中国规模猪场腹泻调查

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（中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032）

中国规模猪场腹泻调查

张 志，王幼明，李晓成

（中国动物卫生与流行病学中心，山东青岛 266032）

[目的]掌握猪腹泻在规模猪场（年出栏>1000头）的流行情况和主要病原，分析疫病发生的风险因素。[方法]采用横断面研究方法，选取江西、河南、湖南、四川和广西5个省、区407个规模猪场，开展了问卷调查、现场调查和实验室检测。[结果]调查发现腹泻的场流行率为71.99%，腹泻的发生率与猪场规模呈负相关（R2=0.87），不同种类猪的流行率不同，母猪、育肥猪、保育猪和哺乳仔猪发生腹泻的流行率分别为3.48%（95%CI，2.24%-4.96%）、2.4%（95%CI，1.35%-3.63%）、12.78%（95%CI，10.25%-15.41%）和33.80%（95%CI，31.02%-36.86%）。多重logistic回归分析结果表明，腹泻的发生与饲养年限、车辆进场消毒以及产房温度等因素有关。

腹泻；规模猪场；调查；风险因素

猪腹泻是影响猪群生产的一种常见性多发病，病因较多，病毒、细菌、饲料等多种病因均可引发本病。2010年下半年开始，我国部分省份的猪群开始出现大规模的流行性腹泻疫情，临床表现为猪水样腹泻、呕吐和脱水等，流行特征表现为发病急，传播快，一旦感染即可在猪场长期存在，各种年龄猪和不同品种的猪群都有易感性，但对哺乳仔猪的危害性更大，1周内的仔猪一旦发病，死亡率往往可达80%～100%[1-2]。对发病样品进行病原鉴定，很多学者从中检测到了猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV）为主的多种病原[3-5]。2013年底，为进一步了解我国猪群腹泻的流行状况和影响腹泻的风险因素，在江西、四川、广西、湖南、河南5省、区动物疫病预防控制中心的配合下，选取5省、区的部分规模猪场（年出栏>1000头）开展横断面研究，采集粪便样品4070份进行PEDV的检测，分析了发病的主要风险因素，以期为规模猪场和动物疫病预防控制机构防治该病提供可靠的技术支撑。

1 材料和方法

1.1 抽样设计

样本总体为我国年出栏量大于1000头的规模猪场，总数为88195个。采用PPS多阶段分层抽样，预计养猪场发生腹泻的流行率为70%，可接受误差为5%，置信区间为95%，计算需要采集的样本数为323。

分层时采用2层抽样，第一层采取随机抽样方法，从32省份中随机抽取5省份，分别为广西、河南、湖南、江西和四川；第二层按照养殖规模按比例随机抽样[6]，根据2012年畜牧业年鉴统计数据中5省、区的养殖规模和养猪场数量，利用PSS抽样原则，每个省分配相应数量的养猪场，首先将年出栏生猪数量作为抽样的权重，计算不同规模猪场的抽样数量：某种规模猪场的抽样数=某种规模猪场出栏数/总的出栏数×全国抽样数量，然后将各省生猪出栏数量作为抽样权重，计算各省不同规模猪场的抽样数量，抽样结果详见表2，在分层抽样时考虑到分层效应（DEF=1.2），需调查养猪场387个。详见表1和图1。

表1 不同规模的猪场调查数量

图1 抽样猪场的地理分布图

实际调查时，因猪场的配合度及问卷质量等问题，除一个省应调查的87个猪场变为76个，其它省份均超过了原定的抽样数量；3000-4999类规模场由原定为93个，实际为77个，其余3种规模场均超过了原定的抽样计划（表1）。

1.2 问卷与现场调查

研究设计了结构性调查问卷，内容包括养猪场的地址、联系人、养殖年限、养殖量、腹泻发生情况、袭击率、致死率、消毒情况、免疫情况、孵化房的温度和保温设备、专业兽医、饲料配制等23个问题。调查的每一个猪场均填写一份调查登记表，由专门的流行病学调查人员到养猪场进行现场调查，共发放了450份调查表，回收407份，回收率为90.44%。

