前列腺癌组织中CXCR7与Ki67的表达及相关性研究

李华镭，张 青，刘益飞，黄 华（南通大学附属医院泌尿外科；病理科，江苏600）

前列腺癌组织中CXCR7与Ki67的表达及相关性研究

李华镭1*，张 青2，刘益飞2，黄 华2
（南通大学附属医院1泌尿外科；2病理科，江苏226001）

目的：研究趋化因子受体CXCR7与细胞增殖指数Ki67在前列腺癌组织及良性前列腺增生组织中的表达水平及相关性。方法：应用免疫组织化学检测83例前列腺癌组织及40例良性前列腺增生组织中CXCR7与Ki-67的表达。结果：CXCR7和Ki67在前列腺癌标本中的阳性表达率分别为61.4%和69.9%，在良性前列腺增生组织中的表达率分别为17.5%和10.0%，CXCR7和Ki-67在前列腺癌组织中的表达呈正相关，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：CXCR7可能参与了细胞周期的调控，促进前列腺癌的发生、发展，对前列腺癌的诊断和治疗具有指导意义。

前列腺癌；CXCR7；Ki67；免疫组织化学法

前列腺癌是我国男性泌尿生殖系统发病率第二的恶性肿瘤[1]，目前为止，关于前列腺癌的发病机制还未完全了解。CXCR7最早被称为孤儿受体，最先从狗甲状腺cDNA库筛选出来，在小鼠体内位于1号染色体，在人体内位于2号染色体。CXCR7具有典型的趋化因子结构特征，与CXCR4含有31%的同源序列，是除CXCR4之外CXCL12的另一受体。多项研究显示CXCR7阳性表达的肿瘤易发生浸润和转移[2]。Ki67核抗原与细胞的增殖及预后密切相关[3]。选择本院病理科2009年6月1日—2014年6 月1日手术切除或穿刺获得前列腺癌标本83例，采用免疫组织化学方法检测CXCR7和Ki67前列腺癌和良性前列腺增生组织中的表达，研究其相关性，为前列腺癌的诊断和治疗提供新的思路和方法。

1 材料与方法

1.1 材料 前列腺癌标本83例，年龄47～87岁。肿瘤直径≥3cm 38例，<3cm 45例；无淋巴结转移者81例，有淋巴结转移者2例。Gleason分级∶高分化（2～4分）20例，中分化（5～6分）39例，低分化（7～10分）24例。TNM分期∶Ⅰ期20例，Ⅱ期38例，Ⅲ期21例，Ⅳ期2例，缺少2例。对照组采用40例良性前列腺增生的标本。所有患者术前均未进行放化疗或激素治疗，病理切片已由本院病理科确诊。

1.2 方法 CXCR7多克隆抗体及细胞增殖因子Ki-67（均美国Santa Cruz公司），两者稀释浓度均为1∶100。S-P试剂盒及DAB酶底物显色试剂盒（北京中杉金桥生物技术有限公司）。采用免疫组织化学方法（S-P法），所有前列腺癌组织均经过10%中性福

尔马林固定，常规取材，包埋，连续厚度为5μm石蜡切片，二甲苯脱蜡，梯度酒精，3%双氧水阻断内源性过氧化物酶，高温高压组织抗原修复，非免疫性动物血清封闭，一抗4℃过夜，生物素标记的二抗（IgG），PBS冲洗，加链霉素抗生物素蛋白-过氧化物，DAB显色，苏木素复染，梯度酒精脱水，二甲苯透明，封片。阴性对照以PBS代替一抗，余步骤相同。

