阴阳气血双调复方对自然衰老围绝经期大鼠模型卵巢形态学和血清性激素水平的影响

白建民， 冯冬兰， 王爱梅， 时伟红， 未小明， 曾宪平

(南阳医学高等专科学校，河南 南阳 473061)

本研究运用阴阳气血双调复方灌胃治疗自然衰老大鼠围绝经期模型，观察大鼠卵巢组织学改变，检测其血清性激素(E2、FSH、LH)水平变化，评价阴阳气血双调复方治疗围绝经期综合征的疗效，探讨其治疗围绝经期综合征的可能作用机制。

1 材料

1.1 实验动物

选用健康雌性SD大鼠，11～15月龄，体质量250 g～350 g，经阴道细胞涂片连续5 d未出现动情期变化大鼠30只；健康雌性SD大鼠10只，4～6月龄，体质量120 g～180 g，由河南省医学实验动物中心提供。

1.2 药物与制剂

阴阳气血双调复方组成：紫河车6 g,熟地15 g,麦冬12 g,石斛20 g,知母15 g,百合20 g,白芍15 g,女贞子12 g,山茱萸15 g,龟板胶15 g,鹿角胶6 g,菟丝子15 g,淫羊藿12 g,肉桂6 g,当归10 g,丹参15 g,川芎6 g,藏红花6 g,山药20 g,人参10 g,五味子10 g,郁金15 g,煅龙牡20 g，以上药材均购自南阳医专附属中医院中药房，经南阳医专中药鉴定教研室姚学文副教授鉴定，符合2010年版《中国药典》的相关规定。水煮法：按以上处方称取药材，分别水煎煮2次，第1次加10倍量水煎煮40 min，第2次加8倍量水煎煮30 min，双层纱布滤过，制成浓缩液，浓缩至生药含量为5 g/L的浓缩液。尼尔雌醇由上海医药<集团>有限公司华联制药厂生产(批号H31021648)。

1.3 实验仪器

E2、FSH、LH放射免疫分析试剂盒由北京邦定生物技术有限公司生产，SSW型微电脑电热恒温槽由上海博迅实业有限公司医疗设备厂生产，LD4-2低速离心机由北京医用离心机厂生产(型号DZF-6020)，B×41-Olympus生物显微镜由南京长城信息系统有限公司生产。

2 方法

2.1 动物分组及给药

将30只自然衰老围绝经期雌性SD大鼠按随机数字表法分为3组，每组10只，即围绝经期模型组、阴阳气血双调复方组和雌激素对照组。另外选取4～6月龄健康SD雌性大鼠10只作为空白对照组。阴阳气血双调复方组给予阴阳气血双调复方5 g/kg浓缩液，2 ml/d灌胃；雌激素对照组每周1次给予尼尔雌醇和蒸馏水配制成1 mg/kg混悬液，2 ml/次灌胃，其余时间给予等量生理盐水灌胃；围绝经期模型组和空白对照组每天给予等量生理盐水2 ml/d灌胃，连续给药4周。

2.2 观测指标与测定方法

各实验组大鼠末次灌胃治疗后禁食12 h，用2.25%戊巴比妥钠(40 mg/kg)行腹腔麻醉，麻醉成功后剖腹，暴露腹主动脉(色白)，头皮静脉穿刺针采血4 ml至生化检测试管，室温下静置4～8 h，分离血清后放置于-20℃冰箱内保存，严格按照放射免疫分析试剂盒测量方法分别测定FSH、LH、E2水平。采血结束后，放血处死大鼠摘取卵巢组织，制作卵巢石蜡切片，用光学显微镜观察卵巢组织形态学的改变。

2.3 统计学方法

3 结果

3.1 阴阳气血双调复方对模型大鼠卵巢形态学的影响

图1显示，空白对照组大鼠镜下可见黄体发育良好、体积大、数目多、成熟卵泡多、闭锁卵泡少见；与空白对照组比较，围绝经期模型组大鼠镜下可见闭锁卵泡增多，成熟卵泡数量明显减少，黄体数目少，体积小；与围绝经期模型组比较，用药组镜下均可见黄体数目明显增多，闭锁卵泡数量减少，提示阴阳气血双调复方组和雌激素对照组对卵巢萎缩现象均有改善作用。

图1 各实验组大鼠卵巢组织切片HE染色结果

3.2 阴阳气血双调复方对模型大鼠性激素水平的影响

表1显示，围绝经期模型组大鼠血清E2水平低于空白对照组，血清FSH、LH值则明显高于正常组(P<0.05，P<0.01)；与围绝经期模型组比较，阴阳气血双调复方组和雌激素对照组均能提高围绝经期大鼠血清E2水平，降低围绝经期大鼠血清FSH、LH值(P<0.01)，且2组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表1 各组大鼠血清性激素检测结果