1.3 样品采集

每猪场采集10份不同窝的仔猪的粪便样品，样品用10ml样品管收集，每份样品采集约5克左右，置-20℃冻存。

1.4 实验室检测

1.4.1 样品处理

将采集的粪便样品按照1：5的比例加入PBS缓冲液15ml，在研钵中进行研磨，然后5000rpm 4℃离心10min，吸出上清液经0.22µm过滤除菌。

1.4.2 检测方法

取250µL上清液提取RNA。RNA的提取按试剂盒TRIzol（Invitrogen公司）说明书进行，提好的RNA用20µLDEPC处理水溶解，-20℃冻存备用。根据参考文献发表的序列[7]，设计1对引物，进行RT-PCR扩增，首先制备cDNA，然后用一步法试剂盒进行PCR扩增。

PCR结束后，取10μL PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，在凝胶成像系统中进行观察，阳性条带者送宝生物公司进行测序和分析。

1.5 数据分析

用Excel软件进行数据录入、整理和初步分析，用ArcGIS软件对调查猪场空间数据进行分析，用SPSS和Epi Info软件进行多因素Logistic回归分析。

2 结果

2.1 调查猪场腹泻发生情况

最近3个月之内，407个猪场有293个猪场（71.99%）发生过腹泻，114个猪场（28.01%）未发生过腹泻。发生腹泻的猪场中，随着养殖规模的增加，腹泻发生的比例逐渐下降，年出栏1000-2999的养猪场腹泻的流行率为80.79%（95%CI，73.44%～87.21%），而年出栏超过10000的养猪场腹泻的流行率为59.30%（95%CI，48.17%～69.78%），腹泻与养殖规模之间呈现负相关（R2=0.8744），详见表2和图2。

表2 不同规模猪场腹泻发生情况

图2 猪场规模与猪场发生腹泻的关系

表3 不同种群猪发生腹泻的袭击率和病死率

2.2 腹泻发生的群间分布

出现腹泻的猪场中，不同种群猪的腹泻流行率和病死率不同，其中母猪、育肥猪、保育猪和哺乳仔猪发生腹泻的流行率分别为3.48%（95%CI，2.24%～4.96%）、2.4%（95%CI，1.35%～3.63%）、12.78%（95%CI，10.25%～15.41%）和33.80%（95%CI， 31.02%～36.86%），病死率分别为0.7%（95%CI，0.24%～1.41%）、0.43%（95%CI，0.17%～0.78%）、12.55%（95%CI，10.31%～14.73%）和34.16%（95%CI，30.67%～37.70%），详见表3。

2.3 猪场腹泻风险因素分析

分别计算此次调查所涉及养猪场的饲养规模、养殖类型、猪场消毒情况、免疫情况、母猪产房温度、消毒和保温设施等相关因素的OR值，经分析发现猪场的养殖年限、车辆进入猪场是否消毒、母猪有单独的产房、母猪产房是否具有保温设施和保暖性、猪场是否有地下的粪便沟渠等因素的OR值差异较大，而且P值均小于0.2，另外还发现母猪存栏量、年出栏量等也与腹泻发生有关，同样P值均小于0.2。详见表4。

2.4 多项logistic回归分析

用Epi info软件中的多项logistic回归方程分析风险因素，经过递减法除去非特异性因素和混杂因素，发现腹泻（Y）与养猪场的饲养年限（X1）、进入猪场前的消毒（X2）以及母猪产房维持足够温度（X3）有关，详见表5。

因此，基于上述结果可以建立腹泻相关因素的风险模型，用公式表示：

Y =2.41+0.71X1+0.93X2+0.93X3

2.5 PEDV检测结果

将每个猪场采集的样品混在一起用RT-PCR进行PEDV的检测，结果表明，293个阳性场中有262个猪场为PEDV试验阳性（阳性率89.42%），提示PEDV可能是腹泻的主要病原。

