重楼药材性状与4种皂苷含量分析

刘小芬，杨成梓，黄泽豪，范世明，黄秀植，洪晶

（福建中医药大学药学院，福建福州350122）

重楼Paridis Rhizoma为百合科Liliaceae植物云南重楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis（Franch.）Hand.-Mazz.或七叶一枝花Paris polyphylla Smith var.chinensis（Franch.）Hara的干燥根茎［1］。重楼药材中含有的主要活性成分为甾体皂苷类化合物，根据苷元的不同有薯蓣皂苷类和偏诺皂苷类［2］。2010年版《中华人民共和国药典》以重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ为质控指标性成分，其中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ为薯蓣皂苷，重楼皂苷Ⅵ、Ⅶ为偏诺皂苷，为重楼抗肿瘤活性的主要成分［3］。近年来，因野生药材资源急剧减少，需求量加大，造成市场上重楼药材的价格急剧上扬，在局部地区甚至出现断货的现象，总体价格较为混乱。福建全省均产重楼，但分布较为零散，目前部分县市正逐步进行重楼野生转家养的驯化模式。2011年至今，我们对福建野生重楼（另文报道）与栽培重楼［4］的资源与质量进行了较为深入的研究，本文作为系列报道之一，为进一步明确闽产重楼质量与市售品相比较是否具有优势，同时考察重楼药材市场现状，对研究过程中收集的19批次全国不同地区的重楼药材，采用HPLC法测定重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ的含量，并结合市场现状与药材性状进行分析，提供药材质量基本信息，为市售重楼药材质量把关与控制提供参考数据。

1 材料、仪器与试剂

1.1 药材来源于全国各地市中药材市场、药店、诊所共购得19批次的市售重楼药材。经福建中医药大学中药鉴定教研室杨成梓副教授进行鉴定，18批为重楼Paridis Rhizoma药材，另1批为拳参Bistortae Rhizoma药材，在该药店代重楼出售。观察各批次药材性状，记录产地、价格等相关信息。各样品信息汇总见表1。

表1 市售重楼药材来源与性状信息表

1.2主要仪器与试剂LC-10AT高效液相色谱分析仪（日本岛津公司）；PLATISIL ODS高效液相色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）（迪马科技有限公司）；重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ对照品（上海源叶生物制品有限公司。皂苷Ⅰ批号：20110817；皂苷Ⅱ批号：20110720；皂苷Ⅵ批号：20110803；皂苷Ⅶ批号：20110803，纯度≥98%）；甲醇（中国国药集团化学试剂有限公司，色谱纯）；重蒸水（自制），乙醇（中国国药集团化学试剂有限公司，分析纯）。

2 方法与结果

2.1 溶液制备根据参考文献［4］，精密称取标准品重楼皂苷Ⅰ、重楼皂苷Ⅱ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅶ，加色谱甲醇，制成重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ对照品混合溶液，溶液浓度分别为0.4020、0.3500、0.3790、0.4380 mg/mL，过0.22 μm有机滤膜，备用。精密称取粉末（过4号筛）0.50 g，置具塞三角锥瓶中，加入无水乙醇25 mL，称定重量，加热回流0.5 h，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，过0.22 μm有机滤膜，备用。

2.2 色谱条件色谱柱：PLATISIL ODS高效液相色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-水溶液（B）；洗脱方式：线性梯度，A相0～20 min（10%～30%），20～60 min（30%～60%），60～70 min（60%～30%）；检测波长：203 nm；流速：1 mL/min，进样量：10 μL；柱温：30℃。重楼皂苷Ⅶ保留时间约为44 min，重楼皂苷Ⅵ保留时间约为46 min，重楼皂苷Ⅱ保留时间约为56 min，重楼皂苷Ⅰ保留时间约为57 min。结果见图1。

图1 重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ混合对照品（A）与福建尤溪2样品（B）HPLC色谱图

2.3 线性关系分别吸取2、4、6、8、10、12、14 μL的重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ对照品溶液进样，以标准品含量为x坐标，峰面积为y坐标，绘制重楼皂苷标准品曲线。回归方程与相关系数见表2。

2.4 市售重楼药材样品测定按照2.2项下色谱条件，测定18批重楼样品、1批拳参样品的HPLC色谱图，将所得峰面积代入标准曲线，根据下面公式计算各样品中重楼皂苷含量。结果见表3。

