2013年安徽省中小规模种猪场猪伪狂犬病群流行率及风险因素横断面研究

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（1.安徽省动物疫病预防与控制中心，安徽合肥 230061；2.哈尔滨兽医研究所，黑龙江哈尔滨 150001）

2013年安徽省中小规模种猪场猪伪狂犬病群流行率及风险因素横断面研究

刘 华1，占松鹤1，王靖飞2，何长生1，朱良强1

（1.安徽省动物疫病预防与控制中心，安徽合肥 230061；2.哈尔滨兽医研究所，黑龙江哈尔滨 150001）

[目的]了解安徽省中等规模种猪场猪伪狂犬病病毒（PRV）的感染情况。[方法] 2013年8月至11月，开展了中等规模种猪场猪伪狂犬病群流行率和风险因素的横断面研究。通过简单随机抽样方法，选取了380个中等规模种猪场；用发现疫病的抽样策略，在每个种猪场采集了5份母猪血清，使用IDEXX公司猪伪狂犬病病毒gE-ELISA试剂盒进行了抗体检测。同时开展了问卷调查，并对种猪场之间PR传播潜在的29个风险因素进行了统计学分析。[结果] 2013年安徽省中等规模种猪场猪伪狂犬病的群流行率为34.1%（95%置信区间29.3%～38.9%）；没有灭鼠措施（OR=2.5，95%置信区间：1.4～3.7，P<0.001）、购入种猪未经检测（OR=2.2，95%置信区间：1.1～4. 2，P=0.024）、未免疫含PR 6种以上猪病（OR=2.0，95%置信区间：1.2～3.1，P=0.004）是2013年安徽省中小规模种猪场感染PRV的风险因素。Logistic 回归拟合度较好（P>0.05），ROC曲线下面积为0.68（95%置信区间：0.62-0.73）。[结论]安徽省中等规模种猪场场间PR流行率较高，建议购入种猪前需进行检测，免疫含PR等6种以上猪病疫苗并定期灭鼠。

猪伪狂犬病；中等规模种猪场；流行率；风险因素

伪狂犬病（pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的多种家畜和野生动物以发热、奇痒（猪除外）及脑脊髓炎为主要症状的一种重要传染病[1]。我国自1947年首先发现本病以来，相继已有30多个省报道了PR的发病流行[2-5]。本病以猪的发病多见，成为重要的病毒贮存宿主和传染源。妊娠母猪，部分由于胎儿在子宫内感染死亡，出现流产或产出死胎[1]。PR对许多国家的畜牧业特别是养猪业造成了巨大的经济损失，因此引起世界各国兽医工作者的高度重视[6]。2012年，我国将PR列为优先防治的动物疫病病种之一[7]。近年来，安徽省养猪业发展迅速，但PR作为仔猪死亡、母猪繁殖障碍的主要原因之一，严重影响了我省养猪业的可持续发展。为了解安徽省中等规模种猪场PR的感染情况，对安徽省380个中等规模种猪场开展PR群流行率及风险因素分析，为控制该病的场间传播提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 目标群与研究单元

将安徽省使用PRV gE基因缺失疫苗的种猪场作为研究的目标群，研究单元是母猪存栏量在100至500头的中等规模种猪场。

1.2 抽样策略与样本量计算

1.2.1 群体水平：用WinEpi软件（http：//www. winepi.net/uk/index.htm），设预期场间流行率为50%，置信区间为95%，可接受误差为5%，全省这类中等规模种猪场13000个，至少需要374个猪场。通过在线随机数字发生器（http：//www. randomizer.org/），抽取了380个。

1.2.2 个体水平 ：用发现疫病的抽样策略抽取个体，即在抽样前，采样人员通过查看生产记录或询问兽医技术人员，选取近一个月内有流产症状或其所生小猪有典型PR症状的母猪。使用WinEpi软件，设群大小为500头，置信水平95%，试验敏感性98%，特异性99%[8]，场内预期流行率为45%，每个场抽5头。

