柿叶中黄酮类成分的化学研究*

张胜海，王英姿，段飞鹏，李彩霞，王 玥，孟繁蕴

（1.北京中医药大学中药学院，北京 100102；2.北京师范大学，中药资源保护与利用北京市重点实验室，北京 100875）

柿叶为柿树科柿树属植物柿（Diospryros kaki L）的新鲜或干燥叶，味苦，性寒，具有下气平喘、生津止渴、清热解毒等作用。其入药始见于明《滇南本草》记载“经霜叶敷臃疮”，《本草再新》记载用于“治咳嗽吐血，止咳生津”，主要用于止血、降压及治疗冠心病心绞痛、胃溃疡出血、肺结核出血、功能性子宫出血等内脏出血病症[1]，其主要有效成分为黄酮类、三萜类、有机酸类、香豆素类、植物甾醇类、挥发性成分等[2-3]。目前上市的的柿叶制剂均以柿叶的乙酸乙酯萃取物为原料，其中的主要有效成分为黄酮类化合物。柿叶中的黄酮类化合物具有防治心血管疾病，保护心肌细胞、脑细胞等多种活性[4-7]。

为了进一步研究柿叶中的黄酮类化合物组成，本实验分离并鉴定了6个黄酮类化合物：染料木素，异鼠李素，槲皮素-7-O-β-D-鼠李糖苷，槲皮素，槲皮素－3－O－β－D－吡喃葡萄糖苷，芦丁。其中化合物1～3为首次从该属植物中分离得到。

1 仪器与材料

Bruker A vance500型核磁共振谱仪；A PEX II型FT-ICR质谱仪，Lab Alliance中低压半制备液相；LabAlliance半制备柱KromasilC18（250mm×20mm，10 μm）；Sephadex LH-20 为 Pharmacia 公司产品；Toyopearl HW-40C为日本TOSOH公司产品；柱色谱用聚酰胺（100～200目）和薄层色谱聚酰胺薄膜均为台州市路桥四甲生化塑料厂产品；实验所用试剂均为分析纯。实验分离用样品为柿叶水提取物的乙酸乙酯萃取物，陕西华天生物工程有限公司，批号：201003。

2 分离

柿叶水提取物的乙酸乙酯萃取物（100 g），经聚酰胺柱色谱（水-乙醇 90∶10～5∶95）梯度洗脱划分为Fr.1～7共7个组分。Fr.4经聚酰胺柱色谱（水-乙醇梯度洗脱）分离纯化得化合物6（48 mg）。Fr.5经聚酰胺柱色谱（水-乙醇梯度洗脱）和Toyopeal HW-40（甲醇洗脱）分离纯化得化合物3（4 mg）。Fr.6经聚酰胺柱色谱（水-乙醇梯度洗脱）和Toyopeal HW-40（50%甲醇）分离纯化得化合物1（8 mg）。Fr.6经聚酰胺柱色谱（水-乙醇梯度洗脱）、Sephadex LH-20（50%甲醇）及半制备液相色谱[8-9]（水-甲醇梯度洗脱）分离纯化得化合物 5（22mg），2（6mg），4（24mg）。

3 结构鉴定

化合物1:淡黄色树枝状针晶粉末（甲醇）。ESIMSm/z：271[M+H]+。1H-NMR（DMSO－d6）δ：12.96，10.88，9.59（5，7，4’－OH），8.33（1H，s，H －2），7.38（2H，d，J＝8.5Hz，H－2’，6’），6.82（2H，d，J＝8.5Hz，H－3’，5’），6.39（1H，s，H－8），6.23（1H，s，H－6）。13CNMR （DMSO－d6，125 MHz）δ：180.7 （C－4），164.8（C－7），162.5 （C－5），158.1 （C－4’），157.9 （C－9），154.4（C－2），130.6（C－2’，6’），121.7（C－1’），120.4（C－3），115.6（C－3’，5’），104.9（C－10），99.4（C－6），94.1（C－8）。NMR 数据与文献[10]报道的化合物染料木素基本一致，判断该化合物为染料木素。

化合物 2：淡黄色粉末。1H-NMR（DMSO-d6），δ：12.44，10.78，9.75，9.43（5，7，4’，3－OH），7.76（1H，d，J＝2.0 Hz，H－2’），7.70（1H，dd，J＝2.0 Hz，8.4 Hz，H－6’），6.95（1H，d，J＝8.4 Hz，H－5’），6.48（1H，d，J＝2.0 Hz，H－8），6.20（1H，d，J＝2.0 Hz，H－6），3.85（3H，s，OCH3）。13C－NMR（DMSO－d6，125 MHz）δ：176.3（C－4），164.4（C－7），161.1（C－9），156.6（C－5），149.2（C－4’），147.8（C －2），147.0（C －3’），134.9（C －3），122.5（C－1’），122.1（C－6’），116.0（C－2’），112.1（C－5’），103.5（C－10），98.7（C－6），94.1（C－8），56.2（OCH3）。氢谱、碳谱数据与文献[11-12]报道的异鼠李素数据基本一致，故确定该化合物为异鼠李素。

