小蓟有效部位的提取及其大鼠灌胃液的制备
2014-03-03陈菲盛柳青王建美
陈菲++++++盛柳青++++++王建美
[摘要] 目的 提取小蓟的有效部位并制备小蓟各提取物大鼠灌胃液。 方法 采用系统溶剂法提取小蓟的有效部位，并采用吐温-80增溶、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）助悬和食用油溶解等不同的方式制备小蓟各提取物大鼠灌胃液并进行稳定性观察。 结果 小蓟乙醇提取物的得率最大，采用色拉油溶解能较好地制备小蓟乙醚和乙酸乙酯提取物灌胃液；采用较高温度下CMC-Na助悬能较好地制备小蓟乙醇提取物灌胃液。 结论 系统溶剂法能较好地提取小蓟各有效部位，小蓟各提取物大鼠灌胃液制备方法可行，稳定性好。
[关键词] 小蓟；系统溶剂法；制备；大鼠灌胃液
[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2014）01（c）-0007-03
小蓟为菊科植物刺儿菜[Cirsium Setosum（Willd.）MB.]的全草或根，分布于我国大部分地区，在中欧、俄罗斯东部、日本、朝鲜等地区亦有分布。小蓟入药始见于《名医别录》，为传统的中药，小蓟性凉、味甘、苦，归心、肝经，具有凉血止血，祛瘀消肿之功效，用于鼻出血、吐血、尿血、便血、崩漏下血、外伤出血、痈肿疮毒等。现代研究证实，小蓟全株含胆碱、儿茶酚胺类、皂苷、生物碱等成分，其提取物有明显的收缩血管、缩短凝血时间的作用[1-4]。为了利用小蓟的药理活性建立实验大鼠缺血模型，本实验采用系统溶剂法提取了不同极性范围的小蓟有效部位，并把各提取物制备成利于大鼠服用的灌胃液，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 仪器与试药
恒温水浴锅（杭州蓝天化验仪器厂），旋转蒸发器（上海青浦沪西仪器厂）；小蓟由金华市药材供应站提供并经本院吴远文副教授鉴定；石油醚、乙醚、乙酸乙酯、乙醇均为分析纯；尼泊金乙酯、羧甲基纤维素钠（CMC-Na）、吐温-80为药用；色拉油为食用。
1.2 方法
1.2.1 系统溶剂法提取小蓟药材
1.2.1.1 石油醚除杂 准确称取干燥的小蓟药材400 g，切碎，装入5000 ml圆底烧瓶中，以1∶8的料液比加入石油醚，浸泡30 min后，置75℃恒温水浴锅中回流提取3次，第1次1 h，第2次45 min，第3次30 min，过滤，滤液回收石油醚后弃去。
1.2.1.2 提取乙醚部位 取挥发除去石油醚的小蓟药材，装入5000 ml圆底烧瓶中，以1∶8的料液比加入乙醚，浸泡30 min后，置40℃恒温水浴锅中回流提取3次，第1次1 h，第2次45 min，第3次30 min，过滤，合并3次提取液，滤液在旋转蒸发仪上减压回收溶剂。浓缩液挥干溶剂后称重并计算得率[5]。
1.2.1.3 提取乙酸乙酯部位 取挥发除去乙醚的小蓟药材，装入5000 ml圆底烧瓶中，以1∶8的料液比加入乙酸乙酯，浸泡30 min后，置85℃恒温水浴锅中按“1.2.1.2”所述方法提取并计算得率。
1.2.1.4 提取乙醇部位 取挥发除去乙酸乙酯的小蓟药材，装入5000 ml圆底烧瓶中，以1∶8的料液比加入乙醇，浸泡30 min后，置90℃恒温水浴锅中按“1.2.1.2”所述方法提取并计算得率。
1.2.1.5 提取水溶性成分 取挥发除去乙醇的小蓟药材，置于5000 ml陶瓷罐中，以1∶8的料液比加入蒸馏水，浸泡30 min后，煮沸提取3次，第1次1 h，第2次45 min，第3次30 min，过滤，合并3次提取液，滤液浓缩至150～200 ml备用。
1.2.2 小蓟各提取物大鼠灌胃液的制备
1.2.2.1 小蓟乙醚提取物灌胃液制备 取工艺筛选用小蓟乙醚提取物（含药材400 g，同“1.2.1”制备），分成3份，分别按3种不同的方法进行灌胃液配制，第1种方法是采用2%吐温-80增溶，第2种方法是采用1%CMC-Na溶液助悬，第3种方法是用适量色拉油溶解乙醚提取物。3种方法配制完成后进行稳定性观察，选择结果与稳定性最好的方法进行小蓟乙醚提取物灌胃液的制备。
1.2.2.2 小蓟乙酸乙酯提取物灌胃液的制备 因乙酸乙酯的极性与乙醚比较接近，因此可参照乙醚提取物配制的方法。