1.3 采样检测与问卷调查

问卷设计考虑到与PR场群间传播的所有因素，包括外周环境、饲养管理、消毒、引种和补栏、繁殖和免疫等7方面共29个相关风险因素。省级动物疫控中心召集被选猪场所在县的县级疫控中心相关技术人员开展采样和问卷填写培训。县级疫控中心负责血清采集和现场问卷。省疫控中心负责样品检测和问卷信息录入及数据分析。PRV gE-ELISA抗体检测试剂盒为美国IDEXX 公司产品（批号：99-09836）。任何一个样品检测为阳性，其所在场即定义为PR阳性场。

1.4 结果统计

1.4.1 流行率估计

群体水平表面流行率（HAP）为检测阳性场数占抽样总场数的百分比。群体水平真实流行率（HTP）结合群敏感性（HSe）、群特异性（HSp）计算，公式：

真实流行率的95%置信区间计算公式为：

其中N为群体水平抽样数量，n为个体水平抽样数量。

1.4.2 风险因素分析

用Epi InfoTM7软件进行相关因素的单因素回归分析；保留P<0.2的风险因素，用IBM SPSS 20统计软件进行Spearman相关性分析，结合生物学知识剔除相关系数大于0.4的因素；用Epi InfoTM7对保留的风险因子进行多因素logistic回归分析，得到回归模型；用IBM SPSS 20 做Hosmer-Lemeshow检验和ROC曲线评估模型拟合优度。

2 结果

2.1 群流行率

对1900份来自全省380个中小规模种猪场的母猪血清进行gE抗体ELISA检测（有流产史的为982头），其中抗体阳性331头，分布于124个场，群表观流行率为32.6%（124/380）。由公式2和3计算得HSe=86.1%，HSp=95.0%，由公式1和4计算得真实流行率为34.1%（95%置信区间29.3%～38.9%）。

2.2 风险因素分析

2.2.1 单因素分析

对问卷中的29个风险因素进行单因素分析，结果见表1。

2.2.2 多因素logistic 回归

筛选出单因素分析结果P<0.2的14个风险因素，带入SPSS进行Pearson相关性分析，结合生物学有关知识，剔除“没有规范免疫程序”这个与其他因素具有较强相关性的因素（相关系数>0.4）后，将剩下的13个风险因素带入EPI INFO软件中进行logistic回归分析，用倒退法选择变量。结果表明，没有灭鼠措施（X1）、购入种猪未经检测（X2）和未免疫含PR 6种以上猪病（X3）是安徽省中等规模种猪场之间传播PR的风险因素，结果见表2。

模型的回归方程如下：

Log （odds） =-1.61+0.86X1 +0.77X2+0.67X3

经Hosmer-Lemeshow检验，该模型拟合较好（P>0.05）。模型的ROC曲线（见图1）下面积0.68（95%置信区间：0.62-0.73）。

3 讨论

3.1 PR群流行率

伪狂犬病是目前危害养猪业健康发展的重要疫病之一，从全国其他省份PR血清学调查情况看，规模猪场感染PRV相当普遍，尤其是中小型猪场伪狂犬病野毒感染阳性率较高[9-11]。安徽省是养猪大省，饲养量排全国第8位[12]。2012年生猪年出栏3085万头，存栏1701万头。PR给安徽省养猪业带来了巨大的经济损失[12]。陈艳红等[13]2004年12月至2005年11月对安徽等省的53个猪场进行了PRV gE-ELISA检测，群阳性率为85%。吴指挥等[14]2008年对华东地区4省份进行PRV野毒PCR检测，结果安徽省猪场的阳性率最高（44.11%）；詹松鹤[12]2009年对安徽省73个不同规模种猪场的PRV采集的病料进行了PCR检测，场阳性率约为80%；对2010年99个不同规模猪场进行了PRV gE-ELISA检测，场阳性率为67%，种猪群规模在200头以下的猪场PRVgE抗体阳性率较高。笔者认为本次调查首次通过简单随机抽样的方法对安徽省PRV在中等规模种猪场的群流行率进行了流行病学估计，方法更科学，结果更接近研究时段内安徽省中等规模种猪场的PR流行的真实情况。

