p53在乳腺癌中的表达及其临床意义＊

陈茂山，袁 杰，成 宏，杨光伦

（重庆医科大学附属第一医院内分泌乳腺外科 400016）

乳腺癌发病率逐年上升，其病死率有下降趋势，得益于诊治手段的不断提高。但临床发现，分期或病理类型相同的患者，接受同一治疗方案，其治疗敏感性和预后存在明显差异。乳腺癌是一类在分子水平上呈高度异质性的疾病，即使是组织形态学相同，其分子遗传学改变也可能不尽相同，从而导致肿瘤治疗和预后的差别［1］。故了解肿瘤细胞分子水平上的差异及其与临床特征的关系有着重要价值。p53是迄今发现与人类肿瘤相关性最高的抑癌基因之一，与乳腺癌的发生、发展密切相关。本研究通过收集本科收治的214例乳腺癌患者，检测并分析乳腺癌组织中p53蛋白表达与临床病理特征的关系，旨在为乳腺癌个体化治疗与预后评估提供参考依据。

1 资料与方法

1．1 一般资料 收集2010年10月至2012年4月在本科病理确诊为乳腺浸润性导管癌的患者214例，临床病理资料完整，未行新辅助化疗。患者均为女性，年龄29～73岁，中位年龄50岁；按美国癌症联合会2010年TNM分期标准，Ⅰ期27例，Ⅱ期105例，Ⅲ期59例，Ⅳ期23例。

1．2 方法 214例乳腺癌标本经免疫组织化学SP法检测癌组织中雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）、人表皮生长因子受体-2（HER-2）、p53、Ki-67的表达情况，单克隆抗体和免疫组织化学试剂盒均购自北京中杉生物技术有限公司，操作步骤严格按说明书进行。用已知阳性组织作对照，磷酸盐缓冲液代替一抗做阴性对照。

1．3 判断标准 p53、ER、PR免疫组化检测以细胞核内着棕黄色为阳性细胞，判定阳性细胞计数百分比小于10%为阴性，≥10%为阳性。HER-2以细胞质和（或）胞膜着棕黄色为阳性（＋～＋＋＋）细胞，判定阳性细胞计数百分比小于25%为＋，25%～75%为＋＋，≥75%为＋＋＋，无显棕黄色为阴性（-）。以-／＋为HER-2无扩增，＋＋＋为HER-2有扩增，＋＋则加做FISH确定HER-2是否扩增。

1．4 统计学处理 采用SPSS17．0统计软件进行统计分析。计数资料以率表示，p53蛋白阳性率与临床病理特征参数关系采用χ2检验，与参数间相关性采用Spear man相关分析，P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结 果

免疫组织化学法检测本组乳腺癌标本中p53蛋白的阳性表达率为52．3%。p53表达情况与患病年龄、病灶大小间差异无统计学意义（P＞0．05）；与淋巴结转移状态呈正相关（r＝0．396，P＝0．000）。据WHO肿瘤组织学分级标准将乳腺癌分为1、2、3级，p53表达率依次增高，与组织学分级呈正相关（r＝0．309，P＝0．000）。据St．Gallen共识（2011年）［1］将乳腺癌分为Luminal A型、Luminal B型、HER-2过表达型及三阴型，Lu minal A型组与余分子亚型组间p53表达差异有统计学意义（P＜0．05），后3个亚型间p53表达差异无统计学意义（P＞0．05）；而非三阴型患者p53阳性率为47．90%，与三阴型患者间差异有统计学意义（r＝0．167，P＜0．05）。本组病理标本中，免疫组织化学法检测ER、PR、HER-2、Ki67的阳性率分别为59．35%、46．26%、24．77%、60．75%，p53与ER（r＝-0．561，P＝0．000）、PR（r＝-0．315，P＝0．000）的表达呈负相关，与HER-2（r＝0．374，P＝0．000）、Ki67（r＝0．153，P＝0．026）呈正相关，见表1。