1.2.2.3 小蓟乙醇提取物灌胃液的制备 取工艺筛选用小蓟乙醇提取物（含药材400 g，同“1.2.1”制备），分成5份，按5种不同的方法进行灌胃液配制，第1种方法是采用2%吐温-80增溶，第2种方法是直接用水溶解，第3种方法是用色拉油溶解，第4种方法是在常温下用1%CMC-Na溶液助悬，第5种方法是在较高温度下用1%CMC-Na溶液助悬。5种方法配制完成后进行稳定性观察，选择结果与稳定性最好的方法进行小蓟乙醇提取物灌胃液的制备。
1.2.2.4 小蓟水提物灌胃液的制备 取“1.2.1.5”项下制备的小蓟水提液，在快速搅拌下缓缓加入5%尼泊金乙酯乙醇溶液适量，用蒸馏水定容至200 ml，制成每毫升含生药量为2 g的灌胃液。
因水提物在水中溶解性好，因此水提物灌胃液的制备不进行制备方法筛选和稳定性观察。
2 结果
2.1 不同溶剂提取物的得率
各提取部位称重并计算得率（提取物相对于药材的百分比）（表1）。
由表1可知，不同溶剂的提取率存在较大的差异，其得率的大小顺序为：乙醇>乙酸乙酯>乙醚，可以看出，得率随溶剂极性的增大而增大。另外小蓟的水溶性部分由于含有较多的多糖等成分，使浓缩较为困难，因此直接浓缩到灌胃液所需体积，不计算得率。
2.2 小蓟各提取物大鼠灌胃液制备的筛选结果
2.2.1 小蓟乙醚提取物灌胃液制备的筛选结果
从考察结果来看，提取物加2%吐温-80制备的溶液初始呈溶解状态，24 h后溶液呈絮凝状，摇匀即散。用1%CMC-Na溶液制备的溶液在CMC-Na溶解中混悬不均匀，直接用色拉油溶解的溶液呈完全溶解状态，稳定性好。故选取色拉油溶解的方式进行乙醚提取物灌胃液的制备：取小蓟乙醚提取物用少量色拉油溶解，加0.1%尼泊金乙酯，用色拉油定容至200 ml，制成每毫升含生药量为2 g的灌胃液。
2.2.2 小蓟乙酸乙酯提取物灌胃液制备的筛选结果
因乙酸乙酯的极性与乙醚比较接近，所以也用色拉油作溶剂溶解提取物：取小蓟乙酸乙酯提取物用少量色拉油溶解，加0.1%尼泊金乙酯，用色拉油定容至200 ml，制成每毫升含生药量为2 g的灌胃液。从溶解情况来看，提取物基本溶解，有少量不溶物，在给大鼠灌胃前可先摇匀再灌服。
2.2.3 小蓟乙醇提取物灌胃液制备的筛选结果
从考察结果来看，乙醇提取物加2%吐温-80制备的溶液初始呈溶解状态，24 h后溶液呈沉淀状，摇匀即散。采用水和色拉油都只能部分地溶解提取物。采用1%CMC-Na溶液制备的溶液颗粒呈稳定的悬浮状态，但在加热的条件下助悬形成的颗粒相对较细。因此实验选取在较高温度下1%CMC-Na溶液助悬的方式进行小蓟乙醇提取物灌胃液的制备：取小蓟乙醇提取物置80℃水浴中加热，将配制好的适量1% CMC-Na溶液也置80℃水浴中加热。把提取物在加热状态下加入到CMC-Na溶液中，边加边搅拌，加完后继续搅拌一段时间，缓慢加入5%尼泊金乙酯乙醇溶液适量，加1% CMC-Na溶液定容至200 ml。制成每毫升含生药量为2 g的灌胃液。
3 讨论
在系统溶剂法提取中，选择乙醚、乙酸乙酯、乙醇、水作为提取溶剂，主要是考虑到这4个溶剂基本能提取出小蓟的不同极性的有效部位，为课题组下一步实验动物的建模打好基础[6]。另外石油醚作为非极性有机溶剂，只能提取一些非极性的无效成分，所以实验选择石油醚作为除杂的溶剂。
大鼠作为常用的实验动物，在选择灌胃液的溶剂时应考虑无毒和对大鼠的实验观察影响最小，乙醚、乙酸乙酯、乙醇作为常用的有机溶剂对实验动物有一定的毒性，所以其提取物必须选择其他溶剂作成灌胃液，色拉油和水无毒且对大鼠实验无影响，而实验又不涉及高脂模型，所以选择色拉油和水作为大鼠灌胃液的溶剂[7]。
在配制方法筛选中，实验选择了用表面活性剂吐温-80增溶、高分子溶液如CMC-Na溶液助悬和食用油直接溶解的方式增加各提取物的溶解度，其中考虑到动物实验的安全性，吐温-80的浓度控制在2%[8]。在用CMC-Na溶液助悬时，CMC-Na浓度越高，对微粒的悬浮性越好[9]，但浓度升高，黏稠度增大，对灌胃带来的阻力会增大，因此在预实验时，选择1%作为CMC-Na溶液的浓度。
[参考文献]
[1] 冯子明，杨桠楠，姜建双，等.小蓟的化学成分研究[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（6）：87-89.
