血硫化氢与肠缺血-再灌注损伤大鼠凝血功能相关性研究

斯伟宏 卢根林 黄惊鸿 吴爱兵

1浙江省义乌市中心医院普通外一科 义乌 322000 2广东医学院附属医院肿瘤中心

硫化氢（H2S）是继NO和CO之后的第三气体信号分子，由胱硫醚-β-合成酶（CBS）、胱硫醚-γ-裂解酶（CSE）催化L-半胱氨酸代谢产生[1-3]。H2S能保护肠缺血-再灌注损伤大鼠小肠黏膜屏障、肝脏功能[4-5]。本研究探讨硫化氢对肠缺血-再灌注损伤大鼠凝血功能的影响，报道如下。

1 材料与方法

1.1 材 料 雄性Wistar大鼠（浙江大学医学院动物中心提供，清洁级，动物合格证号：201001018）。敏感硫电极和PXS-270离子计购于上海雷磁仪器厂。Sysmex CA-1500购于Sysmex CA-1500公司。硫氢化钠（NaHS）购于上海第一生化药业有限公司。

1.2 方法

1.2.1 动物模型及分组 雄性Wistar大鼠24只，6周龄，体质量 190～230g，平均（210±15）g，随机分为 S（假手术）组、I（缺血-再灌注）组，N（缺血-再灌注+NaHS）组，每组8只。S组仅行剖腹及游离肠系膜上动脉（SMA）术，I和N组剖腹、游离及钳夹SMA 60min和再灌注120min，建立大鼠肠缺血-再灌注损伤模型。N组在灌注前10min时静脉注射NaHS 100μmol/kg后按1mg/（kg·h）输注直到再灌注2h，S和I组静脉注射相同体积的生理盐水，作用时间和持续时间均同N组[4-5]。处死大鼠，取血离心分离血浆。

1.2.2 血浆H2S浓度与凝血指标检测 敏感硫电极法[6]测定血浆H2S浓度，Sysmex CA-1500凝血分析仪测定凝血指标。

1.3 统计学方法 应用SPSS13.0统计软件，计量资料以均数±标准差（x±s） 表示，多样本均数比较采用单因素方差分析，多样本均数间两两比较采用q检验，相关性采用直线相关分析。

2 结果

与 S 组比较，I组 APTT、PT、TT、D-二聚体增加，FIB、H2S减低（P＜0.01），表现为凝血功能障碍。N 组PT、APTT、TT、D-二聚体低于 I组、高于 S 组（P＜0.01），FIB、H2S 低于 S组、高于 I组（P＜0.01），凝血功能障碍得以改善，见表1。

表1 各组大鼠凝血指标、H2S浓度比较（x±s）

相关性分析显示，H2S与FIB呈正相关（r=0.758，P＜0.01），与 PT、APTT、TT、D-二聚体呈负相关（r=-0.715、-0.721、-0.689、-0.748，P＜0.01）。

3 讨 论

肠缺血-再灌注损伤时，由于氧自由基、炎症介质（包括细胞因子）大量释放，内源性H2S产生减少等多种因素作用，大鼠小肠黏膜屏障功能受损，表现为小肠黏膜通透性增加、肠源性细菌移位和内毒素血症等。

凝血过程包括凝血酶原酶复合物（也称为凝血酶原激活复合物）的形成、凝血酶原的激活和纤维蛋白的生成三个基本步骤。PT主要反映外源性凝血系统功能，APTT是内源性凝血因子缺乏最可靠的筛选指标，纤维蛋白原一种由肝脏合成的具有凝血功能的蛋白质，纤维蛋白是在凝血过程中，凝血酶切除血纤蛋白原中的血纤肽A和B而生成的单体蛋白质。D-二聚体是纤维蛋白单体经活化因子XIII交联后，再经纤溶酶水解所产生的一种特异性降解产物，是一个特异性的纤溶过程标记物，来源于纤溶酶溶解的交联纤维蛋白凝块。本研究发现，大鼠缺血-再灌注后，APTT、PT、TT、D-二聚体值均增加，FIB 减低，表现为凝血功能障碍。而给予NaHS后PT、APTT、TT、D-二聚体等均降低，FIB增加，与缺血-再灌注组比较差异有统计学意义（P＜0.01），即凝血功能障碍得以改善。H2S 与 FIB 呈正相关，与 PT、APTT、TT、D-二聚体呈负相关。提示H2S与肠缺血-再灌注损伤大鼠凝血功能改善相关。但吴之浩等[7]研究表明，内源性的H2S上调对急性出血坏死性胰腺炎患者TNF-α表达起促炎作用,并上调PAR-1、TF表达，致凝血功能障碍。提示硫化氢对凝血功能的影响可能有疾病的特异性，其具体作用机制尚需进一步研究。

［1］Kang K，Zhao MY，Jiang HC，et al.Role of Hydrogen Sulfide in Hepatic Ischemia-Reperfusion-Induced Injury In Rats［J］.Liver Transpl，2009，15（10）：1306-1314.

［2］ Sodha NR，Clements RT，Feng J，et al.The effects of therapeutic sulfide on myocardial apoptos-is in response to ischemia-reperfusion injury［J］.Eur JCardiothorac Surg，2008，33（5）：906-913.

［3］ Tamizhselvi R，Moore PK，Bhatia M.Hydrogen sulfide acts as amediator of inflammation in acute pancreatitis:in vitro studies using isolated mouse pancreatic acinar cells［J］.J CellMolMed，2007，11（2）：315-326.

［4］卢根林，闫兴军，邓勇，等.硫化氢在肠缺血-再灌注损伤大鼠肝脏功能障碍中的作用［J］.中华实验外科杂志，2010，27（7）：907-910.

［5］闫兴军，卢根林，邓勇，等.硫化氢在肠缺血-再灌注损伤大鼠肠粘膜屏障功能障碍中的作用［J］.中华实验外科杂志，2010，27（1）：71-74.

［6］耿彬，杜军保，唐朝枢.敏感硫电极法在测定心血管组织细胞及血浆胱硫醚-γ-裂解酶/硫化氢的应用［J］.北京大学学报（医学版），2005，37（5）：545-548.

［7］吴之浩，卢根林，邓勇.硫化氢对急性出血坏死性胰腺炎患者凝血功能的影响［J］.中国乡村医药，2012，19（15）：52-53.