欣月片的急性经口毒性和遗传毒性实验研究

钱星文 雷晓林 彭 菊 李俊葵 刘 伟*

欣月片的急性经口毒性和遗传毒性实验研究

钱星文1雷晓林1彭 菊2李俊葵2刘 伟1*

（1广东省东方药林药业有限公司，广州510520；2南方医科大学，广州510520）

目的评价欣月片的安全性，为其开发利用提供科学依据。方法按照GB15193～2003《食品安全性毒理学评价程序和方法》进行大小鼠的急性经口毒性实验，Ames实验，小鼠骨髓细胞微核试验及小鼠睾丸染色体畸变试验。结果欣月片的急性经口LD50＞20.0g／kg BW；三项遗传毒性实验结果均为阴性。结论欣月片对小鼠的急性经口毒性属无毒；未见遗传毒性作用。

欣月片；急性经口毒性；遗传毒性

东方药林牌欣月片是由东方药林药业有限公司专门为女性研发的一款保健食品。其主要成分为淫羊藿、骨碎补、阿胶、大豆异黄酮等，经动物实验证明，其具有增加骨密度的保健功能。欣月片的开发前景看好，但是，目前欣月片的安全性未知，我们根据GB15193～2003《食品安全性毒理学评价程序和方法》对欣月片的提取物进行急性经口毒性和遗传毒性实验。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品 东方药林牌欣月片（女士），每日的服用剂量为6.84g／60kg·BW·日，送检样品为去除辅料样品，棕色粉末2.5kg，去辅料样品相当于成品样品5.79kg（原料辅料比例约为1∶1.32），去辅料样品每日服用剂量为2.95g／60kg·BW·日，由东方药林药业有限公司提供。

1.1.2实验动物SPF级昆明种小鼠和Wistar大鼠，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号为SCXK-（京）2006-0009 0151282，0151285，0154756，0155142（分别用于急性经口毒性试验、骨髓细胞微核试验和睾丸染色体试验）。

1.1.3实验动物环境SPF级实验动物室合格证号：SYXK（津）2008-0004。温度：20～25℃，湿度：40～70%RH。饲料由天津市华荣实验动物科技有限公司提供，饲料生产许可证号：SCXK（津）2006-0001。

1.2方法［1］

1.2.1经口急性毒性试验

1.2.1.1小鼠经口急性毒性试验（最大耐受量法）选用18～22g SPF级昆明种小鼠20只，雌雄各半，禁食16小时后进行实验，以20.0g／kg·BW的剂量，间隔6小时灌胃两次，每次灌胃体积为0.20m1／10g·BW，给药后连续观察14天。记录中毒表现及死亡情况。

1.2.1.2大鼠经口急性毒性试验（最大耐受量法）选用180～220g SPF级Wistar大鼠20只，雌雄各半，禁食16小时后进行试验，以20.0g／kg·BW的剂量，间隔6小时灌胃两次，每次灌胃体积为2.0m1／100g·BW，给药后连续观察14天。记录中毒表现及死亡情况。

1.2.2遗传毒性试验

1.2.2.1Ames试验采用经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA 98、TA 100、TA 102四株试验菌株进行试验。用多氯联苯（PCB）诱导大鼠后制备的肝匀浆（S-9）作为体外代谢活化系统。称取0.5g样品，加无菌蒸馏水至10ml，混匀高压灭菌，混匀后为①液；取①液2ml，加无菌蒸馏水8ml，混匀后为②液；取②液2ml，加无菌蒸馏水8ml，混匀后为③液；取③液2ml，加无菌蒸馏水8ml，混匀后为④液；取④液2ml，加无菌蒸馏水8ml，混匀后为⑤液（受试物浓度分别为50、10、2、0.4、0.08mg／ml）。试验设8、40、200、1000、5000ug／皿5个剂量，同时设空白对照及阳性对照。在顶层琼脂中加入0.1ml试验菌株增菌液、0.1ml受试物和0.5ml S-9混合液（当需要代谢活化时），混匀后倒入底层培养基平板上，每个剂量及对照均做3个平行样。在37℃培养48h，计数每皿回变菌落数。受试物的回变菌落数是空白对照菌落数2倍以上，并具有剂量—反应关系者则定为阳。整套试验在相同条件下重复进行一次。

1.2.2.2小鼠骨髓细胞微核试验采用间隔24h两次经口灌胃法进行试验。用体重25～30g小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。以40mg／kg.BW剂量的环磷酰胺为阳性对照（称取环磷酰胺40.0mg，加无菌生理盐水至10ml，经腹腔注射给药，给药量为0.1ml／10g. BW）。样品剂量分别为2.5、5.0、10.0g／kg.BW，分别称取样品2.50g、5.00g、10.00g，加蒸馏水至20ml，充分混匀，浓度分别为0.125、0.250、0.500g／ml，灌胃体积为0.2ml／10g.BW，对照组给等量蒸馏水。末次给样品后6h，颈椎脱臼处死动物，取胸骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染色。在光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞（PCE），微核发生率以含微核的PCE千分率计，并进行统计处理，统计方法用泊松分布，另外计算嗜多染红细胞与成熟红细胞的比例（PCE／NCE）。