[2] 祁爱蓉，徐彩，蔡芬芳.小蓟、小蓟炭的主要成份及止血作用研究综述[J].内蒙古中医药，2012，20（10）：104.
[3] 曹琴，陈建涛.小蓟的化学成分研究[J].药学实践杂志，2010，28（4）：35-37.
[4] 李丹，吴莲波.中药小蓟的药理作用研究进展[J].黑龙江中医药，2010，（3）：46-47.
[5] 戴冰，邹双华，刘磊，等.新疆软紫草系统溶剂法提取分离部位的抗生育作用研究[J].中药材，2007，30（9）：1120-1122.
[6] 李端.中药化学技术[M].2版.北京：人民卫生出版社，2010：15-16.
[7] 马健康，姜艳霞，马洪波，等.系统溶剂法考察羊蹄根对小鼠血小板减少症的实验研究[J].时珍国医国药，2009， 20（5）：1179-1180.
[8] 郭志鑫，孙会敏，杨锐，等.药用辅料聚山梨酯80（吐温-80）质量状况分析[J].药学实践杂志，2012，30（6）：63-65.
[9] 杨桂明.中药药剂学[M].2版.北京：人民卫生出版社，2010：180-184.
（收稿日期：2013-10-11 本文编辑：郭静娟）
2.2.2 小蓟乙酸乙酯提取物灌胃液制备的筛选结果
因乙酸乙酯的极性与乙醚比较接近，所以也用色拉油作溶剂溶解提取物：取小蓟乙酸乙酯提取物用少量色拉油溶解，加0.1%尼泊金乙酯，用色拉油定容至200 ml，制成每毫升含生药量为2 g的灌胃液。从溶解情况来看，提取物基本溶解，有少量不溶物，在给大鼠灌胃前可先摇匀再灌服。
2.2.3 小蓟乙醇提取物灌胃液制备的筛选结果
从考察结果来看，乙醇提取物加2%吐温-80制备的溶液初始呈溶解状态，24 h后溶液呈沉淀状，摇匀即散。采用水和色拉油都只能部分地溶解提取物。采用1%CMC-Na溶液制备的溶液颗粒呈稳定的悬浮状态，但在加热的条件下助悬形成的颗粒相对较细。因此实验选取在较高温度下1%CMC-Na溶液助悬的方式进行小蓟乙醇提取物灌胃液的制备：取小蓟乙醇提取物置80℃水浴中加热，将配制好的适量1% CMC-Na溶液也置80℃水浴中加热。把提取物在加热状态下加入到CMC-Na溶液中，边加边搅拌，加完后继续搅拌一段时间，缓慢加入5%尼泊金乙酯乙醇溶液适量，加1% CMC-Na溶液定容至200 ml。制成每毫升含生药量为2 g的灌胃液。
3 讨论
在系统溶剂法提取中，选择乙醚、乙酸乙酯、乙醇、水作为提取溶剂，主要是考虑到这4个溶剂基本能提取出小蓟的不同极性的有效部位，为课题组下一步实验动物的建模打好基础[6]。另外石油醚作为非极性有机溶剂，只能提取一些非极性的无效成分，所以实验选择石油醚作为除杂的溶剂。
大鼠作为常用的实验动物，在选择灌胃液的溶剂时应考虑无毒和对大鼠的实验观察影响最小，乙醚、乙酸乙酯、乙醇作为常用的有机溶剂对实验动物有一定的毒性，所以其提取物必须选择其他溶剂作成灌胃液，色拉油和水无毒且对大鼠实验无影响，而实验又不涉及高脂模型，所以选择色拉油和水作为大鼠灌胃液的溶剂[7]。
在配制方法筛选中，实验选择了用表面活性剂吐温-80增溶、高分子溶液如CMC-Na溶液助悬和食用油直接溶解的方式增加各提取物的溶解度，其中考虑到动物实验的安全性，吐温-80的浓度控制在2%[8]。在用CMC-Na溶液助悬时，CMC-Na浓度越高，对微粒的悬浮性越好[9]，但浓度升高，黏稠度增大，对灌胃带来的阻力会增大，因此在预实验时，选择1%作为CMC-Na溶液的浓度。
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[7] 马健康，姜艳霞，马洪波，等.系统溶剂法考察羊蹄根对小鼠血小板减少症的实验研究[J].时珍国医国药，2009， 20（5）：1179-1180.
