P21基因rs3176352位点多态性与东北地区汉族女性子宫内膜癌发病风险无关

银铎，王宁，张淑兰，鲁艳明，魏恒，霍乃晨，肖倩，欧阳玲

（中国医科大学附属盛京医院妇产科，沈阳110004）

·论著·

P21基因rs3176352位点多态性与东北地区汉族女性子宫内膜癌发病风险无关

银铎，王宁，张淑兰，鲁艳明，魏恒，霍乃晨，肖倩，欧阳玲

（中国医科大学附属盛京医院妇产科，沈阳110004）

目的研究P21基因rs3176352位点多态性与东北地区汉族女性子宫内膜癌之间的关系。方法通过测序及限制性片段长度多态性聚合酶链反应方法，对263例子宫内膜癌患者及315例健康人外周血DNA的P21基因rs3176352位点进行基因型分型。结果rs3176352位点C等位基因频率在病例组与对照组中无显著差异（P=0.492）。rs3176352位点CC基因型频率在病例组和对照组中分别为0.114和0.098。多因素logistic回归分析提示，CC基因型与GG基因型相比，患子宫内膜癌的风险无明显增加（OR=1.226，95%CI：0.698～2.153，P=0.479），经校正后仍无显著差异（P=0.406）。并且rs3176352位点不同基因型与子宫内膜癌分化程度无明显联系（P=0.743）。结论在东北地区汉族女性中，P21基因rs3176352位点的多态性与子宫内膜癌的发生风险无明显关联。

P21基因；单核苷酸多态性；子宫内膜癌

子宫内膜癌是世界范围内发生率第二高的女性生殖道恶性肿瘤［1］。依据流行病学、组织病理学及临床表现的特点，子宫内膜癌可以分为两种主要类型（Ⅰ和Ⅱ型）［2］。80%的Ⅰ型子宫内膜癌都有共同的危险因素，即无拮抗的雌激素作用，常导致子宫内膜过度增殖，也被称作子宫内膜样癌。而Ⅱ型子宫内膜癌通常在绝经后的老年女性中出现，通常不伴有子宫内膜增殖，也被称为非子宫内膜样癌，其主要病理类型为浆液性和透明细胞癌，与雌激素作用无明显关系。个体的遗传易感性差异是子宫内膜癌的发生中不可忽视的因素之一。有研究表明，雌激素受体基因［3］、芳香化酶基因［4］、肥胖相关基因［5］以及细胞周期相关基因［6，7］的多态性均与子宫内膜癌的发生相关。对于恶性肿瘤来说，细胞周期调控异常是恶性转化的关键步骤。而在细胞周期相关的基因中，P21基因（也称CDKN1A、WAF1）是对细胞周期进行负调控的关键基因之一，能够通

过与包括cyclinE-cdk2、cyclinA-cdk2和cyclinD-cdk4在内的cyclin-cdk复合物结合抑制Rb蛋白磷酸化，使细胞阻滞于G1期［8～10］。目前，关于P21基因多态性与子宫内膜癌的关系研究较少。在汉族人群中，尚无内含子区的rs3176352位点多态性与子宫内膜癌的相关性研究。为此，我们对rs3176352位点进行了病例对照研究，以期发现P21基因与子宫内膜癌发生相关的遗传风险。

1 材料与方法

1.1 研究对象选取

采集2011年8月至2012年12月间中国医科大学附属盛京医院经手术病理确诊的子宫内膜癌病例，共263例（病例组）。同时采集同期体检的健康对照者315例（对照组）。病例组与对照组均为东北地区汉族女性。对照组的纳入标准：无异常子宫内膜病变病史，无其他恶性肿瘤病史，连续2年内宫颈细胞学检查正常，连续2年内妇科超声检查无异常。研究对象在采集样本时签署知情同意书。

1.2 基因型检测

DNA提取自外周血，采用血液DNA试剂盒提取（北京天根公司）。rs3176352位点的多态性检测采用限制性片段长度多态性聚合酶链反应方法，具体方法与我们之前的研究［11］相同。上游引物（F）：5′-GACACCACTGGAGGGTGACT-3′，下游引物（R）：5′-GGTCTTTGCTGCCTACTTGC-3′（美国Invitrogen公司）。PCR反应体系20 μL（日本TaKaRa公司），其中10×PCR buffer 2 μL，引物各1 μL（5 μmol/L），dNTP 2 μL（2.5 mol/L），DNA模板（100 ng/μL）2 μL，Taq酶1 U，ddH2O补足至20 μL。PCR循环条件：94℃变性5 min，94℃变性30 s、55℃退火30 s、72℃延伸45 s（共35个循环），72℃延伸7 min。扩增产物片段长为448 bp，用10 U ApaLⅠ内切酶（NEB公司）37℃酶切过夜，酶切产物用3%琼脂糖凝胶电泳，紫外凝胶成像仪（香港Gene公司）检测扩增结果。C等位基因可以被酶切为159和289 bp两段，而G等位基因则无法被切开。

