左右利手捻转补泻手法对血虚证模型大鼠RBC、Hb、IRF的影响

肖敏佳 褚亚宇 柳 杨 刘清国 王朝阳

（北京中医药大学针灸学院，北京，100029）

针灸经络

左右利手捻转补泻手法对血虚证模型大鼠RBC、Hb、IRF的影响

肖敏佳 褚亚宇 柳 杨 刘清国 王朝阳

（北京中医药大学针灸学院，北京，100029）

目的：探讨捻转补泻手法与具体捻转方向的关系。方法：将80只Wistar大鼠随机分为7组：空白组（A组）、模型组（B组）、留针组（C组）、右手前捻组（D组）、右手后捻组（E组）、左手前捻组（F组）、左手后捻组（G组）。采用放血加限食法制备血虚证模型。隔日针刺1次，共10次。检测大鼠红细胞计数（RBC）、血红蛋白（Hb）、幼稚网织红细胞比率（IRF）。结果：治疗前1 d，与A组相比，其余各组RBC、Hb显著降低（P＜0.01），IRF显著升高（P＜0.01）；治疗第7 d，各组RBC、Hb比较，B组含量最低（P＜0.05），C、D、F 3组差异不明显（P＞0.05），A、E、G 3组差异无统计学意义（P＞0.05），但前3组含量高于后3组（P＜0.05），IRF组间差异不明显（P＞0.05）；治疗第14、21 d，各治疗组RBC、Hb、IRF组间差异均不明显（P＞0.05）。结论：捻转补泻手法与左、右捻转方向无关，无论何手持针，均拇指前捻用力为“补”，拇指后捻用力为“泻”。

捻转补泻手法；捻转方向；血虚证

捻转补泻手法是最基本、最常用的针刺补泻手法之一，然而也是存在疑问最多的一个手法。其构成的基本要素主要包括捻转方向、力度、幅度及频率[1-3]。本研究从捻转方向入手，通过观察左右利手不同针刺捻转方向对血虚证大鼠RBC、Hb、IRF的影响是否有差异，探讨捻转补泻手法与具体捻转方向的关系，以期为捻转补泻的标准化提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料 1）实验动物：健康雄性SPF级Wistar大鼠80只，体重180～200 g，购于北京维通利华实验动物中心（许可证号：SCXK（京）2012-0001），饲养于北京中医药大学针灸学院动物实验室。2）主要仪器与试剂：汉医牌毫针（天津华鸿医材有限公司）、1N圆筒测力计（余姚市低塘街道辉旺塑料模具厂）、电子称（北京赛多利斯仪器系统有限公司）、XE-5000型全自动血细胞分析仪（日本Sysmex公司）、机械闹钟（温州市环星计时器有限公司）、德国Greiner非可替真空采血管。

1.2 动物分组 随机分为7组：空白组（A组）、模型组（B组）、留针组（C组）、右手前捻组（D组）、右手后捻组（E组）、左手前捻组（F组）、左手后捻组（G组）。前2组每组10只，后5组统称为治疗组，每组12只。

1.3 血虚证动物模型的制备及处理方法 1）动物模型制备：除A组外，其余各组均采用放血加限食疗法[4]制备血虚型大鼠模型。以75%乙醇擦拭鼠尾，再浸入温水中，使尾部血管充血后，切断距尾尖2～3 mm的长度，每只每次放血量1.5 m L，隔日1次，共计5次。自造模之日起改变正常喂养规律，半量与足量饮食隔日交替给予。制成的血虚证大鼠外观精神萎靡、毛枯蓬松、唇色淡白、食欲下降、体重减轻，外周血红细胞计数及血红蛋白含量降低达20%以上。2）各组大鼠的处理方法：穴位定位按华兴邦等[5]制定的《大鼠穴位图谱的研制》，选取“足三里”。于造模完成后第2天开始针刺，隔日1次，共10次。A组：不予任何处理，正常同步饲养。B组：造模，不针刺治疗，与各针刺组同步捆绑固定，20 min/次。C组：造模，针刺大鼠双侧“足三里”，刺入5 mm，静留针20 min。D组：造模，针刺大鼠双侧“足三里”，刺入5 mm，右利手每侧行针1 min，行针时右拇指前捻用力重（力度约0.08N，弹簧测力计测得），还原力轻，捻转幅度360度/次（针体下固定纸条，控制捻转幅度），捻转频率60次/min（捻转频率与机械闹钟声音同步，闹钟每秒响4次，规定前捻或后捻用力重耗时0.25 s，停顿用时0.5 s，还原时0.25 s），剩余时间留针，共20 min。E组、F组、G组：E组右利手拇指后捻用力重，还原力轻；F组左利手拇指前捻用力重，还原力轻；G组左利手拇指后捻用力重，还原力轻。其余操作方法同D组（两名操作者分别为针灸专业同等资历左利手、右利手学生）。

