2013年广州市活禽农贸市场禽流感流行病学调查

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（广州市动物疫病预防控制中心，广东广州 510440）

Duan Xiaodong，Shen Dan，Zhang Haiming，Zhang Haibing，Zheng Lilan，Yang Suijuan，Zhong Zhuoling，Yang Qiufei，Zhong Jinhui，Zhu Jiancui

（Guangzhou Animal Disease Prevention and Control Center，Guangzhou，Guangdong 510440）

2013年广州市活禽农贸市场禽流感流行病学调查

段晓冬，沈丹，张海明，张海冰，郑丽兰，杨穗娟，钟卓玲，杨秋菲，钟锦辉，朱建翠

（广州市动物疫病预防控制中心，广东广州 510440）

[目的]了解广州市活禽农贸市场禽流感病毒的分布和流行情况，科学制定禽流感的防控措施，于2013年3-11月对广州市91个次的活禽农贸市场进行了禽流感监测，[方法]调查共采集了1064份活禽口咽/泄殖腔棉拭子和环境拭子，并用荧光RT-PCR方法进行了检测，[结果]发现通用型、H7N9和H9亚型禽流感阳性率分别为46.05%、0.09%和19.83%。其中，鸭棉拭子样品中通用型禽流感阳性率最高，达到了58.14%，其次为鸡棉拭子、鹅棉拭子和环境棉拭子样品，分别为46.28%、42.85%和35.19%；H9亚型禽流感阳性率最高的是鸡源样品，达到了28.88%，其次为鸭棉拭子和环境棉拭子样品，分别为12.56%和5.58%；仅从1份鸡棉拭子样品中检测到H7N9亚型禽流感病毒阳性。[结论]本次调查显示，广州地区活禽农贸市场存在较为严重的禽流感污染情况，需立即采取有效的防控措施以降低本地区发生禽流感以及人感染禽流感的风险。

广州；活禽农贸市场；禽流感；流行病学调查

2013年2月，我国上海地区曾发生全球首例人感染H7N9亚型流感事件[1]。截至2014年2月14日，我国十多个省市共有240人感染H7N9禽流感病毒，其中60人死亡，这不仅造成了重大的公共安全问题[2，3]，也给我国禽业造成了巨大的经济损失[4]。与H5N1、H7N7等亚型禽流感病毒感染家禽后会表现明显的临床症状并造成死亡的情况不同，H7N9亚型禽流感病毒感染家禽后不表现或只表现极其轻微的临床症状[5]，这意味着H7N9禽流感可以在家禽中一直存在而不被发现，并可通过各种途径感染人。H9N2亚型禽流感虽然是低致病性禽流感，但由于其分布广泛并能引起家禽的免疫抑制，一旦其与其他病原混合感染或造成继发感染，也可引起禽类的高发病率和高死亡率[6]。而且，H9N2除感染禽类外，还可以突破种间屏障感染人类[7，8]。另外，研究显示，H9N2禽流感病毒为1997年首次感染人的香港H5N1禽流感病毒和本次的H7N9禽流感病毒等提供了内部基因[1，9]，提示H9N2在禽流感遗传、演化过程中起了十分重要的作用。

活禽市场一直被认为在禽流感病毒的存留、繁殖以及传播过程中扮演着十分重要的角色[10，11]，并且是人感染 H5N1、H7N9 等禽流感的高风险区域[12-14]。广州所在的华南地区是“世界流感中心”之一[15]，所在地居民喜欢在活禽农贸市场挑选现宰活禽的消费习惯，更进一步增加了人通过活禽市场感染禽流感的风险。有鉴于此，笔者通过对2013年广州市部分活禽农贸市场的家禽和环境进行的禽流感监测，分析了该地区禽流感的分布和流行状况，以期能为科学制定禽流感防控措施提供技术依据。

1 材料和方法

1.1 主要试剂

5×MagMAXTM96 RNA提取试剂盒和A型动物流感荧光RT-PCR检测试剂盒购自Ambion公司；一步法荧光RT-PCR试剂盒Super Script Ⅲ Platinum one-step qRT-PCR购自Invitrogen公司；H9亚型禽流感荧光RT-PCR检测试剂盒购自深圳太太基因工程有限公司；H7N9亚型禽流感病毒检测用引物由美国Invitrogen生命技术公司合成。

