不同浓度乙醇对活体家兔腹腔神经丛毁损的组织学观察

目的以不同浓度乙醇对活体家兔进行腹腔神经丛阻滞毁损，并进行组织病理学观察，为临床治疗提供实验依据。方法成年新西兰大白兔48只，按随机化原则分为手术对照组、50%乙醇组、75%乙醇组和100%乙醇组，各12只。手术对照组给予生理盐水，乙醇各浓度组任选6只共18只在给药1周后活检，其余18只在给药3个月后活检。摘取实验侧腹腔神经节和腹腔神经丛标本，采用Thionine硫堇染色法显示尼氏体，HPIAS-1000病理图文报告系统对尼氏体定量检测平均光密度值。结果1周后，对照组神经节中细胞清晰可见，核大而圆。50%乙醇组，少量神经元核仁消失，少量髓鞘消失。75%乙醇组和100%乙醇组大部分神经元核仁消失，而胞质内尼氏小体变细，髓鞘大部分消失。3个月后，不同浓度乙醇组神经节镜下观结果与1周相似。图像分析显示，与手术对照组比较，乙醇组尼氏体染色平均光密度明显降低（P＜0.01）；与50%乙醇组比较，75%乙醇组、100%乙醇组1周和3个月尼氏体平均光密度值均明显下降（P＜0.05）；75%乙醇组与100%乙醇组间差异无统计学意义（P＞0.05）。各浓度乙醇组1周与3个月比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结论50%、75%和100%乙醇对兔腹腔神经丛均有不同程度的变性作用，75%乙醇是更为适宜的浓度。

家兔；乙醇；腹腔神经丛；毁损；组织学观察

经皮腹腔神经丛乙醇阻滞（neurolytie celiacplexus block with alcohol，NCPBA）对减轻或消除上腹部疼痛的有效性已被很多国内、外学者所证实，近期疗效显著，但中远期疗效却不尽相同，对阻滞所用的乙醇浓度也有不同的看法[1-2]。本研究将活体家兔以不同浓度乙醇进行腹腔神经丛阻滞毁损，并进行组织病理学观察，为临床治疗提供实验依据。

1 实验材料

1.1动 物 6月龄健康成年雄性新西兰大白兔48只，体质量2.0～2.5kg，由浙江中医药大学动物实验中心提供，动物合格证号：SXCK（浙）2009-0042。

1.2实验药品 无水乙醇由沈阳试剂一厂提供，75%乙醇和50%乙醇在每次使用前由无水乙醇加无菌蒸馏水后，用乙醇计精确测定其浓度。

2 实验方法

2.1分 组 随机分为手术对照组、50%乙醇组、75%乙醇组和100%乙醇组，各12只，其中乙醇治疗后各组任选6只共18只在注药后1周活检，另各组共18只在注药后3个月活检。

2.2造 模 氯胺酮静脉麻醉后，仰卧位固定于手术台上，腹部脱毛、消毒，沿腹部行正中切口，逐层暴露直至腹膜后，找到腹腔神经丛（腹主动脉腹腔干分叉处），固定硬膜外导管开口于腹腔神经丛中心，用小儿连续硬膜外穿刺针明视下经背部将硬膜外导管引出，逐层缝合腹壁。手术完毕，兔清醒后笼养，青霉素40万U，1次/12h，肌肉注射。待伤口Ⅰ期愈合后，视造模成功，各乙醇组按1.8mL/kg注入乙醇（注入乙醇根据人体腹腔神经丛酒精毁损剂量一般为0.5～0.6mL/kg，人和兔等效剂量换算系数1:3，活体兔腹腔神经丛酒精毁损剂量定为1.8mL/kg），注药后1周和3个月。按上述程序剖腹，取出实验侧腹腔神经节和腹腔神经丛标本。对照组接受生理盐水，按同样方法取出标本。

2.3标本制备 常规脱水、透明、浸蜡、包埋及切片（厚约8～10μm）。

2.4尼氏小体显示 采用Thionine硫堇染色法。每组切片10张，按下列程序进行染色：蒸馏水洗、用2%硫堇水溶液置于50～60℃温箱内浸染30～60min、蒸馏水稍洗、用95%乙醇液迅速分化、无水乙醇脱水、二甲苯透明、中性树胶封片,光学显微镜观察结果显示尼氏小体呈深蓝色块状或颗粒状，细胞核呈淡蓝色。