1.4 指标检测 分别于治疗前1 d、治疗第7 d、14 d、21 d，检测各组大鼠血液中RBC、Hb、IRF值。用剪尾采血法[6]，固定大鼠并露出鼠尾，将尾部毛剪去后消毒，然后浸在温水中5 min，使尾部血管充盈，再将尾擦干，用剪刀剪去尾尖0.1～0.2cm，让血液自由滴入0.5 mL采血管中，每只取血0.2 mL，轻摇以确保无凝血及溶血，采血结束后，对伤口消毒并压迫止血。后3次采血，只需将剪刀紧紧贴近创口轻轻一剪，便可继续收集血样。每次采血结束后，4 h内送检（XE-5000全自动血细胞分析仪检测）。

2 结果

2.1 不同时段各组大鼠RBC、Hb值的比较（见表1、表2） 表1、表2示，治疗前1 d，各造模组RBC、Hb值均显著低于A组（P＜0.01），造模成功；治疗第7 d，B组RBC、Hb值低于其余各组（P＜0.05），C、D、F组3组RBC、Hb差异不明显（P＞0.05），A、E、G3组RBC、Hb差异无统计学意义（P＞0.05），但前3组RBC、Hb值高于后3组（P＜0.05）；治疗第14 d，各造模组RBC、Hb值均高于A组（P＜0.05），但组间差异不明显（P＞0.05）；治疗第21 d，各组RBC、Hb差异均无统计学意义（P＞0.05）。

表1 针刺治疗前后各组大鼠RBC值的比较（±s，1012/L）

表1 针刺治疗前后各组大鼠RBC值的比较（±s，1012/L）

注：与A组相比，▲P＜0.01，▼P＜0.05；与B组相比，◆P＜0.05；与C组相比，■P＜0.05；与D组相比，★P＜0.05；与E组相比，●P＜0.05。

组别例数治疗前1 d第7 d第14 d第21 d A组10 7.62±0.35 8.93±0.52 7.93±0.26 8.36±0.49 8.73±0.33 B组10 5.84±0.20▲7.05±0.34▼8.95±0.28▼9.00±0.48 C组12 5.71±0.30▲8.47±0.41▼◆9.22±0.44▼9.34±0.48 D组12 5.88±0.44▲8.78±0.30▼◆9.46±0.62▼9.34±0.70 E组12 5.90±0.52▲8.07±0.37◆■★9.10±0.52▼9.10±0.76 F组12 5.80±0.36▲8.59±0.42▼◆●9.16±0.43▼9.30±0.43 G组12 5.84±0.57▲7.71±0.60◆■★8.98±0.50▼

表2 针刺治疗前后各组大鼠Hb值的比较（±s，g/L）

表2 针刺治疗前后各组大鼠Hb值的比较（±s，g/L）

注：与A组相比，▲P＜0.01，▼P＜0.05；与B组相比，◆P＜0.05；与C组相比，■P＜0.05；与D组相比，★P＜0.05；与E组相比，●P＜0.05。

组别例数治疗前1 d第7 d第14 d第21 d A组10 162.89±6.03 166.33±5.48 170.84±5.47 175. 178.89±8.28 78±7.51 B组10 125.33±4.42▲156.11±4.54▼180.33±4.27▼179.67±7.40 C组12 123.67±4.77▲176.22±7.63▼◆184.11±5.69▼182.78±6.76 D组12 123.44±6.02▲178.67±6.69▼◆182.11±7.49▼183.56±10.95 E组12 122.78±6.04▲166.56±7.11◆■★179.56±5.85▼176.56±8.09 F组12 125.00±5.63▲178.44±6.67▼◆●183.00±9.27▼186.00±6.18 G组12 126.78±5.56▲168.56±6.80◆■★178.11±6.64▼

2.2 不同时段各组大鼠IRF值的比较（见表3） 表3示，治疗前，各造模组IRF值均显著高于A组（P＜0.01）；治疗第7 d，各造模组IRF值明显低于A组（P＜0.05），但组间差异不明显（P＞0.05）；治疗第14 d、21d，各组差异无统计学意义（P＞0.05）。

