欣月片改善大鼠骨密度的实验研究

雷晓林 钱星文 彭 菊 李俊葵 刘 伟*

欣月片改善大鼠骨密度的实验研究

雷晓林1钱星文1彭 菊2李俊葵2刘 伟1*

（1广东省东方药林药业有限公司，广州510520；2南方医科大学，广州510520）

目的观测东方药林牌欣月片对大鼠骨密度的影响。方法按体重将动物随机分为模型组，假手术组，欣月片低、中、高三个剂量组。各组大鼠实行卵巢切除术（假手术组保留双侧卵巢）后，连续注射3天青霉素。于术后第8天，各组分别喂饲含不同剂量受试物的AIN93基础饲料，模型对照组和假手术组只喂饲AIN93基础饲料，13周后，测定股骨重量、股骨长度、股骨密度、钙含量。结果欣月片对大鼠体重，股骨长度、股骨重量均无影响，中剂量欣月片能显著提高股骨钙含量，低剂量组和高剂量组能显著提高股骨远心端和股骨中点的骨密度。结论欣月片（女士健骨片）有增加大鼠骨密度功能的作用。

欣月片；卵巢切除术；骨密度；中医药疗法

骨质疏松症（Osteoporosis，OP）是以骨量减少、骨的微观结构退化为特征，致使骨的脆性增加以及易于发生骨折的一种全身性骨骼疾病［1］。女性绝经后雌激素分泌不足，导致高转换型骨质疏松症。大量研究表明，激素替代治疗（HRT）可有效防止绝经后骨质疏松症及其相关骨折的发生。但长期应用HRT可增加子宫内膜癌和乳腺癌的危险性［2-3］。因此，骨质疏松症足以引起人们的重视，多年来人们都在不断地积极探索着治疗骨质疏松症的药物。虽然目前治疗骨质疏松症的药物众多，但疗效并不明显。故急需进一步寻找疗效更好、副作用更少的新药。东方药林牌欣月片是由东方药林药业有限公司研发的一款保健品，主要成分是淫羊藿、骨碎补、阿胶等，前期药理实验表明具有增加骨密度的作用。本实验主要探讨其对骨质疏松症大鼠模型骨密度的影响，为进一步验证其药效作用提供可靠的实验依据。

1 材料与方法

1.1样品东方药林牌欣月片（女士），人拟用剂量为6.84g／60kg·BW·日，送检样品为浅绿色片剂，由东方药林药业有限公司提供。

1.2实验动物SPF级雌性Wistar大鼠50只，体重为289～385g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK（京）2006-0009 0156828。

1.3实验动物饲养环境SPF级实验动物室，合格证号：SYXK（津）2008-0004。温度20～25℃，相对湿度40～70%，饲料由北京科澳协力饲料有限公司提供，饲料合格证号：SCXK（京）2005-0007 0152257。

1.4主要仪器原子吸收光谱仪（A-680），双能X线骨密度仪（XR-36型），精密卡尺，动物解剖器械，万分之一天平，动物天平，105℃烘箱，消化炉。

1.5剂量选择本品人拟用剂量为6.84g／60kg·BW·日，送检样品为浅绿色片剂，因样品不含Ca，所以未设CaCO3对照组。大鼠经适应性饲养一周后按体重随机分为5组即模型组；假手术组；受试物低、中、高三个剂量组，分别为0.57g／kg·BW、1.14g／kg·BW、2.28g／kg·BW、（分别相当于人拟用剂量的5倍、10倍、20倍）。

1.6饲料配制参照美国营养研究所AIN93半成品饲料配方和实验大鼠全价营养饲料国家标准，替换饲料中来源于大豆的成分，配制不含大豆异黄酮等植物雌激素活性成分的饲料。基础饲料配方（g／kg）：酪蛋白230g，DL-蛋氨酸3g，玉米淀粉320g，蔗糖300g，纤维素50g，玉米油50g，混合无机盐35g，混合维生素10g，氯化胆碱2g，分别称取样品228g、456g、912g粉碎后，加入AIN93基础饲料至32kg，制成块料（大鼠摄食量按体重的8%计）。