2.5图像分析 采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告系统对尼氏体染色结果进行定量检测，放大400倍，检测正常手术对照组、不同浓度乙醇组在单位视野中尼氏小体染色的平均光密度，每例标本取3张切片，每张切片随机选取5个倍镜视野（× 400），测定每个视野下尼氏体染色平均光密度。以每例标本15个视野的平均光密度的平均值作为该例的测量值。

2.6统计学方法 应用SPSS12.0软件，采用t检验以P＜0.05为差异有统计学意义。

3 实验结果

光镜观察，1周后，对照组神经节中的细胞清晰可见，核大而圆。核仁明显，胞质中可见粗大尼氏小体，有髓神经纤维清晰可见（插页图1）。乙醇组神经节中部分或大部分细胞皱缩，细胞核缩小，染色加深，偏位，同时有较大空泡形成。50%乙醇组见小量神经元的核仁消失，小量髓鞘消失。75%乙醇组、100%乙醇组大部分神经元核仁消失，而胞质内尼氏小体变细，髓鞘大部分消失（插页图2～4）。3个月后，三组不同浓度乙醇组神经节镜下观与1周相似（插页图5～7）。

图像分析结果显示，与手术对照组比较，乙醇组尼氏体染色平均光密度明显降低，差异有统计学意义（P＜0.01）；与50%乙醇组比较，75%乙醇组、100%乙醇组1周、3个月尼氏小体光密度值明显降低，差异有统计学意义（P均＜0.05）；75%乙醇组与100%乙醇组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。各浓度乙醇组组内1周和3个月比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1～2。

表1 1周后对照组与乙醇组尼氏小体光密度比较（）

表1 1周后对照组与乙醇组尼氏小体光密度比较（）

注：与对照组比较，*P＜0.01

表2 各浓度乙醇组1周、3个月尼氏小体光密度比较（）

表2 各浓度乙醇组1周、3个月尼氏小体光密度比较（）

注：与50%乙醇组比较，*P＜0.05

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4 讨 论

尼氏小体是神经元内一种特殊的结构[3]，由大量平行排列的粗面内质网和杂夹其的核糖核蛋白体构成。尼氏体的主要功能是合成蛋白质，供给神经细胞的活动，神经细胞功能旺盛时，胞体要有相应的体积进行必要的代谢活动，其所需蛋白质越多，尼氏体也越粗大，当神经元受损害时，尼氏小体即渐渐分解以至消散。因此，尼氏小体结构的变化可作为神经元受损的标志。本实验通过尼氏小体染色方法和检测尼氏小体平均光密度来观察尼氏小体的结构变化，以进一步研究乙醇对腹腔神经丛的破坏程度。

乙醇组尼氏体平均光密度较手术对照组明显降低（P＜0.05），说明乙醇组尼氏体平均光密度的降低是非手术损伤破坏引起。本实验结果在腹腔神经丛毁损后的第1周、3个月，50%乙醇组与75%乙醇组、100%乙醇组光镜下观有较大差别。郑汉光等[4]在离体试验光镜下中观察到，浸于50%、75%、100%三种不同浓度乙醇1周后组织学变化相似，均见核仁消失，尼氏小体均变细，神经纤维髓鞘全部消失，说明乙醇浓度与最终组织学变化关系不大。这两个实验结果不尽相同，我们认为活体动物的腹腔与离体动物实验环境不同，乙醇本身具有高挥发性，腹腔神经丛周围有大血管，并且乙醇在注入后被体液所稀释，浓度和容量可能会降低，并不能完全做到饱和浸润。据矢吹俊一等报道[5]50%乙醇是能够破坏腹腔神经丛的最低浓度，我们观察到75%乙醇组和100%乙醇组尼氏体平均光密度值较50%乙醇组明显下降（P＜0.05），而75%乙醇组与100%乙醇组之间尼氏体平均光密度值差异无统计学意义（P＞0.05），提示75%乙醇已能达到无水乙醇的毁损效果，50%乙醇还有所欠缺。可能的机制是[6-7]：50%乙醇虽然渗透良好，但其脱水和变性作用弱，毁损不够彻底；理论上乙醇的浓度越高，毁损作用越强，但无水乙醇因其高浓度可使细胞膜蛋白质凝固，妨碍乙醇的内向渗透，而75%乙醇不仅渗透性良好，而且对神经细胞的脱水及变性作用也强，因而两者毁损效果相似。各浓度乙醇组组内1周和3个月尼氏体染色平均光密度比较，差异无统计学意义（P＞0.05），说明不同浓度乙醇浓度对神经细胞造成的破坏程度可能不同，但一旦破坏是不可逆的，由此可见，临床上在腹腔神经丛毁损一段时间后又出现疼痛复发，并非是神经细胞修复，功能恢复所致。可能有以下原因[8]：①随着病情的进一步恶化，晚期肿瘤除侵犯腹腔神经丛外，也侵犯其他神经传导途径。②穿刺位置不精确准确、腹腔神经丛所在区域被肿瘤绕或淋巴结占据，乙醇的弥散不良，毁损不够彻底，未遭到毁损的腹腔神经功能代偿疼痛可复发。