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[9] 杨桂明.中药药剂学[M].2版.北京：人民卫生出版社，2010：180-184.
（收稿日期：2013-10-11 本文编辑：郭静娟）
2.2.2 小蓟乙酸乙酯提取物灌胃液制备的筛选结果
因乙酸乙酯的极性与乙醚比较接近，所以也用色拉油作溶剂溶解提取物：取小蓟乙酸乙酯提取物用少量色拉油溶解，加0.1%尼泊金乙酯，用色拉油定容至200 ml，制成每毫升含生药量为2 g的灌胃液。从溶解情况来看，提取物基本溶解，有少量不溶物，在给大鼠灌胃前可先摇匀再灌服。
2.2.3 小蓟乙醇提取物灌胃液制备的筛选结果
从考察结果来看，乙醇提取物加2%吐温-80制备的溶液初始呈溶解状态，24 h后溶液呈沉淀状，摇匀即散。采用水和色拉油都只能部分地溶解提取物。采用1%CMC-Na溶液制备的溶液颗粒呈稳定的悬浮状态，但在加热的条件下助悬形成的颗粒相对较细。因此实验选取在较高温度下1%CMC-Na溶液助悬的方式进行小蓟乙醇提取物灌胃液的制备：取小蓟乙醇提取物置80℃水浴中加热，将配制好的适量1% CMC-Na溶液也置80℃水浴中加热。把提取物在加热状态下加入到CMC-Na溶液中，边加边搅拌，加完后继续搅拌一段时间，缓慢加入5%尼泊金乙酯乙醇溶液适量，加1% CMC-Na溶液定容至200 ml。制成每毫升含生药量为2 g的灌胃液。
3 讨论
在系统溶剂法提取中，选择乙醚、乙酸乙酯、乙醇、水作为提取溶剂，主要是考虑到这4个溶剂基本能提取出小蓟的不同极性的有效部位，为课题组下一步实验动物的建模打好基础[6]。另外石油醚作为非极性有机溶剂，只能提取一些非极性的无效成分，所以实验选择石油醚作为除杂的溶剂。
大鼠作为常用的实验动物，在选择灌胃液的溶剂时应考虑无毒和对大鼠的实验观察影响最小，乙醚、乙酸乙酯、乙醇作为常用的有机溶剂对实验动物有一定的毒性，所以其提取物必须选择其他溶剂作成灌胃液，色拉油和水无毒且对大鼠实验无影响，而实验又不涉及高脂模型，所以选择色拉油和水作为大鼠灌胃液的溶剂[7]。
在配制方法筛选中，实验选择了用表面活性剂吐温-80增溶、高分子溶液如CMC-Na溶液助悬和食用油直接溶解的方式增加各提取物的溶解度，其中考虑到动物实验的安全性，吐温-80的浓度控制在2%[8]。在用CMC-Na溶液助悬时，CMC-Na浓度越高，对微粒的悬浮性越好[9]，但浓度升高，黏稠度增大，对灌胃带来的阻力会增大，因此在预实验时，选择1%作为CMC-Na溶液的浓度。
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[1] 冯子明，杨桠楠，姜建双，等.小蓟的化学成分研究[J].中国实验方剂学杂志，2012，18（6）：87-89.
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[5] 戴冰，邹双华，刘磊，等.新疆软紫草系统溶剂法提取分离部位的抗生育作用研究[J].中药材，2007，30（9）：1120-1122.
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[9] 杨桂明.中药药剂学[M].2版.北京：人民卫生出版社，2010：180-184.
（收稿日期：2013-10-11 本文编辑：郭静娟）
