伴有t（5；12）（q31；p13）的不典型慢性粒细胞性白血病患者遗传学研究*

钱 娟，刘 红（南通大学附属医院血液科，江苏226001）

·论著与基础研究·

伴有t（5；12）（q31；p13）的不典型慢性粒细胞性白血病患者遗传学研究*

钱 娟**，刘 红
（南通大学附属医院血液科，江苏226001）

目的：研究罕见的不典型慢性粒细胞性白血病（aCML）患者的遗传学和血液学特征。方法：采用R显带法、比较基因组杂交技术（aCGH）、逆转录聚合酶链反应方法对1例不典型慢性粒细胞性白血病患者进行遗传学研究。结果：该患者具有47，xx，+8/47，xx，idem，t（5；12）（q31；p13）染色体异常，且具有P53基因突变。入院后给予羟基脲治疗，随访半个月后病故。结论：不典型慢性粒细胞性白血病恶性程度高，预后差，遗传学研究可确诊。

不典型慢性粒细胞性白血病；p53抑癌基因；R显带法；比较基因组杂交技术；逆转录聚合酶链反应

慢性粒-单核细胞白血病患者常见t（5；12）（q31；p13）染色体异常，但文献报道也可见于不典型慢性粒细胞性白血病。1998年W lodarska等报道1例携带t（5；12）（q31；P13）染色体异常的aCML患者，且有ETV6基因重排。2008年Falko Fend等证实aCML是JAK2 V617F阴性的恶性血液肿瘤[1-2]。不典型慢性粒细胞性白血病具有慢性粒细胞性白血病的临床特征，但ph染色体和BCR-ABL融合基因均阴性，预后差，中位生存仅14～25个月。近来我院发现1例不典型慢性粒细胞性白血病患者。同时有+8和t（5；12）（q31；p13），RT-PCR证实P53基因突变，予以羟基脲治疗，未接受任何化疗，1个月内死亡。

1 资料与方法

1.1 一般资料 患者女，67岁，因“发热伴乏力1个月”于2011年6月28日收住我院。入院后查体贫血貌，脾脏肿大，肋下5cm，有胸腔积液。血常规∶WBC79×109/L，血小板55×109/L，单核细胞计数0.62× 109/L，单核细胞分类2.2%，嗜碱细胞分类0.9%，血红蛋白77g/L。骨髓像检查原始细胞12%，拟诊慢性粒细胞性白血病（加速期）。细胞遗传学证实47，xx，+8[18]/47，xx，idem，t（5；12）（q31；p13）[2]，BCR-ABL融合基因阴性，PDGFRA/B、FGFR1阴性。根据2008年WHO诊断学标准,诊断为不典型慢性粒细胞性白血病。入院后给予羟基脲治疗，患者因为家庭经济原因拒绝进一步治疗，住院1周后自动出院，患者随访半

个月后病故。

**[作者简介]钱娟，女，汉族，生于1981年2月，江苏南通人，硕士，研究方向∶白血病的发病机制。 通信作者∶刘红，教授，主任医师，E－mail∶liuhong6363@163.com

1.2 方法

1.2.1 染色体检查∶染色体标本取自患者初诊时的骨髓，经直接法或24 h短期培养法收获。染色体标本制备和R显带按本实验室常规方法[3]。有丝分裂指数（MI）为1 000个细胞中的中期分裂相数量。核型分析根据《国际人类细胞遗传学命名体制（ISCN 1995）》。

1.2.2 aCGH序列分析∶筛选基因组DNA>3μg的样品，按照标准操作流程进行酶切。经酶切处理的样品DNA，采用Agilent Genomic DNA Labeling Kit PLUS进行标记。按照Agilent CGH Human 244K芯片提供的杂交标准流程和配套试剂盒进行杂交。芯片结果用Agilent Microarray Scanner（Cat#G2565BA，Agilent technologies，Santa Clara，CA，US）进行扫描，扫描参数设置Scan resolution=3μm，PMT 100%，得到的扫描图用Feature Extraction software 10.7（Agilent technologies，Santa Clara，CA，US）读取数据并进行均一化，用DNA Analytics 6.5.0.58（Agilent technologies，Santa Clara，CA，US）进行数据分析。

1.2.3 P53基因突变的检测∶应用DNA抽提试剂盒（invitrogen，CA）按说明书步骤抽提细胞株DNA，PCR扩增p53基因。

2 结 果

2.1 染色体检查 患者初诊时骨髓细胞直接法和24 h培养法制备的染色体标本R显带核型分析结果提示47，xx，+8。患者白血病细胞培养7d后所得标本染色体的质量有明显改善 ,R带核型分析示47，xx，+8[18]/47，xx，idem，t（5；12）（q31；p13）[2]（图1）。

