超氧化物歧化酶检测在中枢神经系统白血病诊断中的意义

钟 敏，刘晓力，刘晓加，杜庆锋，许 娜，刘 志，林 榕，夏立平

（1．海南医学院附属医院血液科，海口570102；2．南方医科大学南方医院血液科，广州510515）

目前早期诊断中枢神经系统白血病（certral nervous system leukemia，CNSL）的方法很多，但临床上尚无特异度和敏感度兼顾的方法。虽然常规的脑脊液细胞学检查对CNSL早期诊断有重要价值，但只有在白血病细胞浸润脑膜时呈阳性，而早期浸润实质和周围神经的脑脊液改变不明显，甚至阴性，单纯依靠脑脊液细胞学检查早期诊断CNSL较困难。因此寻找CNSL新的早期诊断方法对预防和治疗CNSL，提高患者的生存率和治愈率具有重要的临床意义。超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是机体内重要的抗氧化物酶之一，目前大多数实验研究表明脑肿瘤患者血清中SOD活性增高［1］，本研究采用黄嘌呤氧化酶法对30例CNSL患者及25例无中枢神经系统损害的急性白血病患者的脑脊液进行SOD活性检测，以探讨SOD活性变化在CNSL诊断中的意义，现报道如下。

1 资料与方法

1．1 一般资料 选择2008年1月到2009年1月南方医科大学南方医院血液科30例CNSL患者作为研究组（CNSL组），其中男21例，女9例；中位年龄为35．0岁，＜45岁19例，≥45岁11例。25例无中枢神经系统损害的急性白血病患者作为对照组，其中男13例，女12例，中位年龄为28．5岁。CNSL诊断标准参照血液病诊断及疗效标准［2］。

1．2 方法

1．2．1 腰椎穿刺术 无菌收集脑脊液2～3 mL，其中2 mL送该院检验科进行常规、生化检查，其余部分进行SOD活性测定。鞘内化疗方法：甲氨蝶呤10 mg＋地塞米松5 mg，阿糖胞苷50 mg，生理盐水稀释后鞘内注射，每周2次。

1．2．2 脑脊液SOD活性测定 黄嘌呤氧化酶法测定SOD酶活性。采用高55 mm，内径10 mm的无色透明硬质玻璃管为测定管。注入10μL待测脑脊液样品，对照管以等体积0．05 mol／L、p H 7．8的磷酸钾缓冲液代替。注入1 mg／mL黄嘌呤氧化酶50μL。加入940μL发光液启动反应，开动纪录仪。纪录发光峰值读数。以对照管的发光峰值读数为100%，根据样品管测得的发光峰值读数，计算样品管中SOD对发光峰值的抑制程度，并由酶活力单位定义计算出样品中的酶活力。活性单位定义：在规定测定条件下，25℃抑制50%发光所需要的SOD量为1个活性单位。所用数据由南京建成生物工程研究所提供。

1．3 统计学处理 采用SPSS13．0统计软件进行数据分析，计量资料以±s表示，结果采用t检验、单向方差分析、多重比较的LSD-q检验及双变量相关分析方法进行分析，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结 果

2．1 患者脑脊液常规、生化检查结果 CNSL组与对照组脑脊液中白细胞数量和蛋白含量比较差异有统计学意义（P＜0．05）；两组中的脑脊液压力、葡萄糖、氯比较差异无统计学意义（P＞0．05）。见表1。

表1 两组脑脊液常规、生化检查结果（±s）

表1 两组脑脊液常规、生化检查结果（±s）

脑脊液 CNSL（n＝30）对照组（n＝25）t P压力（mm H 2 O）145．67±65．26 128．20±19．20-1．291 0．202白细胞（×10 6个／L）13．70±7．03 0．24±0．52-9．539 0．000蛋白（g／L） 1．02±1．80 0．29±0．07-2．023 0．048葡萄糖（mmol／L） 3．26±0．72 3．32±0．81 0．290 0．773氯（mmol／L）121．77±4．42 123．00±3．37 1．144 0．258

2．2 患者脑脊液SOD活性检查结果 CNSL组患者脑脊液SOD活性为（999．42±461．57），对照组为（662．17±354．38），两组比较差异有统计学意义（t＝-2．990，P＜0．05）。

2．3 患者脑脊液白细胞数量、蛋白含量与脑脊液SOD活性相关性分析 相关分析结果显示，脑脊液白细胞数量和蛋白量含量均与SOD活性呈正相关（r＝0．871，P＝0．000；r＝0．518，P＝0．003）。

2．4 患者鞘内化疗前后患者脑脊液SOD活性检查结果 鞘内化疗前患者SOD活性为（999．42±461．），鞘内化疗后患者脑脊液SOD活性为（675．34±326．81），两者比较差异有统计学意义（t＝-3．252，P＝0．003）。

2．5 不同年龄组SOD活性比较 不同年龄组（＜45岁、≥45岁）脑脊液SOD活性检测结果分别为（755．64±345．77）、（1 420．493±307．69），差异有统计学意义（t＝-5．275，P＝0．000）。

