几种不同措施对高寒牧区羔羊大肠杆菌病的防治效果研究

祝艳华，陈 颢，张国斌，张 忠

（1.甘肃畜牧工程职业技术学院，武威 733006；2.甘肃省绵羊繁育技术推广站）

几种不同措施对高寒牧区羔羊大肠杆菌病的防治效果研究

祝艳华1，陈 颢2，张国斌2，张 忠1

（1.甘肃畜牧工程职业技术学院，武威 733006；2.甘肃省绵羊繁育技术推广站）

应用几种不同防治措施对不同年龄阶段羔羊的大肠杆菌病进行预防及临床治疗试验。结果表明：中西药结合法对羔羊大肠杆菌病的防治效果均最佳，与单独使用抗菌素或中药相比，差异显著（P≤0.05）；益生菌制剂虽治疗效果不佳，但预防效果与单独使用抗菌素、中药相比，差异显著（P≤0.05）。

中西药；益生菌；羔羊；大肠杆菌；防治

大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的家畜肠道传染性疾病，本病不仅是条件性病原菌，常因环境、气候以及饲养管理的改变而引起动物发病，而且还可通过病畜的排泄物，主要是粪便污染饮水、饲料等经消化道感染，羊不分年龄大小都易感，临床上以严重腹泻和败血症为特征［1］。自2002年以来在甘肃省肃南高寒地区该病频繁发生，且羔羊发生较多［2］。特别在2002—2004年期间甘肃省绵羊繁育技术推广站及周边牧区羔羊大肠杆菌病的发病率达15%，致死率高达95%［2］。羊大肠杆菌病的发生造成羔羊数量、种用和商品价值降低，严重影响了当地牧民

的收入［3］。为了降低该病造成的损失，本试验通过几种不同防治方案的比较分析，最终筛选出最佳防治方案,以期为进一步提高本病的防治效果提供临床参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药物 抗菌素类（环丙沙星、卡那霉素）、中药方剂（配方：白头翁10g，黄连10g，秦皮12g，生山药50g，山萸肉12 g，诃子肉10 g，伏苓10 g，白术15 g，白芍10 g，干姜5 g，甘草6 g）、益生菌制剂（购自杨凌益佳泰生物科技有限公司）。

1.1.2 动物 甘肃省绵羊繁育技术推广站羊场不同日龄的羔羊。

1.1.3 仪器 生化培养箱（型号：SPX-250Y）、超净工作台（型号：BHC-1000IIB2）、高压灭菌器（型号：LDZX-30FBS）、显微镜（OLYMPUS型号：CX31-12C04）、冰箱（型号：DW-40L525）、离心机（型号：DT5-2B）等。

1.1.4 培养基 肉汤培养基，营养琼脂培养基，麦康凯琼脂培养基，三糖铁培养基（TSI），伊红-美蓝琼脂培养基（EMB）。

1.2 方法

1.2.1 预防试验

1.2.1.1 分组 2009年4月—2010年6月随机从甘肃省绵羊繁育技术推广站羊场选择1周龄以内、1～3周龄和3～6周龄各阶段临床健康的羔羊进行预防试验，共计375只。根据试验先后分别记为A～E组，每组内分别设3个年龄阶段组。试验分组情况见表1。

表1 羔羊大肠杆菌病临床预防试验分组 只

1.2.1.2 给药方法 A组（中药组）：每只羔羊灌服5 mL，2次/d，连用3 d；B组（西药组）：健康羔羊肌肉注射乳酸环丙沙星0.2 mL/kg体重，2次/d，连用3 d；C组（中西结合组）：给药方法是将A、B组的方法同时使用；D组（益生菌制剂组）：在饲料中添加10%的益生菌制剂（活菌总数≥50×108cfu/g）；E组（空白对照组）：不使用任何药物。

试验结束后，继续观察1周。试验期间记录各组的发病数、死亡数，并对病、死羔羊进行症状观察、尸体剖检、细菌分离鉴定、动物试验等大肠杆菌病的确诊。

1.2.2 临床治疗试验

1.2.2.1 诊断方法

1.2.2.1.1 细菌培养 无菌采集病死羊心、肝、脾、淋巴结等组织接种于麦康凯琼脂培养基上，经37℃培养36 h后生长出圆形光滑、隆起且湿润的红色菌落。伊红美兰琼脂平板长出金属光泽的菌落。

1.2.2.1.2 显微镜检查 无菌采取死羊的心、肝、脾、淋巴结及上述培养的单个纯菌落分别进行涂片再用美蓝染色法染色镜检，可见大小一致的革兰氏阴性短杆菌。

1.2.2.1.3 生化实验 将纯培养物分别接种于各种糖培养基、甲基红、枸橼酸盐、三硝酸盐等生化培养基，37℃培养24～48 h。生化反应结果：待检菌在蔗糖、麦芽糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇培养基中产酸产气，甲基红、靛基质试验阳性，硫化氢、V-P、枸橼酸盐、硝酸盐试验阴性。

通过上述实验室诊断方法可确诊为大肠杆菌病。

1.2.2.2 试验分组及用药方法 对163只患病羔羊分阶段分组，在常规隔离消毒的基础上，分别使用不同的给药方案进行治疗，具体分组及主要治疗方法如下：

Ⅰ组：患病羊肌肉注射乳酸环丙沙星0.2 mL/kg体重，2次/d，连用3 d。

Ⅱ组：患病羔羊用中药治疗，每只羔羊灌服10 mL，2次/d，连用3 d。

Ⅲ组：患病羊肌肉注射乳酸环丙沙星0.2 mL/kg体重，2次/d，连用3 d；同时患病羔羊灌服10mL中药煎剂，2次/d，连用3d。

Ⅳ组：在发病羔羊的浓缩料中添加30%的益生菌制剂（活菌总数≥50×108cfu/g），连用3 d。

注意：混饲药是自由采食，现配现用。

1.2.2.3 中药制剂的制备 采用传统水煎法，将药物用蒸馏水洗净，浸泡，加8～10倍量蒸馏水煎煮30 min，2次，合并滤液用旋转蒸发仪75℃浓缩至1 g/mL，灭菌，4℃保存［4］。