1.3 统计学分析

数据记录与统计分析采用SPSS 13.0软件。病例组与对照组间计数资料比较采用χ2检验（Fisher精确检验法），计量资料比较采用独立样本t检验，计量资料用x±s表示。P＜0.05为差异有统计学意义。采用Haploview 4.2软件计算哈代温伯格平衡（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）。

2 结果

2.1 病例组和对照组的基本特点

病例组和对照组的年龄分布、初潮年龄、首次妊娠年龄以及闭经年龄无显著差异（均P＞0.05）。病例组中，体重指数≥24、高血压和糖尿病的发生率分别为37.3%、39.5%和14.4%，均明显高于对照组（均P＜0.05）。同时，子宫内膜癌家族史也倾向于在病例组增高（分别为3.8%和1.3%，P=0.059）。此外，吸烟、饮酒、激素替代以及多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）病史均未见显著影响，见表1。按照FIGO子宫内膜癌的分期（2009），病例组中Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期的子宫内膜癌人数分别占83.7%、13.3%和2.7%，子宫内膜癌Ⅳ期仅有1例（0.4%）。病例组中，高分化、中分化及低分化人数分别占37.3%、34.2%和28.5%。

2.2 P21基因rs3176352位点等位基因和基因型频率与子宫内膜癌发病风险的关系

P21基因rs3176352位点经HWE检验，基因型分布符合HWE（P=0.144）。我们对P21基因rs3176352位点的等位基因频率与子宫内膜癌的发病风险进行研究（表2）。我们观察到C等位基因频率在病例组和对照组中分别为0.357和0.338，rs3176352位点等位基因频率在病例组和对照组中无明显差异（P=0.492），C等位基因与G等位基因相比，患子宫内膜癌的风险并无明显增加（OR=1.089，95%CI：0.854～1.388，P=0.492）。

此外，我们对P21基因rs3176352位点各基因型与子宫内膜癌发病风险之间的关系进行研究（表3），rs3176352位点的CC基因型频率在病例组和对照组中分别为0.114和0.098。多因素logistic回归分析提示CC基因型与GG基因型相比，患子宫内膜癌的风险并无明显增加（OR=1.226，95%CI：0.698～2.153，P=0.479）。在多因素logistic回归分析加入校正后，仍无明显差异（P=0.406）。CG基因型与GG基因型相比，患子宫内膜癌的风险也无明显增加（OR=1.075，95%CI：0.758～1.520，P=0.688），回归分析校正后也无明显差异（P=0.827）。

2.3 子宫内膜癌不同分化程度与基因型的关系

我们将子宫内膜癌不同分化程度与rs3176352位点的不同基因型进行对比分析（表4），发现CC基因型在低分化组（0.147）比高分化组（0.091）和中分化组（0.111）升高，但并无明显差异（P=0.743）。因此，rs3176352位点不同基因型与子宫内膜癌分化程度并无明显联系。

表1 研究对象的基本临床资料Tab.1 Demographic and clinical data of the study group

表2 子宫内膜癌病例组与对照组中P21基因rs3176352位点的等位基因频率Tab.2 Allele frequencies for P21rs3176352 in endometrial cancer patients and controls

表3 子宫内膜癌病例组与对照组中P21基因rs3176352位点的基因型频率Tab.3 Genotype frequencies for P21rs3176352 in endometrial cancer patients and controls

表4 不同分化程度与基因型的关系Tab.4 The relationship between differentiation and genotype

3 讨论

本研究中，我们鉴定了P21基因rs3176352位点的基因型频率与东北地区汉族女性子宫内膜癌之间的关系。在汉族人群中，尚无以上位点与子宫内膜癌的关联研究。Cai等［6］曾经报道了P21基因rs3829963、rs3176343、rs12207548、rs12528248和rs12191972这5个位点多态性与子宫内膜癌易感性的关系，但是这5个位点均与子宫内膜癌的易感性无关，而Cai等并未对rs3176352这个标签单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）位点进行研究。已发表的P21基因多态性的研究中，rs1801270位点是研究者关注的热点。Roh等［12］的研究就认为rs1801270位点与子宫内膜癌的易感性明显相关，该位点CC基因型具有更高的易感风险。我们在之前的P21基因多态性与宫颈癌的关系研究中发现，rs1801270、s3176352和rs3176352这3个SNP位点在东北地区汉族女性中存在紧密的连锁遗传［11］，由于存在这种紧密连锁遗传，我们实际上可以通过对rs3176352位点的研究来代表这3个位点。为此，本研究选择了rs3176352位点，以期发现P21基因rs3176352位点是否与子宫内膜癌的发病相关。