1.7试验方法

1.7.1卵巢切除术大鼠经腹腔注射30mg／kg·BW的戊巴比妥钠溶液麻醉，腹位固定后于腹中线距阴道口3～4cm处去毛，无菌条件下切开皮肤和腹肌约2～3cm，拨开脂肪层分别将两侧子宫角拉出，以止血钳固定卵巢，将卵巢下输卵管用丝线结扎，切除双侧卵巢，逐层缝合切口。假手术组经手术切除约0.5g脂肪，保留双侧卵巢。各组动物术后肌肉注射2万单位青霉素，连续3天。

1.7.2生长发育大鼠手术8天后，开始分别喂饲加入不同剂量受试物的AIN93基础饲料，模型对照组和假手术组只喂饲AIN93基础饲料，每组10只，单笼喂养，自由进食，饮去离子水（以避免从饮水中获得钙），每周称体重，记录进食量，实验周期为13周。

1.7.3股骨重量测量动物喂养13周后处死，剥离出一侧股骨，于105℃烘箱中烤至恒重，称量骨干重。

1.7.4股骨长度测量动物喂养13周后处死，剥离出一侧股骨，于105℃烘箱中烘烤至恒重测量股骨长度。

1.7.5股骨密度测量用单光子骨密度仪测量股骨中点及股骨远心端的骨密度。

1.7.6钙含量的测定大鼠一侧股骨烤至恒重后整体采用湿法消化；用原子吸收分光光度法测定钙含量（GB／T 5009.92-2003）。

1.8统计学方法用SPSS 11.5 for Windows软件进行方差分析检验。

1.9结果判定不含钙的产品，卵巢切除基础对照组骨钙含量或骨密度显著低于假手术组，表明造成大鼠骨密度低下模型；卵巢切除+受试物组的骨钙含量或骨密度较卵巢切除基础对照组显著增加，而其它指标（体重除外）不显著低于卵巢切除基础对照，可判定受试物具有增加骨密度功能作用。

2 结果

2.1对大鼠体重的影响由表1可见，假手术组的大鼠体重低于模型对照组（P＜0.05），其他各组大鼠体重与模型对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）。各组大鼠总进食量与模型对照组比较无统计学意义（P＞0.05）。表明欣月片对大鼠体重无影响。

表1 欣月片对大鼠体重的影响（g，x±s，n=10）

2.2对股骨长度 股骨重量 骨钙含量的影响表2为大鼠的股骨长度、股骨重量及股骨钙含量，可以看出，模型对照组的股骨钙含量低于假手术组（P＜0.05），表明大鼠骨密度低下模型建立成功；各剂量受试物组大鼠股骨长度、股骨重量与模型对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05），中剂量受试物组大鼠的股骨钙含量（每克）高于模型对照组，且差异有统计学意义（P＜0.05）。试验结果表明各组对股骨长度、股骨重量均无影响，欣月片中剂量组能够显著增加大鼠股骨钙含量。

表2 对股骨长度、股骨重量、骨钙含量的影响（x±s）

2.3对大鼠骨密度的影响表3为大鼠股骨远心端和股骨中点的骨密度，可以看出，模型对照组股骨远心端及股骨中点的骨密度低于假手术组（P＜0.05），表明大鼠骨密度低下模型机建立成功；低、高剂量受试物组大鼠股骨远心端和股骨中点的骨密度高于模型对照组，且差异有统计学意义（P＜0.05）。试验结果表明低、高剂量受试物组能显著提高股骨远心端和股骨中点的骨密度。

表3 对大鼠骨密度的影响（n，x±s）

3 讨论

骨质疏松症（Osteoporosis，OP）是以骨量减少、骨质微观结构退化为特征，致使骨脆性增加以及易于发生骨折的一种全身性疾病。随着人口的老龄化，骨质疏松目前在世界上已成为一个较大的社会问题，严重影响高龄人群的健康和寿命。在中医学古籍中，虽有与骨质疏松症表现相似的论述，但并没有系统的病名，根据其临床症状可分别将其对应隶属于“骨痿”“腰痛”“骨痹”“骨折”“绝经前后诸症”“虚劳”等范畴［4］。