通过本研究我们认为50%乙醇、75%乙醇和100%乙醇对兔腹腔神经丛均有不同程度的变性作用，但以75%乙醇浓度适宜，且远期效果明确。75%乙醇能在确保阻滞疗效前提下，可最大限度减少无水乙醇带来的不良反应，对临床有一定的指导意义。

［1］Wong Gy，Schroeder DR，Carns PE，et al.Effect of neurolytic celiac piexus block on pain relief，quality of life，and survival in patients with unresectablie pancreatic cancer：a randomized controlled［J］.JAMA，2004，291（9）：1092-1099.

［2］Noble M，Cress FG.Techniques and result of neurolysis for chronic pancreatitis and pancreatic cancer pain［J］.Curr Gastroenterol Rep，2006，8（2）：99-103.

［3］韩济生，关新民.医用神经生物学［M］.武汉：武汉出版社，1996：3.

［4］郑汉光，汪国香，陶凡.腹腔神经节（丛）乙醇阻滞治疗癌性腹痛的临床和实验动物组织学的初步观察［J］.河北医学，1999，5（1）：12-15.

［5］矢吹俊一，小川筋郎，金山利吉，等.腹腔神经阻滞效果与注入乙醇量及浓度关系［J］.麻醉，1982，33：1077.

［6］李昌熙，方华，严相默，等.乙醇腹腔神经丛阻滞治疗上腹部癌痛的临床观察［J］.临床麻醉学杂志，2006，22（9）：676 680.

［7］Choy YC，Purenesvan S，Samad S.Chronic pain managementupper visceral malignancies coeliac plexus block with CT scanning a case report［J］.Med J Mtalaysna，1998，53（3）：277-279.

［8］程英，刘瑞.CT引导下腹腔神经丛阻滞术的方法及应用进展［J］.汕头大学医学院学报，2001，14（3）：222-224.

不同浓度乙醇对活体家兔腹腔神经丛毁损的组织学观察

王 振 曲丕盛 陶 凡 郑汉光 杭州市红十字会医院麻醉疼痛科 杭州310003

Histological Changes of Neurolytie Celiac-Plexus Block with Various Concentrations of Alcohol in Rabbits

WANG Zhen，QU Pisheng，TAO Fan，ZHENG Hanguang. Department of Anesthesiology,Zhejiang Hangzhou Red Cross Hospital,Hangzhou(310003),China

ObjectiveTo observe the relationship between histological changes of neurolytie celiac-plexus block and concentrations of alcohol，in order to provide scientific evidence for clinical application.MethodsForty-eight New Zealand rabbits were randomly divided into 4 groups：control group，50%alcohol group，75%alcohol group，and 100%alcohol group（n=12）.Control group was given saline.Eighteen rabbits from alcohol groups（n=6 from each group）were sacrificed one week after administration of alcohol and the rest ones were sacrificed at three month for histological examination.The Nissl body in celiac plexus blocked with alcohol or from the other side without treatment were stained with Thionine.HPIAS-1000 system was used to detect OD values of the Nissl body.ResultsAfter one week，no abnormality in gangliocytes in tissue sections from control groups was seen；few disappearance of nucleus in neurons was seen in 50%alcohol group；and the majority of nucleus in neurons disappeared in 75%alcohol group and 100%alcohol group，with smaller Nissl body and demyelination.After three months，the histological changes of alcohol groups were similar to those at one week.The OD values of the Nissl body in alcohol groups were lower than that in control group（P＜0.01）；the OD values of the Nissl body in 75%alcohol group and 100% alcohol group were lower than that in 50%alcohol group at one week and three months（P＜0.05）.No significant difference in OD values of the Nissl body was noted between 75%alcohol group and 100%alcohol group（P＞0.05）.No significant difference was found between one week and three months in each group（P＞0.05）.ConclusionThe histological changes of neurolytie celiac-plexus block was related to the concentration of alcohol.75%alcohol may be the suitable one for clinical use.

rabbits；alcohol；celiac plexus；block；histological observation

杭州市医药卫生科技计划项目（No.2007B0042）

2013-12-09

2014-02-17