表1 p53表达情况与乳腺癌临床病理特征的关系

3 讨 论

p53基因是人类恶性肿瘤中突变率最高的抑癌基因之一，定位于17p13．1，分为野生型p53（wt p53）和突变型p53（mt p53）。wt p53通过下游p21、bcl2、bax等信号通路介导阻滞细胞周期、促进细胞凋亡、维持基因稳定性，防止癌变［2］。wt p53可通过基因突变、缺失或基因的甲基化等方式转变为mt p53，mt p53失去了抑制细胞生长、促进凋亡的功能，而具有诱导某些异常的基因表达，引起细胞的转化和癌变，促进肿瘤的发生［3-4］。wt p53基因编码的p53蛋白因半衰期短（约20 min），常规免疫组织化学法难以检测，而mt p53基因编码的p53蛋白半衰期长（2～12 h），免疫组织化学法检测到的p53蛋白均为突变型。多项研究表明，mt p53蛋白在乳腺癌发生、发展及预后评估中起重要作用，检测其表达情况可作为乳腺癌重要的预后标记物和预测因子［5-7］。

研究发现约50%的人类肿瘤都存在p53基因突变，乳腺癌mt p53表达率为20%～60%［8］，Auriemma等［9］研究报道乳腺癌p53蛋白表达率为23%～52%，本组乳腺癌p53蛋白的表达率52．3%，与以上报道基本一致。由表1可知，p53蛋白阳性表达与患者年龄、病灶大小间差异无统计学意义（P＞0．05），与仇加高［10］报道的一致。淋巴结转移、乳腺癌组织学分级和分子分型都与乳癌患者预后有密切关系。淋巴结转移是乳腺癌临床分期和肿瘤浸润性的评估指标，是乳腺癌独立的负性预后因素；乳腺癌组织学分级越高、分化越差、预后越差；分子分型中Luminal A、Luminal B型可从内分泌治疗中获益，其预后较好，而三阴型乳腺癌侵袭性强、预后差。淦锦等［11］研究报道p53蛋白表达是乳腺癌患者复发转移的相关因素之一。本研究发现p53表达情况与淋巴结转移状态（r＝0．396，P＝0．000）、组织学分级（r＝0．309，P＝0．000）和三阴型与否（r＝0．167，P＝0．014）均呈正相关，与Dooker等［12］的研究结果基本一致。表明p53基因在乳腺癌的进展、浸润、侵袭转移过程中发挥一定作用，p53高表达率提示乳腺癌预后不良。

Iwase等［13］研究发现ER阳性表达的乳腺癌术后5年生存率明显高于阴性者，术后复发和远处转移较少，对PR在乳腺癌中的研究也有类似的报道。HER-2被认为是与乳腺癌发生发展密切相关的原癌基因，该基因扩增提示肿瘤恶性度高，预后差［14］。Ki-67与细胞增殖密切相关，其表达率反映肿瘤细胞群体增殖活性。de Azambuja等［15］行Meta分析发现Ki-67阳性表达的肿瘤细胞恶性程度高、增殖活跃，肿瘤生长速度快、侵袭及转移率高，预后差。本研究通过Spear man相关性分析发现p53表达率与ER、PR呈负相关性，与HER-2、Ki-67呈正相关性。有文献报道，p53、HER-2阳性肿瘤对环磷酰、氨甲喋呤、氟尿嘧啶联合化疗有一定抵抗性，但对含蒽环类药的联合化疗敏感［16-17］，肿瘤化学敏感性可能与p53-bax介导的细胞凋亡有关［14］。廖海涛等［18］发现p53基因与GST-π、TopoⅡ存在协同表达的关系，p53过表达可增强GST-πP、TopoⅡ表达，从而使乳腺癌细胞获得多药耐药表型，可能是p53高表达患者对化疗不敏感的重要机制之一。Knappskog［19］对p53与蒽环类耐药机制综述认为，干扰p53信号通路可能是乳腺癌化疗耐药的关键因素。有研究认为通过腺病毒介导p53基因的靶向治疗可逆转乳腺癌细胞对阿霉素耐药［20］。但也有报道认为wt p53活化阻碍化疗反应，p53在肿瘤治疗中的预测价值需再评估［21］。

综上所述，p53蛋白可能通过其凋亡抑制作用，参与乳腺癌细胞生物学行为相关细胞因子的调控，促进肿瘤细胞存活，与乳腺癌治疗敏感性与耐药密切相关，但尚存一些争议。深入研究P53在乳腺癌发生、进展中及与ER、HER-2等生物分子间的作用机制，可为乳腺癌个体化治疗、疗效及预后评估提供重要参考信息。

