甲醇100 m L，于30℃水浴中超声提取20 m in，经滤纸过滤，洗涤滤渣3次后合并滤液，定容至200 m L，用0.45 μm滤膜过滤后备用[7]。茶样由云南省农业科学院茶叶研究所茶叶加工与检测中心分析检测。

1.2.2 混合标样的配制 标准储备液：分别称取6种儿茶素类化合物的固体标样各10 mg，用50%的甲醇水溶液溶解并定容至10 m L，则6种儿茶素类化合物的标准储备液浓度均为1 mg/m L。

1.2.3 色谱检测条件 采用GB/T8313-2008中的方法进行检测。流动相：A为甲醇，B为乙腈；流动相的梯度为从10%的乙腈到 60%的乙腈，流速1 m L/m in，在36 m in内完成；色谱柱为waters-C18（5 μm，4.6 mm×250 mm）；检测波长280 nm。每次检测完成后，系统平衡15 m in后重复3次进样。所得数据用Empower软件处理。

2 结果与分析

2.1 标准曲线

从图1中看出，在试验设置的色谱条件下，各种单体物质的分离度较高，峰形较好。这说明该色谱条件符合试验要求。其中，Caf为咖啡碱，虽然其不是儿茶素类，但却是茶叶的主要内含物质；EGC的保留时间为11.4 m in，图1中未有明显峰形，是因为其在茶叶中含量较少，为了突出其他几种儿茶素单体的峰形，特用Empower软件对标样色谱图进行了处理。

2.2 勐海县晒青毛茶儿茶素单体HPLC指纹图谱

由表1可知，各乡镇晒青毛茶的儿茶素单体成分的含量差异显著。其中，布朗山乡老班章古树茶的没食子酸（GA）和右旋儿茶素（C）的含量远远高于其他乡镇茶叶的含量，而表没食子儿茶素（EGC）和表儿茶素（EC）的含量却稍低于其他乡镇茶叶的含量；而EGC、EC、EGCE、ECG含量最高的分别是西定乡曼佤村委会贺松村古树茶、格朗和乡苏湖村生态茶、勐往乡曼糯大寨古树茶、格朗和乡帕沙村古树茶。

由表2可知，各茶叶样品的出峰时间及出峰顺序均较稳定，各种儿茶素单体在勐海县产茶区的古树茶和生态茶中的含量差异显著。其中，EGC、C和EC的总变异数超过30%，这在同地区茶叶化学成分检测上是比较罕见的现象，值得进一步研究。

表1 茶叶样品中6种儿茶素类化合物的含量 （%）Tab le 1 Content of six kinds of catechin compounds in tea sam ple

3 讨 论

试验结果表明：勐海县各乡镇晒青毛茶中儿茶素单体成分的含量差异显著。这从理论上解释了勐海各茶区茶叶感官差异显著的主要原因，也为勐海县晒青毛茶的指纹图谱建立提供了理论依据。在HPLC检测过程中，儿茶素单体成分均有稳定的出峰时间和峰面积，因此儿茶素单体成分及含量可作为勐海县晒青毛茶HPLC指纹图谱的特征峰，用于鉴定茶叶的来源和品质，有望成为勐海晒青毛茶的化学条码，这在茶叶的质量监督和生化成分检测中具有重要意义。根据25种晒青毛茶的儿茶素单体成分含量不同，可制定全县各乡镇茶叶开发计划，有针对性地开发利用特有的茶树资源，为实现勐海县“中国茶叶第一县”的目标提供指导。

表2 古树茶与生态茶儿茶素单体成分统计分析Table 2 The statistical analysis of catechin monom er com positions in old-p lan and ecological tea （%）

茶叶中各种成分含量是相辅相成、互相影响的，对茶叶品质起着决定性的。HPLC指纹图谱的识别技术与模型构建是茶叶鉴定的关键步骤，也是目前学者关注较多的研究领域[8]。由于茶叶成分绝大多数可在液相色谱上进行检测分析，且具备分离效能好、选择性强、检测灵敏度高、分析速度快、应用范围广以及可用作实验室小量制备等优点，使得液相色谱法成为茶叶指纹图谱技术的首选方法[9-12]。目前，茶叶的指纹图谱研究的普及力度远不及中药材的指纹图谱研究，但是随着茶叶消费水平以及人们对自身健康关注度的不断提高，茶叶品质评价体系有待于进一步科学化、合理化。在这一过程中，指纹图谱研究必然将发挥其重要作用。

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