1.2.2.3小鼠睾丸染色体畸变试验用体重25～30克的性成熟雄性小鼠25只，随机分为5组，每组5只。以2.0mg／kg·BW剂量的丝裂霉素为阳性对照（称取丝裂霉素4.0mg，加无菌生理盐水至20ml，腹腔注射，给药量为0.1ml／10g·BW），每天一次，连续两天。样品剂量分别为2.5、5.0、10.0g／kg·BW，分别称取样品5.00g、10.00g、20.00g，加蒸馏水至40ml，充分混匀，浓度分别为0.125、0.250、0.500g／ml，灌胃量为0.2ml／10g·BW，每日灌胃一次，连续5天，对照组给等量蒸馏水。于首次给予受试物后的第十三天，5组同时腹腔注射秋水仙素一次（6mg／kg.BW），6h后处死动物，取双侧睾丸制片，Giemsa染色，每组分析5只动物的染色体，每只动物分析100个中期相细胞，计算睾丸染色体畸变发生率（以百分率计），用SPSS 11.5 for Windows中检验进行统计处理。

2 结果

2.1急性毒性试验由表1、2可见，大小鼠分别以20.0g／kg·BW的剂量灌胃，两种性别的大、小鼠，观察14天，实验期间未见明显的中毒表现，动物无死亡，尸检中各主要脏器亦未见异常。受试物对两种性别的大、小鼠的经口急性毒性（MTD）均大于20.0g／kg.BW，根据急性毒性分级标准，东方药林牌欣月片（女士）属无毒级。

表1 东方药林牌欣月片（女士）对小鼠的急性毒性

表2 东方药林牌欣月片（女士）对大鼠的急性毒性

2.2遗传毒性试验

2.2.1Ames试验由表3、4可见，样品各剂量组回变菌落数均未超过空白对照菌落数的2倍，亦无剂量—反应关系。对鼠伤寒沙门氏菌TA 97、TA98、TA 100、TA102四株试验菌株，各剂量组在加与不加S9时，回变菌落数均未超过空白对照菌落数的2倍，亦无剂量-反应关系，试验结果为阴性。

表3 东方药林辉欣月片（女士）Ames试验结果（第一次实验）（x±s）

表4 东方药林牌欣月片（女士）Ames试验结果（重复实验）（x±s）

2.2.2小鼠骨髓细胞微核试验由表5可见，样品各剂量组微核率与阴性对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05），而环磷酰胺组与阴性对照组比较差异有统计学差异（P＜0.05），表明东方药林牌欣月片（女士）对小鼠骨髓细胞微核试验结果为阴性。

表5 东方药林牌欣月片（女士）对小鼠骨髓微核发生率的影响

2.2.3小鼠睾丸染色体畸变试验可见，样品各剂量组小鼠睾丸染色体畸变发生率与阴性对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05），而丝裂霉素阳性对照组与阴性对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。因此，未见东方药林牌欣月片（女士）对小鼠睾丸染色体畸变产生影响。

表6 东方药林牌欣月片（女士）对小鼠睾丸染色体畸变发生率的影响

3讨论

东方药林牌欣月片（女士），其主要成分淫羊藿、骨碎补、阿胶、大豆异黄酮等，有研究表明，骨碎补总黄酮具有较强的抗膝骨关节炎的作用［2］，对老年性成骨疏松也有治疗作用［3］。淫羊藿具有补肾阳，强筋骨等作用，大豆异黄酮又称植物雌激素，能够弥补30岁以后女性雌性激素分泌不足的缺陷，改善皮肤水分及弹性状况，缓解更年期综合症和改善骨质疏松。因而，东方药林牌欣月片（女士）能够很好地达到增加女性骨密度的作用。本实验研究结果表明，东方药林牌欣月片（女士）对两种性别的大、小鼠经口急性毒性LD50均大于20.0g／kg·BW，三项遗传毒性结果均为阴性，说明东方药林牌欣月片（女士）是一种服用安全，保健功能确切的保健食品。

［1］GB15193-2003.食品安全性毒理学评价程序和方法［J］.2003：17-55.

［2］龚晓健，李运曼，安佰平，等.骨碎补总黄酮的抗膝骨关节炎作用［J］.中国天然药物，2006，4（3）：215-218.

［3］眭承志.骨碎朴总黄酮对老年性骨质琉松症成骨作用影响的临床与实验研究［D］.福州：福建中医学院，2008.

St u d y on a c u t e t o xicit y t h r o u gh mo u t h an d g en e tic t o xicit y o f Xin yue table t

Qian Xingw en1Lei Xiaolin1Peng Ju2Li Junkui2Liu Wei11
（1 Oriental Pharmaceutical Co.，Ltd.Guangzhou，510515，China；2 Southern Medical University，Guangzhou，510515，China）

ObjectiveTo evaluate the toxicological safety of Xinyue tablet in order to provide some scientific data for its application.Methodsccording to GB15193-2003‘Food safety toxicology evaluation procedures and methods'，the following experiments of acute toxicity test through mouth in mice，experiments of ames，experiments of micronuclei of bone marrow cell and testicle chromosome aberration in mice.ResultsLD50was more than 20.0g／kg BW for Xinyue tablet，three genetic toxicity test results were negative.ConclusionsXinyue tablet for acute oral toxicity in mice is nontoxic；no genetic toxicity.

Xinyue tablet；Acute toxicity test；Genetic toxicity

10.3969／j.issn.1672-2779.2014.04.093

：1672-2779（2014）-04-0148-03

苏 玲 本文校对：刘 仪

2013-11-08）

*通讯作者