［1］Goldhirsch A，Wood WC，Coates AS，et al．Strategies forsubtypes--dealing with the diversity of breast cancer：highlights of the St．Gallen International Expert Consen-sus on the Primary Therapy of Early Breast Cancer 2011［J］．Ann Oncol，2011，22（8）：1736-1747．

［2］Thompson AM，Lane DP．p53 transcriptional pathways inbreast cancer：the good，the bad and the complex［J］．JPathol，2010，220（4）：401-403．

［3］Fernandez-Cuesta L，Anaganti S，Hainaut P，et al．Estrogen levels act as a rheostat on p53 levels and modulatep53-dependent responses in breast cancer cell lines［J］．Breast Cancer Res Treat，2011，125（1）：35-42．

［4］包刚，杨德启，周波，等．新辅助化疗对乳腺癌组织中雌激素、孕激素受体及p53和Cer b B-2表达的影响［J］．中华医学杂志，2007，87（40）：2843-2845．

［5］Poelman SM，Heimann R，Fleming GF，et al．Invariantp53 immunostaining in primary and recurrent breastcancer［J］．Eur J Cancer，2004，40（1）：28-32．

［6］Harris LN，Broadwater G，Lin NU，et al．Molecular subtypesof breast cancer in relation to paclitaxel response and outcomes in women with metastatic disease：results from CALGB9342［J］．Breast Cancer Res，2006，8（6）：R66．

［7］Sidoni A，Cavaliere A，Bellezza G，et al．Coexpression ofHER-2／neu and p53 in breast cancer identifies a subsetwith an aggressive biopathological profile［J］．Tumori，2006，92（5）：412-415．

［8］Davidoff AM，Herndon JN，Glover NS，et al．Relation between p53 overexpression and established prognostic factors in breast cancer［J］．Surgery，1991，110（2）：259-264．

［9］Auriemma A．Invasive breast cancer：Ki-67 evaluation in3909 early breast cancer patients［J］．ASCO，2005，23（16suppl）：678．

［10］仇加高．乳腺浸润性导管癌中p53和表皮生长因子受体的表达及其意义［J］．实用癌症杂志，2013，29（1）：31-33．

［11］淦锦，黄桂林，李志刚，等．乳腺癌改良根治术后复发转移相关因素［J］．中华实用诊断与治疗杂志，2013，27（1）：33-35．

［12］Dooker KA，Dignam JJ，Ferrer K，et al．p53 as a marker of prognosis in African-American women with breast cancer［J］．Ann Surg Oncol，2010，17（5）：1398-1405．

［13］Iwase H，Ando Y，Ichihara S，et al．Immunohistochemicalanalysis on biological markers in ductal carcinoma in situof the breast［J］．Breast Cancer，2001，8（2）：98-104．

［14］Ross JS，Mc Kenna BJ．The HER-2／neu oncogene intumors of the gastrointestinal tract［J］．Cancer Invest，2001，19（5）：554-568．

［15］de Azambuja E，Cardoso F，de Castro GJ，et al．Ki-67 asprognostic marker in early breast cancer：a meta-analysisof published studies involving 12，155 patients［J］．Br JCancer，2007，96（10）：1504-1513．

［16］王超奇，张艳，吴云飞，等．ER、PR、p53及c-er b B-2癌基因在乳腺癌中的表达及预后意义［J］．现代肿瘤医学，2013，2（3）：314-316．

［17］Sultana H，Kigawa J，Kanamori Y，et al．Chemosensitivityand p53-Bax pathway-mediated apoptosis in patients withuterine cervical cancer［J］．Ann Oncol，2003，14（2）：214-219．

［18］廖海涛，韦义萍，覃洪，等．乳腺癌3种耐药基因、p53蛋白、雌和孕激素受体的表达及相关性研究［J］．广西医学，2007（12）：1849-1851．

［19］Knappskog S，Lonning PE．P53 and its molecular basis tochemoresistance in breast cancer［J］．Expert Opin TherTargets，2012，16 Suppl 1：S23-S30．

［20］Qi X，Chang Z，Song J，et al．Adenovirus-mediated p53gene therapy reverses resistance of breast cancer cells toadriamycin［J］．Anticancer Drugs，2011，22（6）：556-562．

［21］Jackson JG，Pant V，Li Q，et al．p53-mediated senescenceimpairs the apoptotic response to chemotherapy and clinical outcome in breast cancer［J］．Cancer Cell，2012，21（6）：793-806．