表4 养猪场腹泻风险因素分析

表5 腹泻发生风险回归模型

3 讨论和分析

猪腹泻是猪的一种常见多发性疾病，曾给我国养猪业造成过巨大损失，摸清导致腹泻病因和发病风险因素对防治腹泻十分重要。在实际流行病学调查工作中，面对我国基数庞大的养殖数量，选择合适的抽样框十分困难，根据畜牧业统计年鉴（2012）[8]，我国生猪饲养户数5500万个，年出栏生猪6.9亿头，其中500头以上规模场25.6万个，年出栏生猪2.8亿头，其中，1000头以上规模场8.8万个，年出栏生猪1.9亿头，占70%。2014年，我国500头以上规模猪场年出栏量已经占到总出栏量的38.5%，其中1000头以上规模猪场的年出栏量占69.7%，随着我国经济的发展，庭院养殖模式的养猪场/户的数量急剧萎缩，而规模猪场的比重逐年提升，并将成为我国养猪业的主要养殖模式。此外，规模场与疫病防控部门联系密切，开展的调查和采样也易完成，为此，本调查选择出栏1000头以上的规模猪场作为此次调查的对象。

调查和监测结果显示，我国规模猪场猪群腹泻的场流行率为71.99%（59.30%～80.79%），而且腹泻的流行率与养猪场的规模呈现负相关（R2=0.87），这一结果说明小规模猪场腹泻危害严重，提示小规模猪场是今后重点加强腹泻防控的对象。

在对我国猪群腹泻的风险因素进行分析时发现，养殖量、车辆进 入猪场的消毒和产房保持足够的温度是影响腹泻的主要因素。在前期的调查中，曾经发现母猪产房温度低的仔猪发生腹泻的比例较高，据此推测母猪产房的温度可能会影响仔猪发生腹泻，为进一步寻找可能的风险因素，在调查中加入了是否有母猪产房、产房是否定期消毒、是否有保温设施、母猪产房地面是否干燥等问题，但结果显示只有产房温度这一因素影响腹泻的发生。

在调查中还发现接种疫苗并没有明显降低腹泻的发生，与未接种疫苗相比，接种猪流行性腹泻—猪传染性胃肠炎二联灭活苗发生腹泻的风险为1.09倍，接种猪流行性腹泻—猪传染性胃肠炎二联弱毒苗发生腹泻的风险为1.63倍，卡方检验结果显示差异不显著，表明现有的疫苗接种并未取得理想的效果。国内外多家机构研究发现[9-13]，近年来危害严重的猪流行性腹泻的病原PEDV流行毒株与传统的疫苗株相比，S基因和M基因均已经发生较大变异，流行毒株和野毒株之间存在3个区域的碱基插入或缺失，S基因核苷酸的同源性为92.6%～98.2%，这些碱基差异或许是导致疫苗免疫效果不佳的原因。

鉴于猪腹泻是由多种病原引起的极其复杂的症侯群，尽管本次调查发现了影响腹泻的几种风险因素，也利用PCR技术从采集的猪场粪便样品中检测到了PEDV，但我们仍然不清楚PEDV是否单独感染引起腹泻还是与其他病原共同感染引起腹泻，还需要进一步开展流行病学研究，以便弄清这些因素在腹泻中的作用网络。

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A cross-sectional study of diarrhea in large scale pig farms in China

Zhang Zhi，Wang Youming，Li Xiaocheng

（China Animal Health And Epidemiology Center，Qingdao 266032）

A cross-sectional study was carried out for large scale pig farms （over 1000 pigs per year） to learn the prevalence of porcine diarrhea in China. 407 pig farms in Jiangxi，Henan，Hunan，Sichuan and Guangxi provinces were randomly selected in the investigation. After a series of questionnaires，feld surveys，feces collection and laboratory detection，the herd prevalence was 71.99% with a negative correlation between the occurrence of diarrhea and the size of pig farms. The attack rate was 3.48%，2.4%，12.78% and 33.80% respectively in sow，fattening pigs，breeding pigs and piglets. Using multi-logistic regression analysis on the risk factors of diarrhea，a mathematical model of diarrhea was constructed，indicating that the occurrence of diarrhea had a close relationship with pig age，disinfection status and the temperature in delivering room.

diarrhea；large scale pig farms；risk factor

S852.65

：A

：1005-944X（2014）11-0001-05

李晓成