1.3 结果判定 CXCR7定位于细胞浆或细胞膜，Ki-67定位于细胞核，以相应位置呈现淡黄色至深棕色为细胞阳性表达。每张切片随机选取10个高倍视野，计数细胞总数以及阳性细胞数，按阳性细胞所占百分比计分∶<10%为0分，10%～50%为1分，51% ～75%为2分，76%～100%为3分；根据染色强度评分∶无染色为1分，浅染色为2分，中等染色为3分，深染色为4分。阳性细胞百分数评分与颜色强度评分相乘所得的乘积作为判定结果∶≤2分为不表达（-），4～6分为低表达，7～12分为高表达，并确定低表达和高表达为阳性表达。由两名高年资病理科医生采用双盲法阅片。

1.4 统计学处理 采用SPSS 21.0软件包进行数据分析处理，采用χ2检验，相关性分析采用Spearman等级相关分析处理，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 CXCR7、Ki67在前列腺癌与良性前列腺增生组织中表达的比较 CXCR7、Ki67前列腺癌标本中阳性表达率分别为61.4%和69.9%，在良性前列腺增生组织中的阳性表达率分别为17.5%和10.0%，CXCR7、Ki67阳性表达率在前列腺癌组织与良性前列腺增生组织间差异均有统计学意义（P<0.05）。如图1～8。

图1 CXCR7在前列腺癌组织中表达阳性（S-P法，200×）

图2 CXCR7在前列腺癌组织中表达阴性（S-P法，200×）

图3 Ki67在前列腺癌组织中表达阳性（S-P法，200×）

图4 Ki67在前列腺癌组织中表达阴性（S-P法，200×）

图5 CXCR7在良性前列腺增生组织中表达阳性（S-P法，200×）

图6 CXCR7在良性前列腺增生组织中表达阴性（S-P法，200×）

图7 Ki67在良性前列腺增生组织中表达阳性（S-P法，200×）

图8 Ki67在良性前列腺增生组织中表达阴性（S-P法，200×）

2.2 CXCR7、Ki67表达与前列腺癌患者临床病理特征的关系 CXCR7在高分化、中分化和低分化前列腺腺癌中表达率分别为25.0%、66.7%和83.3%。CXCR7的表达与前列腺癌不同分化程度呈相关性（P<0.05），而与其他临床病理特征无相关性。Ki67在高分化、中分化和低分化前列腺腺癌中表达率分别为45.0%、76.9%和79.2%，Ki67的表达与前列腺癌不同分化程度呈相关性（P<0.05），而与其他临床病理特征无相关性。见表1。

表1 CXCR7、Ki67基因表达与前列腺癌患者临床病理特征的关系

2.3 前列腺癌组织中CXCR7、Ki67蛋白表达的相关性分析 本实验中83例前列腺癌组织及40例良性前列腺增生组织同时进行CXCR7和Ki67染色。CXCR7和Ki67均呈阳性表达42例，CXCR7阳性表达而Ki67阴性表达9例，CXCR7阴性表达而Ki67阳性表达16例，CXCR7和Ki67均呈阴性表达16例，采用Spearman相关分析显示，83例前列腺癌组织中CXCR7和Ki67的表达呈正相关（r=0.332，P< 0.001），见表2。

3 讨 论

肿瘤的发生发展是一个多因素的过程，了解相关肿瘤的发病机制能为肿瘤的治疗提供重要依据。目前已经发现50多种趋化因子以及20多种趋化因子受体，其中趋化因子受体CXCR7是近年来研究的热点，该受体为G蛋白偶联受体，含有七次跨膜结构域[4]。现已多项研究证实CXCR7可以与其配体CXCL12和CXCL11结合参与胃癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌、卵巢癌等多种肿瘤的浸润和转移[5]。研究发现CXCR7高表达的肝细胞癌患者通过刺激血管内皮生长因子（VEGF）更容易发生肝外肺转移[6-7]。CXCR7与相应配体结合后形成的二聚体，与β-arrestin关联参与的非经典途径激活丝裂原活化蛋白激酶[8-9]。CXCR7与其他的受体不同，CXCR7可以增强细胞的粘附作用，促进肿瘤细胞发生侵袭，但并不会引起细胞钙离子的内流作用[10]。在前列腺癌中IL-8能通过细胞内信号诱导CXCR7的表达同时下调CXCR4以及促进表皮生长因子受体（EGFR）磷酸化，诱导细胞发生有丝分裂，从而引起细胞增殖，侵袭及血管形成作用。基因敲除CXCR7mRNA后能明显减少细胞增殖，这是由于抑制了细胞循环的G1期，减少了G1期向S期蛋白的表达作用[11]。Ki67作为细胞增殖因子与细胞合成代谢有关，在G1至M期表达最高，目前在多种肿瘤中Ki67被用来作为肿瘤细胞的增殖能力的标记，Ki67的表达越强代表肿瘤细胞的增殖越活跃，预后越差[3]。