表 1 2013年安徽省中等规模种猪场场间传播猪伪狂犬病风险因子单因素分析结果

表 2 2013年安徽省中等规模种猪场场间传播猪伪狂犬病多因素Logistic回归分析结果

图 1 回归模型的ROC曲线

本次调查所得PR血清流行率还是比较高的，但较上述研究低，可能有以下几方面原因：一是，本次调查抽取了380个猪场，抽样数量较大，减少了随机误差，提高了结果的精确性；二是，检测方法不同。本研究使用ELISA法检测血清中的PRV野毒感染抗体，如母猪处于感染初期则可能不易被检测出阳性；三是，研究时段不同。

3.2 场间PR传播的风险因素

本研究通过统计学分析，结果显示购入种猪不经检测、未免疫含PR 6种以上猪病、没有灭鼠措施是2013年8月至11月安徽省中等规模种猪场PR场间传播的风险因素。Jorge C Rodriguez-Buenfl[15]、Anderson P L[16]、Morrison RB[17]等开展的相关研究结果也都显示购入种猪不经检测或检疫隔离的猪场发病风险较高。另有资料显示，带毒鼠是PR的重要传染源[18]。笔者认为由于带毒鼠在猪场间的流动，可能会通过带毒鼠的飞沫、用被带毒鼠啃食的或粪尿污染的饲料喂猪等方式造成PR场间的传播，但需要进一步研究证实。此外，国际上很多国家应用PRgE基因缺失疫苗加扑杀相结合的方式进行PR控制和净化。免疫PR gE基因缺失疫苗是最初采取的主要措施[19-21]。此外，做好其他疫病的免疫如猪瘟、猪蓝耳病、细小病毒病、圆环病毒病、气喘病等，可以降低免疫抑制发生的风险，增强抗感染的能力。笔者认为PR感染和场间传播的风险因素众多，而且各因素之间存在协同作用，并且不同时间、不同地域、不同的饲养模式猪场间传播PR的风险因素可能都不尽相同。因此，应因地制宜开展进一步连续系统的监测和研究，才能提出针对性更强的防控措施。

3.3 偏倚控制及局限性

3.3.1 选择性偏倚

根据安徽省2009年至2012年PR流行病学调查结果，PR在安徽省规模化猪场中，特别是中等规模种猪场中感染较为普遍；此外，种猪作为疫病传播的源头，是控制伪狂犬病等垂直传播疫病的突破口。这是在中等规模种猪场开展流行病学研究的原因。因此本研究将中等规模种猪场作为目标群，符合安徽省PR防控工作实际。在个体选择方面，主要是种母猪，未选择后备母猪、种公猪、仔猪及育肥猪。从血清流行病学调查的角度而言，种猪的血清学调查结果更为准确。一是，因为仔猪体内的gE抗体可能由于PRV野毒感染所致，也可能是来源于母源抗体；120日龄及以下的猪通过检测 gE抗体阳性与否来诊断PR，还应考虑其抗体水平的高低，很容易造成主观判定错误[22]；二是，对于后备母猪、种公猪不易发现临床症状，不宜用发现疫病的策略抽样。三是，感染PRV的妊娠母猪有流产等临床症状或所产仔猪有木乃伊胎、死胎临床症状[23-24]，可便捷发现PR阳性场，对场间流行率的评估更接近真实值。本研究由于使用的发现疫病的方法，无法估计个体流行率。在个体样本计算时，为节约成本，将预期流行率设置偏高，导致群敏感性偏低。此外，未考虑地区差异、存栏量、母猪胎次等对风险因子分析结果的影响。