东方药林牌欣月片，其主要成分为骨碎补、淫羊藿、阿胶等，有实验研究表明，其主要成分骨碎补具有增加骨密度和防治骨质疏松症的发生的作用［5-7］。淫羊藿中的淫羊藿苷不仅可以明显抑制破骨细胞的分化，同时具有抑制破骨细胞的骨吸收的功能［8］，淫羊藿可提高卵巢切除大鼠的骨密度、最大载荷和抗弯刚度，降低血清TRACP和BALP的活性，增强去卵巢骨质疏松大鼠抗外力冲击的能力，可有效抑制骨量丢失，防止骨质疏松的发生［9］。阿胶可加强巨核细胞的聚集及增强其活性，并可促进软骨细胞、成骨细胞的增殖及合成活性，加快软骨内骨化，促进骨愈合［10］。综上所述，东方药林牌欣月片具有增加骨密度的功效。近年来从天然资源中寻找活性物质用于防治疾病和维持机体健康已成为人们关注的话题。因此，东方药林牌欣月片具有很好的开发研究前景。

［1］刘忠厚.骨矿与临床［M］.北京：中国科学技术出版社，2006：2.

［2］Eiken P，Kolth of N，Nielsen SP.Effect of 10 years’hormone replacement therapy on bone mineral content in postmenopausal women.Bone，1996，19（5 Suppl）：191-193.

［3］Grady D，Gebretsadik T.Kerlikowske K，et al.Hormone replacement therapy and endometrial cancer risk：a meta-analysis［J］.obstet Gynecol，1995，85：304-313.

［4］李海凤，周伟生.骨质疏松症的中西医病因病机研究进展［J］.Journal of Modern Clinical Medical Bioengineering，2003，9（5）：450-455.

［5］刘剑刚，谢雁鸣，赵晋宁，等.骨碎补总黄酮胶囊对实验性骨质疏松症和镇痛作用的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2004，10（5）：31-34.

［6］谢雁鸣，鞠大宏，赵晋宁.骨碎补总黄酮对去卵巢大鼠骨密度和骨组织形态计量学影响［J］.中国中药杂志，2004，29（4）：343-346.

［7］贾红漪，王宝利，邝晨钟，等.骨碎补与雌激素对去卵巢大鼠骨质疏松作用的对照研究［J］.中国中西医结合杂志，2006，26：116-119.

［8］张大威，程岩，张金超，等.淫羊藿苷对破骨细胞的分化及骨吸收功能的影响［J］.中国药理学通报，2007，23（4）：463-467.

［9］鲍加荣，杨继文，李树峰，等.淫羊藿苷对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响［J］.卫生研究，2005，34（2）：191.

［10］高云，董福慧，郑军.阿胶对骨愈合过程中相关基因表达影响［J］.中国骨伤，2004，17（9）：520-523.

Ex p e rime n tal St u d y o n t he Imp r o v emen t o f Bo ne Min e r al Den sit y b y Cr e s c en t Tablet s

LeiXiaolin1Qian Xingwen1Peng Ju2Li Junkui2Liu Wei1
（1 Oriental Pharmaceutical Co.，Ltd.Guangzhou，510515，China；2 Southern Medical University，Guangzhou，510515，China）

Xinyue Table；ovariectomy；bone mineral density；Chinese medicine therapy

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.04.098

：1672-2779（2014）-04-0158-02

苏 玲 本文校对：刘 仪

2013-11-09）

Asbtract：ObjectiveTo observe the influence of Oriental medicine lin Xinyue tablet of rat bone mineral density in rats.MethodsAccording to the weight of the animals were randomly divided into model group，sham-operation group，Xinyue tablet of high-dose，medium-dose and lowdose three dose groups.Groups of rats for ovariectomy（sham-operation group to keep bilateral ovaries），penicillin were applied in rat for continuous 3 days.The eighth day after surgery，the feeding with different dose AIN93，model control group and the control group only feeding AIN93，13 weeks，weight of the femur，length of femur，density of femur，calcium content were measured.ResultsXinyue tablet had no effect on weight，the femur length，femur weight in rats，medium-dose of Xinyue tablet can significantly increase the femoral calcium content，low dose group and high dose group could significantly improve the femoral distant-end bone mineral density and middle femoral bone mineral density.ConclusionsXinyue tablet have increased the rat bone mineral density function.