在研究过程中，我们将体重指数、高血压和糖尿病等子宫内膜癌的高危因素纳入到多因素logistic回归分析的校正因素。经过校正，我们发现rs3176352位点在基因型频率方面未构成其对子宫内膜癌的遗传易感性差异。同时，rs3176352位点等位基因频率在病例组和对照组中也无明显差异。但本研究样本尚不够大，扩大样本进行检测后数据才能更具代表性。因此，需要扩大样本范围进行检测。

有关遗传易感性的研究离不开地域与种群，为此我们仅选取我国东北地区的汉族人群，经过HWE检验符合HWE。但是，本研究的另一缺点是人群的选取仅仅局限于城市人群，并且是城市人群中经常在大型医院进行检查与治疗的人群。也就是说，这一群体相对的文化水平较高，经济水平较好。这不能不说是人为的研究偏倚，如果在未来的扩大样本中能够更多的纳入农村人群，相信会有更为准确的研究结果。

尽管目前多数研究认为P21基因的多态性与多种恶性肿瘤相关，如膀胱癌［13］、乳腺癌［14］、前列腺癌［15］、结直肠癌［16］和头颈部鳞状细胞癌［17］等，但对于P21基因SNP位点影响恶性肿瘤易感性的机制尚无明确的实验研究和结论。有研究人员认为，P21基因的rs1801270位点恰好处于第2外显子第31密码子，此位点的改变可能影响其与DNA的结合，并导致其功能的改变［18］；也有人认为P21基因启动子区存在p53结合位点［19］以及其他转录因子（E2F）的结合位点，启动子区的SNP改变可能导致P21基因在转录水平发生改变。此外，P21基因的rs3176352位点位于第二内含子区，可能会影响P21基因mRNA的剪切，从而影响其mRNA产量的稳定性。但本研究在子宫内膜癌方面，未能证实P21基因的多态性与其易感性相关。因此，P21基因多态性的机制研究可能无法成为子宫内膜癌研究中的关注重点。

综上，在东北地区汉族女性中，P21基因rs3176352位点基因型频率与子宫内膜癌的发生风险无明显关联。

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（编辑陈姜）

P21Gene rs3176352 Polymorphisms Are Not Associated with Risk ofEndometrialCancer among Northeastern Chinese Women

YINDuo，WANGNing，ZHANG Shu-lan，LUYan-ming，WEIHeng，HUONai-chen，XIAOQian，OUYANGLing
（DepartmentofGynecology and Obstetrics，Shengjing Hospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo determine if there is an association between P21rs3176352 polymorphisms and endometrial cancer in Han women from Northeast China.MethodsGenotyping of rs3176352 in the P21gene was performed by PCR-restriction fragment length polymorphism（PCRRFLP）of peripheral blood samples in 263 endometrial cancer patients and 315 healthy subjects.ResultsC allele frequencies of rs3176352 were not significantly different between patients and controls（P=0.492）.The CC genotype frequencies of rs3176352 were 0.114 and 0.098，respectively. In regression analysis，CCgenotype did notsignificantly increase the risk ofendometrialcancer（OR=1.226，95%CI：0.698-2.153，P=0.479）.After corrected，there were no significant differences either（P=0.406）.Genotypes frequencies of rs3176352 were not associated with differentiations of endometrial cancer（P=0.743）.ConclusionOur study demonstrates that in Han women from Northeast China，rs3176352 polymorphism of P21gene wasnotassociated with the risk ofendometrialcancer.

P21；single nucleotide polymorphism；endometrial cancer

R731.3

A

0258-4646（2014）01-0006-05

国家自然科学基金（81202047）；辽宁省自然科学基金（201202265）；辽宁省高等学校优秀人才支持计划（LJQ2013083）；辽宁省医学高峰建设工程（2010696）；沈阳市社会发展科技攻关专项（F11-262-9-15）；中国医科大学附属盛京医院“盛京自由研究者”计划（200806）

银铎（1965-），女，副教授，博士.

张淑兰，E-mail：zsl0909@sina.com

2013-11-21

网络出版时间：