1.2 样品采集

按随机抽样的方式，对活禽农贸市场的鸡、鸭、鹅、鸽等活禽及环境样品进行采集，其中每只活禽同时采集口咽和泄殖腔拭子并放入同一个EP管中，环境样品采集于饮水槽、污水、粪便、砧板、垃圾箱等区域。所有棉拭子放入装有灭菌PBS的2ml EP管中，-20℃冻存备用。

1.3 检测方法

通用型禽流感病毒检测采用A型动物流感荧光RT-PCR检测试剂盒；H7N9亚型禽流感病毒检测采用世界卫生组织公布的H7N9亚型禽流感病毒检测引物结合一步法荧光RT-PCR检测试剂盒进行检测；H9亚型禽流感病毒检测采用H9亚型禽流感荧光RT-PCR检测试剂盒。首先对采集的样品进行通用型禽流感病毒的检测，再对阳性样品进行H7N9和H9亚型禽流感病毒的检测。

1.4 数据分析和统计

数据以Excel、SPSS 20和Epi Info 6.0进行分析和统计，其中发病风险比以pearson卡方进行计算。

2 结果

2.1 总体检测情况

自2013年3—11月，我们对广州地区11个区县活禽农贸市场进行了91个次的采样调查，共采集1064份活禽口咽/泄殖腔棉拭子和环境拭子，检测到通用型禽流感病毒490份，阳性率为46.05%；H7N9亚型禽流感病毒1份，阳性率为0.09%；H9亚型禽流感病毒211份，阳性率为19.83%。

2.2 空间分布

所采集的1064份样品分布于广州市的11个区县，各区之间检测阳性率差异较大，其中通用型禽流感和H9亚型禽流感阳性率最高的分别为番禺和白云，具体各区县的采样情况和阳性率见表1。

表1 不同区县通用型禽流感和H9亚型禽流感阳性率

2.3 时间分布

在3—8月和11月分别采集活禽口咽/泄殖腔棉拭子以及环境棉拭子，分别进行通用型禽流感病毒、H7N9和H9亚型禽流感病毒的检测，结果不同月份的通用通用型禽流感和H9亚型禽流感阳性率差异较大，其中通用型禽流感和H9亚型禽流感阳性率最高的月份分别为6月和7月，具体见表2。

表2 不同采样时间的通用型禽流感和H9亚型禽流感阳性率

2.4 种间分布

对不同种类活禽以及环境样品进行了采样检测，结果通用型禽流感和H9亚型禽流感阳性率最高的分别为鸭棉拭子和鸡棉拭子，其中未从鸽子和鹅棉拭子中检出通用型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒。另外，分别以鸡棉拭子通用型禽流感和H9亚型禽流感检测结果为参考，分别对其他种类活禽以及环境样品的阳性率进行发病风险比分析，结果鸭棉拭子中存留通用型禽流感病毒的风险是鸡的1.26倍，而且差异有统计学意义，其他发病风险比具体见表3和表4。

表3 不同种类活禽通用型禽流感阳性率和发病风险比

表4 不同种类活禽H9亚型禽流感阳性率和发病风险比

3 讨论

活禽农贸市场是各种禽类的聚集地，不同种类的活禽以及不同来源、不同批次的活禽在农贸市场的档口内混养，再加上活禽农贸市场卫生条件较差，不仅有利于禽流感病毒的繁殖，也为其演化和变异提供了有利条件[16]。而我国南方地区的居民又喜欢在活禽农贸市场挑选活禽、现场宰杀的习惯，又增加了人通过活禽农贸市场感染禽流感的风险[17]。目前的研究也认为[18，19]，活禽市场是人感染禽流感一个非常重要的危险因素，而活禽市场的关闭使人感染H7N9禽流感病例的下降又从另一方面证明了活禽市场与人感染禽流感的直接联系[20]。但是，目前国内特别是华南地区对活禽农贸市场的禽流感监测相对较少，为了解本地区活禽农贸市场活禽以及环境的禽流感污染情况并提出有针对性的防控措施，我们开展了本次调查。