1.2.2.4 疗效评价指标 用药后，记录发病数、治愈率、死亡率等进行疗效评价。

1）死亡率：在治疗期间，羔羊出现大肠杆菌病的典型症状并死亡，尸体剖检有典型的特征性病变，并从心、肝、脾、淋巴结等组织中分离出大肠杆菌，判断为感染死亡。

2）治愈率：凡在治疗期间，经用药后病羊精神状态、食欲恢复正常，下痢症状消失，体重增加，均属治愈，根据治愈羊只数计算治愈率。

2 结果与分析

2.1 预防试验结果

由表2可知，各用药组与空白对照组相比，差异均显著（P<0.05）。试验组中益生菌制剂组与中西药结合组保

护率较高，中药组次之，保护效果最差的是抗生素组。

表2 试验期间各组羔羊大肠杆菌病的发病率

2.2 治疗试验结果

对163只患病羔羊采用不同的治疗方法，经过一定时间治疗，各组的治疗效果见表3。由表3可以得到以下结论：Ⅲ组治疗效果最好，Ⅰ组较Ⅲ组效果差，Ⅱ组又较Ⅰ组效果差，而疗效最差的是Ⅳ组。统计学表明，各组间差异均显著（P<0.05）。

表3 各种治疗方案的治疗效果

3 讨论与分析

1）预防试验结果表明，应用中西医结合和益生菌制剂对羔羊大肠杆菌病的预防效果优于单纯应用中药或西药。中西医结合预防动物疾病的效果现已被业界一致认可，并广泛应用于动物临床，但相比纯中药预防缺点在于药物残留对动物及人易造成危害，产生耐药性从而降低预防效果。故益生菌制剂的应用是值得推广的预防措施。

2）治疗试验结果表明，采用中药组方结合抗菌素（环丙沙星）治愈率高于单纯应用中药或西药，而预防效果最佳的益生菌制剂却治愈率最低。说明益生菌在提高免疫力，维持消化肠道微生态平衡方面优势明显，但在直接杀灭病原，尤其是发病后应用效果不好。所以中西药结合方式是当地羔羊大肠杆菌病治疗的优选措施，西药和中药二者联合互补、相互促进，疗效很好［5］。

3）本试验中选用的中药方剂配合抗菌素在防治羔羊大肠杆菌病中起到了很好的效果，该组方中白头翁、黄连、秦皮、诃子、白芍等对大肠杆菌有直接抑制作用，能增强机体对病原微生物的抵抗力［6-7］；山药、山萸肉、白术、茯苓、甘草等有增强机体免疫力的作用［7］；干姜能抑制异常发酵［7］。以上中药既起到了良好防治该病的作用，而且减少了抗菌素的用量，在一定程度上解决了大量单独应用抗菌素带来的耐药性、兽药残留问题，保证了动物健康，提高了动物福利，保障了养羊业健康发展。

4）益生菌制剂是当前人类和动物临床研究的热点，在维持正常消化功能、增强免疫力、抑制病原菌、提高动物生产性能方面具有独特优势［8］。本试验结果也表明，虽然益生菌制剂治疗羔羊大肠杆菌病的效果不及其他药物，但其预防效果非常好，所以规模化羊场应用益生菌制剂预防大肠杆菌病，且具有广阔的前景。

5）大肠杆菌病是危害养羊业的一种常发疾病，尤其是在已发生过该病的羊场,大肠杆菌将成为常在菌，长期存在，在一定的气候条件下，尤其初春季节，发病率很高，危害严重。根据本试验结果，在羊场（舍）加强生物安全措施的同时,合理应用益生菌制剂预防羔羊大肠杆菌病，综合优势明显。一旦发病，仍需应用敏感抗菌素配合中药及时治疗才能收到好的效果。

［1］蔡宝祥.家畜传染病学［M］.4版.北京:中国农业出版社，2001：46-49.

［2］王天翔，陈颢.大肠杆菌引起羔羊综合症的诊疗［J］.青海畜牧兽医杂志，2004（5）：50.

［3］陈颢，张国斌，王治仓，等.高寒地区羔羊大肠杆菌病综合防治［J］.畜牧兽医杂志，2013，20（6）：13-14.

［4］张敬礼.中草药制剂对人工感染肉仔鸡大肠杆菌病防治效果的研究［J］.中国畜牧兽医，2006（6）：13-14.

［5］秦四海.自拟中草药复方防治蛋雏鸡大肠杆菌病的研究［J］.西北农林科技大学学报，2005，33（8）：41-46.

［6］刘玉庆，李晔，车程川，等.大肠杆菌对中草药敏感性试验及其方法研究［J］.中兽医医药杂志，2003（1）：3-5.

［7］王筠默.中药药理学［M］.上海：上海科学技术出版社，1998：35-115.

［8］陈利群.益生菌制剂生物效应的试验研究［D］.成都：电子科技大学，2004.

S858.26

A

2095-3887（2014）04-0055-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2014.04.014

2014-05-22

甘肃畜牧工程职业技术学院院列专项（2013GMGY008）

祝艳华（1977-），女，讲师，硕士。

张忠，Email：zhzh228@126.com。