表2 重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ线性回归方程与相关系数

重楼皂苷含量（%）＝xV1/（V2W）×100%［x：进样10 μL重楼皂苷含量（μg）；V1：定容体积25 mL；V2：HPLC进样量10 μL；W：称样量g］

3 讨论

3.1 药材性状与价格本次实验中购自全国各地中药材市场、药店、诊所等，产地主要为广西、云南、江西、重庆、湖南等地，已知产出时间为2008年—2011年。药材性状存在较大差异，其中9批为饮片，3批为小块或条块状，7批为个药；药材品相、直径大小等方面差异显著，同批药材最大均值约3.0 cm，最小均值约0.5 cm；药材断面兼有角质与粉性2种。药材价格亦差异明显，最高市售价相差可达4倍；且价格低的，其性状亦较差些。总体看来，重楼药材市售品存在药材性状良莠不齐，价格较为混乱等现象。

3.2 药材皂苷含量与药材质量19批重楼药材样品中，4个皂苷含量之和范围为0.11%～3.31%，平均含量1.82%；含量最高为购自福建南平的样品，最低为购自福建泉州的样品；其中购自云南丽江、福建福州与福建泉州的3批样品，4个皂苷含量之和低于2010年版《中华人民共和国药典》标准（4个皂苷含量之和不低于0.6%），合格率为84.2%。

3.3 药材皂苷含量与性状相关性重楼药材的质地曾作为传统药材质量优劣的判断指标之一，认为“粉质重楼”较“胶（角）质重楼”为优［5］。而现有研究表明，“粉质重楼”与“胶（角）质重楼”的形成，是产地水湿条件、加工炮制温度等诸多因素的影响［5-6］。本次19批药材中，11批重楼药材断面呈角质，7批药材断面呈粉性或略带角质。3批皂苷含量不合格药材中，2批断面呈粉性，1批断面呈角质。4个皂苷含量之和在2%以上的8批药材中，4批断面呈角质，4批断面呈粉性。从具体样品4个皂苷含量之和与断面质地来看，二者之间并不存在正相关，不支持粉性者质量更优的说法。其它如药材断面直径大小、药材的产出时间等，与其有效成分含量之间亦不呈正相关，不作为影响药材质量的因素。

3.4 重楼药材性状、皂苷含量与药材来源的相关性现有研究表明［7-8］，云南重楼根茎主要含薯蓣皂苷类成分，特别是重楼皂苷Ⅰ的含量明显高于七叶一枝花根茎，而七叶一枝花根茎主要含偏诺皂苷类成分；不同含量皂苷的差别，可以用来判断药材的来源。实验中10批样品薯蓣皂苷（重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ总量）含量高于偏诺皂苷（重楼皂苷Ⅵ、Ⅶ总量）含量，其中薯蓣皂苷含量与偏诺皂苷含量比值≥2.0的样品5批，特别是福建尤溪2样品，比值高达20；比值1.5～2.0的样品3批；比值1.0～1.5的样品3批；比值0.5～1.0的样品7批；另有1批样品未检测出薯蓣皂苷。初步可判断实验中所购药材应是不同来源，但药材性状、皂苷含量与来源三者之间并未形成规律性。由药材外观性状无法判断药材来源；虽然药材中薯蓣皂苷含量与偏诺皂苷含量的比值在一定程度可用于判断药材来源，但另一方面由于影响重楼不同皂苷含量的因素多样，若要确切判断，尚需加大样品量，在明确来源的情况下，进一步研究不同植物来源重楼药材的区别，以更加准确地指导用药。

表3 市售重楼药材中重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ含量%

3.5 拳参代重楼药用拳参在全国各地地方用药中，以其代重楼用，是长期以来存在的现象［9-11］。本次实验在重楼药材样品的购买过程中，亦有一批样品为拳参，在该药店中代重楼出售。拳参主要活性成分为鞣质、没食子酸、儿茶素、绿原酸等，无重楼的皂苷泡沫反应［12］。在本次实验条件中，拳参样品在重楼皂苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ等4个对照品的对应保留时间值点亦出现吸收峰，容易造成拳参药材中含有以上4个皂苷成分的假象，若二者出现药粉或中成药掺伪现象，则无法用本HPLC法进行鉴别，需进行更进一步的分析。

［1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：243-244.

［2］ 黄贤校，高文远，满淑丽，等.重楼属药用植物皂苷类化学成分及其生源途径的研究进展［J］.中草药，2009，40（3）：483-489.

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