注：与空白对照组比较：##P<0.01；与围绝经期模型组比较：**P<0.01

4 讨论

卵巢功能衰退可使卵巢分泌卵泡数量减少，合成性激素量不足，血中雌-孕激素水平下降，导致下丘脑、垂体功能衰退，是围绝经期妇女内分泌失调的主要原因。目前，西医治疗主要采用激素替代疗法防治围绝经期综合征，疗效肯定，但长期激素治疗可能增加子宫内膜癌、乳腺癌的发生风险[1]。

围绝经期综合征属于中医“绝经前后诸证”范畴。中医认为，绝经前后人体肾气逐渐衰退，天癸渐竭，冲任二脉俱虚，极易导致肾的阴阳平衡失调。但通过长期的临床观察发现，肾阴阳俱虚患者单纯双补阴阳疗效不佳。肾为冲任之本，胞络系于肾而络于胞中，肾阴虚则精亏血少；肾阳虚则虚寒内生，冲任、胞宫失煦，以致寒凝血瘀，冲任、胞宫气血运行失畅。《景岳全书·命门叙》亦曰：“命门为精血之海……为元气之根……五脏之阴气非此不能滋；五脏之阳气非此不能发。”可见肾为五脏阴阳之本,气血之根。绝经前后肾阴阳俱虚者，不仅肾之阴阳亏虚、失衡且波及气血，使气血亦虚、冲任瘀滞，并累及心肝脾诸脏，临床常表现为复杂多样的变化和证候。刘完素在《素问病机气宜保命集》中就曾指出：“……天癸已绝，乃属太阴经也。”强调了此期肾气渐衰，冲任渐虚，全靠补后天养先天，充养冲任气血，以延缓衰老的重要性。此期双理阴阳气血、健脾益气、疏肝解郁、养心安神，多脏兼顾更适合其复杂的生理病理变化需求。阴阳气血双调复方正是基于以上理论，着重阴阳双补、气血并调，并辅以健脾益气、疏肝解郁、养心安神、育阴潜阳诸法，以适应此期的复杂病机。实验结果亦表明，多脏并调，重在脾肾，双理气血可恢复肾之阴阳平衡，重现脏腑正常功能，较之单纯双补阴阳之法更适合围绝经期的生理病理变化。

现代药理研究表明，紫河车能直接刺激卵巢组织，提高E2水平，并能补充适量的女性荷尔蒙[2]；百合、知母有雌激素样活性，能调节内分泌和改善围绝经期综合征大鼠临床症状[3]；淫羊藿主要成分黄酮苷，具有雌激素样作用[4]；菟丝子可提高下丘脑-脑垂体-卵巢对LRH和LH的反应性，增加实验大鼠垂体前叶、卵巢、子宫重量[5]；红花能降低围绝经期综合征患者血清FSH、LH含量，增加血清E2含量[6]。因此，有必要进一步探讨阴阳气血双调复方调节生殖轴的作用机制，为中医理论的开拓性运用、替代性激素治疗、新药的开发提供有效的实验依据。

实验研究结果表明，阴阳气血双调复方和雌激素一样对围绝经期大鼠下丘脑-垂体-卵巢轴的失衡状态有明显调节作用，能提高血清E2水平，降低血清FSH、LH含量，改善卵巢功能，促进排卵，为该方的临床应用和开发提供科学的实验依据。

[1] 张鸿宇,罗晓.左归丸合逍遥丸治疗围绝经期综合征[J].中国实验方剂学杂志，2012， 18(12):295-297．

[2] 高学敏.治疗学[M].北京:人民卫生出版社,2001:1719.

[3] 钱莉亚,许惠琴,严然,等.百合知母汤治疗围绝经期综合征的实验研究[J].南京中医药大学学报,2010,26(3)：202-205．

[4] 曹秀梅,潘玉华.龙凤宝片治疗围绝经期综合征的再评价研究[J].中国实验方剂学杂志， 2012,18(24): 324-326.

[5] 秦达念,佘白蓉,佘运初.菟丝子黄酮对实验动物及人绒毛组织生殖功能的影响[J].中药新药与临床药理,2000，11(6):349-351.

[6] 王娟.红花逍遥片治疗围绝经期综合征35例[J].中国实验方剂学杂志，2012，18(18)：312-313.