图1 R带核型分析

2.2 aCGH检测结果 为了证实该患者的染色体的断裂位点，采用aCGH分析，证实染色体的断裂位点在+8，12p13（图2）。

图2 aCGH分析结果

2.3 P53基因突变的检测 PCR扩增患者初诊时的白血病细胞的p53基因的第4号外显子。扩增片段测序结果显示4号外显子第215位碱基存在点突变，由CCC-CGC，相应的氨基酸由脯氨酸变成精氨酸（图3）。

图3 P53基因突变的检测结果

3 讨 论

本病例初诊时24h培养法所制备的染色体标本R显带分析显示47，xx，+8,患者白血病细胞培养7天后，所得标本染色体的质量有明显改善，R带核型分析示47，xx，+8[18]/47，xx，idem，t（5；12）（q31；p13）[2]，表明延长培养时间，使分裂相的数量和质量得以改善，从而有助于增加像t（5；12）这样较为隐匿的异常染色体的检出机会。常规R显带核型分析结果示NT-1细胞有与患者原代白血病细胞株一致的染色体∶47，xx，+8/47，xx，idem，t（5；12）（q31；p13）。为了进一步证实染色体的异常，通过aCGH进一步检测，NT-1细胞株具有47，xx，+8及12p13异常核型，但缺乏5q31核型，通过RT-PCR方法检测∶AML1/

ETO，BCR/ABL，CBF/MYH11，DEK/CAN，E2A/HLF，E2A/PBX1，EVI1/MDS1/EVI1，MLL/AF1P，MLL/AF4，MLL/AF9，MLL/AF10，MLL/AF17，MLL/AF19，MLL/ AFX，MLL/ELL，MLL/ENL，NPM/ALK，NPM/MLF1，NPM/RARA，PLZF/RARA，PML/RARA，SET/CAN，SIL/TAL1，TEL/ABL，TEL/AML1，TLS/ERG，and TEL/ PDGFR等常见的29种融合基因均阴性，因此该细胞株建立为新的融合基因克隆奠定了一定的基础。

P53基因是细胞生长周期中的负调节因子，与细胞周期的调控、DNA修复、细胞分化、细胞凋亡等重要的生物学功能有关。其缺失或突变是实体瘤常见的异常，但在白血病中较为鲜见[4]。它是重要的抑癌基因，RT-PCR证实PCR扩增p53基因的第4号外显子，扩增片段测序结果显示4号外显子第215位碱基存在点突变，由CCC-CGC，相应的氨基酸由脯氨酸变成了精氨酸。这可能与该患者发病后很快死亡有关。

[1]Fend F，Horn T，Koch I，et al.Atypical chronic myeloid leukemia as defined in the WHO classification is a JAK2 V617F negative neoplasm［J］.Leuk Res，2008，32（12）∶1931-1935.

[2]Yagasaki F，Jinnai I，Yoshida S，et al.Fusion of TEL/ETV6 to a novel ACS2 in myelodysplastic syndrome and acute myelogenous leukemia with t（5；12）（q31；p13）［J］.Genes Chromosomes Cancer，1999，26（3）∶192-202.

[3]薛永权，过宇.介绍一种改良的骨髓细胞染色体热变性姬姆萨R显带法［J］.中华医学检验杂志，1986，9（4）∶247-248.

[4]Imamura J，Miyoshi I，Koeffler HP.P53 in hematologic maligancies［J］.Blood，1994，84（8）∶2412-2421.

Cytogenetic analysis on atypical chronicm yeloid leukem ia patientw ith t(5;12)(q31;P13)

QIAN Juan,LIU Hong
(Departmentof Hematology,Affiliated Hospital of Nantong University,Jiangsu 226001)

Objective:Cytogenetic analysiswas conducted on a rare atypical chronic myeloid leukemia(aCML)patient.M ethods:Various methods were applied to identify and characterize aCML patient’s cytogenetics,including R-banding technique,aCGH,RT-PCR.Results:Cytogenetic analysis demonstrated two abnormalities:47,xx,+8 and 47,xx, +8 accompanied by t(5;12)(q31;p13)translocation,and P53 genemutation.Conclusion:Cytogenetic analysis is a powerful tool in diagnosing aCML.

atypical chronic myeloid leukemia;p53;R-banding technique;comparativegenomichybridization （CGH）;reverse transcriptate polymerase chair reaction(RT-PCR)

R733.73

A

国家自然科学基金资助项目（81070400）；江苏省医学创新团队与领军人才项目（LJ201136）。

2014-08-30

1006-2440（2014）05-0430-03