本研究对广州地区11个区县的91个次活禽农贸市场进行了监测采样，并对采集的不同种类的活禽棉拭子以及环境样品进行了通用型禽流感病毒、H7亚型和H9亚型禽流感病毒的病原学检测，结果通用型和H9亚型禽流感病毒总阳性率分别达到了46.05%和19.83%，比以往的报道[17，21]要高，可能与调查的地区、时间和对象不同等因素相关。在监测采样过程中，我们也对采样的活禽农贸市场进行了活禽来源的调查，发现这些市场的活禽大部分来自于广州市几大批发市场。活禽农贸市场如此高的禽流感阳性率，与我们2013年对广州市几大活禽批发市场的禽流感监测结果基本一致，提示广州市的活禽农贸市场存在较高的发生禽流感以及人通过活禽市场感染禽流感的风险。另外，我们只在1个活禽农贸市场的1份鸡棉拭子中检测到H7亚型禽流感病毒，提示我市虽然存在人通过活禽农贸市场感染H7N9的风险，但风险较低，这与2013年我市未发生人感染H7N9禽流感的情况一致。

从活禽农贸市场监测结果来看，不同种类活禽样品之间的通用型禽流感和H9亚型禽流感阳性率存在较大的差异，其中鸡源样品中通用型和H9亚型禽流感病毒阳性率均很高，与湖南地区活禽市场的监测结果基本一致[21]，再加上唯一的1份H7亚型禽流感阳性也是在鸡源样品中检测到，提示鸡在本地区禽流感存留、传播甚至遗传和变异中起着十分重要的作用。我们在鸭棉拭子中检测到非常高的通用型禽流感阳性率，风险分析发现，鸭发生禽流感的风险是鸡的1.26倍。值得注意的是，无论是在鸭还是鹅源样品中，均存在通用型禽流感阳性率较高而H9亚型禽流感阳性率较低的情况，提示水禽中存在其他亚型的禽流感病毒。由于包括鸭、鹅在内的水禽不仅是禽流感病毒的储存库[22]，还是不同亚型禽流感病毒间基因交换的重要载体[23，24]，其在本地区禽流感病毒传播、演化和变异中的作用有待于进一步研究。

虽然我们未从鸽子棉拭子中检测到任何禽流感病毒，但是由于采样所限而只进行了3份样品的检测，不能说明本地区农贸市场的鸽子中不存在禽流感病毒。另外，我们还从环境样品中检测到较高数量的通用型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒，其中通用型禽流感阳性率与2011年广西活禽农贸市场外环境禽流感监测阳性率基本一致[25]，但H9亚型禽流感阳性率要低于该调查的结果。在目前活禽农贸市场环境条件较为恶劣、生物安全水平较低以及众多活禽聚集的情况下，如此高的环境禽流感阳性率，意味着禽流感病毒不仅能在市场内一直存留、变异，也能通过鸡笼、车辆、其他工具等传播给养殖场甚至感染人。因此，需要对活禽农贸市场实施更为严格的消毒、休市等生物安全措施以降低禽流感发生的风险。

另外，在本调查中发现，6-8月份采集的样品中也存在较高的通用型和H9亚型禽流感病毒阳性率，这与以往的研究[26]认为禽流感病毒在低温季节分离率要高于高温季节的结论有一定的差异，但是广州与广西地区监测结果较为一致[25]，我们分析可能与地区差异、气候等有一定的关系，有必要对此现象进一步研究与分析，以便有针对性地调整禽流感防控策略。

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Epidemiological Investigation of Avian Infuenza in Retail Live Poultry Markets in Guangzhou in 2013

To understand the distribution and epidemiology of avian influenza virus in live poultry markets of Guangzhou，investigations were conducted from March to November，2013. 1064 cloacal swabs and environmental swabs were collected and detected with real-time RT-PCR for avian infuenza virus types A，H7N9 and H9. Of all the swabs sampled，the positive rates of avian infuenza virus types A，H7N9 and H9 were 46.05%，0.09% and 19.83% respectively. The positive rate of avian infuenza virus type A in ducks was 58.14%，much higher than that in chicken（46.28%），goose （42.85%） and the environment （35.19%）. The positive rate of H9 subtype in chicken was 28.88%，much higher than that in duck （12.56%） and the environment （5.58%）. H7N9 subtype avian infuenza virus was detected only in one chicken cloacal swab. The results indicated that the prevalence of avian infuenza virus in live poultry markets in Guangzhou was severe and more effective prevention and control measures were needed.

Guangzhou；retail live poultry market；avian infuenza；epidemiological investigation

S858.3

：B

：1005-944X（2014）11-0033-05

Duan Xiaodong，Shen Dan，Zhang Haiming，Zhang Haibing，Zheng Lilan，Yang Suijuan，Zhong Zhuoling，Yang Qiufei，Zhong Jinhui，Zhu Jiancui

（Guangzhou Animal Disease Prevention and Control Center，Guangzhou，Guangdong 510440）