3 讨 论

随着新的化疗药物的不断开发及化疗方案的完善，急性白血病患者的缓解率、生存率得到提高，但由于大多数药物未能通过血脑屏障，使得急性白血病患者的中枢神经系统成为白血病细胞逃避化疗药物的庇护所，有5%～10%的患者发生中枢神经系统浸润，导致疾病复发［3-6］。尸检证实CNSL发病率达88%，而临床上出现神经系统症状与体征却不足50%［7］，临床诊断远比尸体解剖发现者少，主要原因是由于早期CNSL可无临床表现，脑脊液常规检查也可无明显异常。因此，寻找CNSL早期诊断方法有着重要的意义。目前对于CNSL的诊断方法较为单一，主要是从脑脊液中寻找白血病细胞，这种方法灵敏度较低，治疗上主要是反复鞘内注射化疗药物配合全身化疗，加行全颅脊髓放疗，这样有一定的风险性，患者也感到痛苦。临床上需要我们探索新的具有灵敏度及特异度的诊断指标，使CNSL早期诊断及时治疗，从而避免长期鞘内注药及放疗引起的中枢神经系统损伤。有文献报道，脑脊液细胞学、β2微球蛋白和铁蛋白对CNSL的早期诊断有一定价值［8］。作者主张多种标记物联合检测以便提高CNSL的诊断率。

近年来，氧自由基与肿瘤的关系日益受到人们的重视，机体在正常生理情况下存在着氧自由基的产生与酶的清除系统，他们在体内保持着动态平衡，一旦这种平衡被打破，就可导致疾病的发生，而SOD是体内重要的抗氧化物酶。Wozniak等［9］测定9例成胶质细胞瘤患者和15例星型脑膜瘤患者红细胞SOD活性，结果发现脑肿瘤患者红细胞SOD活性较正常对照组高；Li等［10］通过对星型细胞瘤患者和12例脑膜瘤患者血清含锰SOD（MnSOD）活性测定发现，星形细胞瘤患者血清Mn-SOD活性低于脑膜瘤及健康对照组，且恶性程度越高对Mn-SOD防御体系破坏越严重，MnSOD活性下降越明显；而脑膜瘤患者与健康对照组间MnSOD活性差异无统计学意义（P＞0．05），可能是由于颅内良性肿瘤生长缓慢，SOD与体内自由基代谢处于动态平衡所致。Xu等［11］报道了胃非黏液性癌胃区域淋巴结癌转移与自由基代谢状况密切相关，胃壁中抗氧化能力降低，脂质过氧化反应增强，促进了癌组织向胃区域淋巴结转移，这进一步说明了自由基在恶性肿瘤转移发生中起重要的作用。对于白血病与自由基关系的研究已有较多的报道［12-14］，而这方面的报道多限于在血清和红细胞中探讨SOD与疾病的关系，在脑脊液中探讨相对少，且目前尚未见对CNSL患者脑脊液自由基水平变化的报道。白血病细胞具有对组织的侵袭性、破坏性，自由基可通过氧化和交联作用破坏DNA大分子，使其更易发生断裂，基因组不稳定性增加，多次、反复DNA损伤及修复过程可导致筛选出具有更强的增殖性和侵袭性的恶性克隆，这是克隆演进的过程。由于自由基的作用，CNSL的发生更容易。

本组研究结果显示，CNSL组患者脑脊液中白细胞数量、蛋白质含量明显较对照组高，而两组脑脊液压力、葡萄糖和氯差异无统计学意义（P＞0．05）。表明脑脊液中白细胞数量和蛋白含量的改变对中枢神经系统白血病诊断有肯定的意义，葡萄糖和氯对于CNSL的诊断可能非特异，本研究中CNSL组与对照组患者脑脊液压力差异无统计学意义（P＞0．05），可能与本组研究观察例数少，存在一定的局限性有关。在脑脊液SOD活性方面，本组研究结果显示，CNSL组患者脑脊液的SOD活性明显高于对照组患者，且脑脊液中白细胞数量和蛋白含量分别与SOD活性呈正相关关系，而白细胞数量和蛋白含量对CNSL的诊断有重要的意义，提示SOD活性的改变可能与CNSL发病有关。CNSL是白血病细胞对中枢神经系统的直接浸润，CNSL可以发生于急性白血病的任何时期，本研究对27例CNSL患者进行了鞘内化疗，化疗后随着患者症状缓解，白血病细胞转阴，脑脊液中SOD活性下降，化疗前后SOD活性比较差异有统计学意义（P＜0．05），与文献［15］报道一致。说明SOD在CNSL的发生和发展中起重要作用，其机制可能是化疗药物作用于白血病细胞，白血病细胞减少或消失，使有活性的SOD成分减少所致［16］，提示适度的进行预防治疗会提高患者长期生存的机会［17］。因此，对于具有发生CNSL危险因素的白血病患者应重视预防性鞘内注射治疗以求尽量降低CNSL的发生率，延长患者长期生存时间。另外，在本组研究中，“＜45岁”年龄组与“≥45岁”年龄组脑脊液SOD活性比较差异有统计学意义，提示脑脊液SOD活性的变化可能与年龄有关。由于在这方面的参考文献较少，有待今后进一步增加样本量继续进行观察。SOD活性的检测可能作为新的辅助诊断指标用于CNSL的诊断，同时可作为动态观察指标用于CNSL患者的治疗过程中监测，对CNSL的早期诊断及疗效评估具有重要的价值。

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