化合物3：黄色结晶性粉末（甲醇）。1H－NMR（DMSO －d6）δ：12.50，9.65，9.53，9.32 （5，4’，3’，3 －OH），7.73（1H，d，J＝2.0 Hz，H－2’），7.59（1H，dd，J＝9.0，2.0 Hz，H－6’），6.89 （1H，d，J＝9.0 Hz，H －5’），6.79（1H，d，J＝2.0 Hz，H－8），6.41（1H，d，J＝2.0 Hz，H－6），5.55（1H，s，H－1’’），5.15（1H，d，J＝4.0 Hz），4.93（1H，d，J＝5.0 Hz），4.81（2H，m），3.85（1H，s），3.64（1H，m，H－5’’），1.13（3H，d，J＝7 Hz，Rha－CH3）。13C－NMR（DMSO－d6，125 MHz）δ：176.5（C－4），161.9（C－7），160.8（C－5），156.1（C－9），148.3（C－2），147.9（C－4’），145.5（C－3’），136.6（C－3），122.3（C－1’），120.6（C－6’），116.1（C－2’），115.6（C－5’），105.1（C－10），99.3（C－6），98.9（C－1’’），94.6（C－8），72.0（C－4’’），70.7（C－3’’），70.5（C－2’’），70.3（C－5’’），18.4（C－6’’）。以上数据与文献报道[13]的槲皮素-7-O-β-D-鼠李糖苷一致，故鉴定该化合物为槲皮素-7-O-β-D-鼠李糖苷。

化合物 4：黄色粉末。1H-NMR（DMSO-d6）δ：12.50，10.78，9.59，9.36，9.30（5，7，3，3’，4’，－OH），7.68 （1H，d，J＝2.0 Hz，H －2’），7.55 （1H，dd，J＝7.5，2.0 Hz，H－6’），6.88（1H，d，J＝7.5 Hz，H－5’），6.41（1H，d，J＝2.0 Hz，H－8），6.19（1H，d，J＝2.0 Hz，H－6）。13C－NMR （CD3OD，125 MHz）δ：175.9 （C－4），164.9（C－7），161.1（C－9），156.8（C－5），147.5（C－2），146.6（C－4’），144.8（C－3’），135.8（C－3），122.7（C－1’），120.3（C－6’），114.8（C－5’），114.6（C－2’），103.1（C－10），97.8（C－6），93.0（C－8）。以上数据与文献[14]报道的槲皮素数据基本一致，故鉴定为槲皮素。

化合物 5：黄色粉末。1H-NMR（DMSO-d6）δ：12.65，10.86，9.72，9.22（5，7，4’，3’－OH），7.59（1H，dd，J＝8.4，1.5 Hz，H－6’），7.58 （1H，d，J＝1.5 Hz，H －2’），6.85（1H，d，J＝8.4 Hz，H－5’），6.41（1H，s，H－8），6.21 （1H，s，H－6），5.47 （1H，d，J＝7.2 Hz，H－1’’）。13C－NMR（DMSO－d6，125 MHz）δ：177.9（C－4），164.6（C－7），161.7（C－5），156.8（C－2，9），148.9（C－4’），145.3（C－3’），133.8（C－3），122.1（C－1’），121.6（C－6’），116.6 （C－5’），115.7 （C－2’），104.4 （C－10），101.3（C－1’’），99.1（C－6），93.9（C－8），78.0（C－2’’），77.0（C－3’’），74.5（C－4’’），70.4（C－5’’），61.4（C－6’’）。以上数据与文献报道[15]的槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷一致，故鉴定该化合物为槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物 6：淡黄色粉末。1H-NMR（DMSO-d6）δ：12.61，10.84，9.67，9.18（5，7，3’，4’－OH），7.56（1H，d，J＝2.0 Hz，2’－H），7.55 （1H，dd，J＝2.0，9.0 Hz，6’－H），6.85（1H，d，J＝9.0 Hz，5’－H），6.39（1H，d，J＝1.9 Hz，8－H），6.20（1H，d，J＝1.9 Hz，6－H），5.28（1H，d，J＝7.3 Hz，1’’－H），4.400 （1H，d，J＝1.3 Hz，1’’’－H），3.05～3.72（m，sugar protons），1.00（3H，d，J＝6.2 Hz，6’’’－H）。13C－NMR（DMSO－d6，125 MHz）δ：177.8（C－4），164.5（C－7），161.7（C－5），157.1（C－9），156.9（C－2），148.9（C－4’），145.2（C－3’），133.8（C－3），122.0（C－6’），121.6 （C－1’），116.7 （C－5’），115.7 （C－2’），104.4（C－10），101.6（C－1’’），101.2（C－1’’’），99.1（C－6），94.0（C－8），76.9（C－3’’），76.4（C－5’’），74.5（C－2’’），72.3（C－4’’’），71.0（C－3’’’），70.8（C－2’’’），70.5（C －4’’），67.4（C －6’’），68.7（C－5’’’），18.2（C－6’’’）。波谱数据与文献[16]报道一致，故鉴定该化合物为芦丁。

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