本文研究结果显示CXCR7在83例前列腺癌组织中的阳性表达率为61.4%，40例良性前列腺增生组织中为17.5%，在前列腺癌组织中的表达水平高于良性增生的前列腺组织（P＜0.05）；Ki67在83例前列腺癌组织中的阳性表达率为69.9%，40例良性前列腺增生组织中为10%，在前列腺癌组织中的表达水平高于良性增生的前列腺组织（P＜0.05）；CXCR7 和Ki67的表达均与Gleason分级以及TNM分期有

一定相关性，且两者在Gleason分级中高、中分化与低分化前列腺癌组织之间的差异具有统计学意义（P<0.05），提示恶性程度越高的肿瘤CXCR7与Ki67的表达水平越高。说明在疾病的进展过程中CXCR7 与Ki67发挥着重要作用，参与了肿瘤细胞的增殖，侵袭和转移。本文CXCR7与Ki67的表达情况采用Spearman相关分析，显示前列腺癌组织中CXCR7的阳性表达与Ki67的阳性表达呈正相关（r=0.332，P<0.001），提示CXCR7可能参与了细胞周期的调控，促进细胞的增殖，促进了肿瘤恶性转化，但是如何参与细胞周期的调控，如何与其他信号因子协调参与细胞调控的机制还有待进一步研究和证实。

表2 前列腺癌组织中CXCR7与Ki-67蛋白表达的相关性 例

采用免疫组织化学对CXCR7和Ki67的表达进行联合诊断提高前列腺癌的诊断率，同时还可初步判断肿瘤的恶性程度、发展趋势及其预后，为前列腺癌的临床治疗提供重要依据。

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Expression and Correlation of CXCR7 and Ki67 in Prostatic Cancer

LIHualei1,ZHANG Qing2,LIU Yifei2,HUANG Hua2
（1Department of urinary surgery；2Department of Pathology,Affiliated Hospital of Nantong University,Jiangsu226001）

Objective：To study the CXCR7 and Ki67 expression and their correlation of them in prostatic cancer. M ethods：The expression of CXCR7 and Ki67 was detected in 83 cases with prostatic cancer and in 40 cases with benign prostatic hyperplasia by the immunohistochemistry.Results：CXCR7 and Ki67 expression in the caseswith prostatic cancer were 61.4%（51/83）and 69.9%（58/83）,which were obviously higher than those in the caseswith benign prostatic hyperplasia 17.5%（7/40）and 10%（4/40）（P<0.05）.The expression of CXCR7 and Ki67 were coincident in prostatic cancer （P<0.05）.Conclusions：CXCR7might take part in cell cycle control,so as to promote the occurrence and development of prostate cancer,and could have the guiding significance in its diagnosis and treatment of it.

prostatic cancer;CXCR7;Ki67;immunohistochemistry

R737.25

A

李华镭，男，汉族，江苏南通人，生于1980年9月，硕士，主治医师。研究方向∶男性泌尿生殖系统恶性肿瘤分子病理。 通信作者∶黄华，副主任技师，E-mail:hhua666@126.com

2014-08-03

1006-2440（2014）05-0445-04