3.3.2 信息偏倚

第一，选择敏感性和特异性都比较高的检测方法，是控制信息偏倚的手段之一。使用PRV gE基因缺失苗的猪感染野毒后，会产生针对PRV所有蛋白的抗体[25]，PRV gE-ELISA抗体检测试剂盒可以有效区分免疫猪与野毒感染猪。虽然PCR法具有快速、特异的优点，但需采集活体组织，操作性差，且价格昂贵，相比之下，ELISA试剂盒更适合基层大批量检测PRV野毒感染情况[26]。陈伟杰[22]（2009）比较了 3种猪伪狂犬病g E抗体ELISA检测试剂盒的效果，认为IDEXX公司产品更适合用于了解猪群PR野毒感染程度。资料显示，该产品的敏感性和特异性都较高，完全能满足需要。第二，PR患病猪、隐性感染猪、带毒鼠类的飞沫、呼吸道分泌物、粪尿、乳汁、精液及其尸体、内脏、血液中均含有 PRV，可经消化道、呼吸道、皮肤伤口、自然交配、宫内感染及污染的环境等多种途径传播，也可通过人员或运输工具的流动扩散[12]。无计划和盲目地从疫区引进种猪，防病意识薄弱，消毒、灭源工作流于形式，免疫程序不健全，饲养管理粗放等是引起猪伪狂犬病野毒感染和扩散的主要因素[27-28]。在设计问卷时，充分考虑了这些因素，并结合安徽省实际，几经研讨修改。在填写问卷之前，对调查人员进行培训，以求得到最真实的信息。对信息缺少的或明显不准确的，通过电话回访进行补充。收集的问卷应答率为99%，信息有效率95%以上。不足之处是由于县级调查人员和猪场技术人员的水平参差不齐，可能对本病的了解、问卷的填写、采血对象的选择等方面存在一定的偏差。

4 结论

通过简单随机抽样方法，对安徽省中等规模种猪场猪伪狂犬病野毒感染情况进行了调查，结果证实2013年8月至11月期间安徽省中等规模种猪场猪伪狂犬病的群流行率较高，为34.1%（95%置信区间29.3%～38.9%）。综合问卷调查和风险因素分析结果，建议购入种猪前需进行检测，免疫含PR等6种以上猪病疫苗并定期灭鼠。

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A Cross-sectional Study of Prevalence and Risk Factors of Pseudorabies Virus in middle-scale Pig Farms in Anhui Province 2013

Liu Hua1，Zhan Songhe1，Wang Jingfei2，He Changshen1，Zhu Liangqiang1

（1.Anhui Center for Animal Disease Prevention and Control，NO.3355 Dongtinghu Road，Hefei，Anhui，230061；
2. Harbin Veterinary Research Institution，NO.427 Maduan Road，Harbin，Heilongjiang，150001）

To get a better understanding of the infection status of pseudorabies virus （PRV） in middle-scale pig farms in Anhui province，a cross-sectional study was conducted from August to November 2013 to estimate the prevalence and identify risk factors of PRV infection in middle-scale pig farms in Anhui province. 380 farms were selected randomly in the study. Sample size was determined using a risk-based sampling strategy for the detection of virus，and all the samples were tested using gE-ELISA kits for antibodies to PRV gE protein. Questionnaires were f lled out during the process of sampling for the purpose of risk factor identif cation using multiple regression analysis. The results showed that farm prevalence of PRV was 34.1%（95%CI:29.3%～38.9%）in middle-scale pig farms in Anhui province. Three risk factors （no mouse-proof measure （OR=2.5，95%CI: 1.4～3.7，P<0.001），no PRV test in introduction of pigs （OR=2.2，95%CI: 1.1～4.2，P=0.024） and no vaccinations against the six major pig diseases in farm （OR=2.0，95%CI: 1.2～3.1，P=0.004）），were identified by multiple regression analysis. The ROC curve （0.68，95% CI: 0.62～0.73） indicated that the study had a relative high capcity for predicting the true positive value. It was conclued that the seroprevalence of PRV in middle-scale pig farms was high and more specif c control measures should be taken in the future，such as enhancing quarantine for PRV during the introduction of breeding pigs，optimizing the vaccinaiton protocols against the six major pig diseases and installing mouse-proof facilities on the farm.

Pseudorabies；middle-scale pig farm；Prevalence；Risk factor；Anhui

S858.28

：A

：1005-944X（2014）11-0016-06

朱良强