表3 不同时间段大鼠IRF值的比较（±s，%）

表3 不同时间段大鼠IRF值的比较（±s，%）

注：与A组相比，▲P＜0.01，▼P＜0.05。

组别例数治疗前1d第7d第14d第21d A组1030.48±2.48 27.66±3.3924.90±5.0621.71±3.34 B组1057.51±3.32▲20.64±4.29▼21.89±3.9619.34±4.72 C组1255.21±3.28▲18.22±3.87▼19.48±4.5117.77±4.91 D组1255.92±2.79▲16.51±2.82▼18.54±3.5515.50±6.18 E组1254.68±3.22▲19.14±3.33▼22.40±3.8118.28±5.74 F组1256.30±2.78▲16.88±2.76▼19.44±4.4418.16±5.34 G组1257.42±3.85▲17.63±4.39▼21.97±5.6720.13±5.19

3 讨论

捻转补泻手法始见于《黄帝内经》，但未明确其具体操作。金·窦汉卿在《标幽赋》中指出：“迎夺右而泻凉，随济左而补暖”，首先提出了以转针的左右方向来区别补泻。明·杨继洲《针灸大成》载：“补针左转大指努出，泻针右转大指收入。”认为“左转从阳，能行诸阳；右转从阴，能行诸阴”是其作用原理。现代针灸教材中，亦将左右转针作为针刺捻转方向的一个标志。临床上，对右利手操作者而言，拇指向前乃左转，拇指向后即右转，若换左利手操作，当如何区分补泻？

在本研究中，我们固定了捻转力度、捻转幅度以及捻转频率，分组采用不同的捻转方向，即通过针刺大鼠“足三里”穴，观察左右利手不同捻转方向产生的补泻效应是否一致。同时，根据血细胞的发生原理[7]，选择了与贫血密切相关的实验指标：RBC、Hb、IRF。贫血的诊断及鉴别诊断主要依靠检查外周血的血红蛋白（Hb）、红细胞数（RBC）及反映红系造血系统功能的网织红细胞数（RET），其中幼稚网织红细胞比率（IRF）的动态观察比网织红细胞其他指标及WBC、RBC、PLT都更为敏感[8]。

本实验观察到：对于失血所致的血虚证，外周血中RBC、Hb值在造模后明显降低，IRF值显著升高，说明造模成功。在血虚证治疗第7d，不同处理组之间RBC、Hb值有明显区别：空白组及各治疗组RBC、Hb含量均明显高于模型组，其中空白组与右手后捻组、左手后捻组之间差异不明显，留针组与右手前捻组、左手前捻组之间差异不明显，但前3组RBC、Hb含量明显低于后3组。说明无论静留针还是行针补泻，对于虚证，针刺均有良好的恢复作用；行针时，右手前捻效应与左手前捻效应一致，右手后捻效应与左手后捻效应无异，但前捻效应优于后捻效应。在血虚证治疗第14 d及21d，各治疗组RBC、Hb差异均无统计学意义，可能由于机体进入自我恢复阶段，针灸在此时作用不明显。此外，治疗第14d及21d，IRF值各组差异均不明显，说明因失血所致血虚证，仅对机体外周血循环有影响，对骨髓造血功能影响不明显。

综上所述，捻转补泻手法与左、右捻针方向无关，无论何手持针，均拇指前捻用力为“补”，拇指后捻用力为“泻”，其作用机制尚需进一步研究。

[1]杨兆民.刺法灸法学[M].上海：上海科学技术出版社，1996：29-30.

[2]陆寿康.刺法灸法学[M].北京：中国中医药出版社，2003：75-76.

[3]王富春.刺法灸法学[M].上海：上海科学技术出版社，2009：26.

[4]苗明三，方晓艳，孙艳红.血虚动物模型复制的思考[J].光明中医，2003，18（3）：8-9.

[5]华兴邦，周浩良.大鼠穴位图谱的研制[J].实验动物与动物实验，1991（1）：1-5.

[6]赵巧辉，刘孟洲.实验动物采血方法[J].江西畜牧兽医杂志，2006，（4）：4-6.

[7]成令忠.组织学[M].北京：人民卫生出版社，1994：115-117.

[8]陈梅，方伟祯，丁鹤林，等.网织红细胞六项指标的正常参考值调查[J].岭南急诊医学杂志，2007，12（1）：51-53.

（2013-12-26收稿 责任编辑：曹柏）

Effects of Left-Handed and Right-Handed Twisting-Twirling Reinforcing-Reducing Manipulations of Acupuncture on the RBC、Hb、IRF Performances of Rats with Blood-Deficiency Syndrome

Xiao Minjia，Chu Yayu，Liu Yang，Liu Qingguo，Wang Zhaoyang
（School of Acupuncture and Moxibustion，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China）

Objective：To explore the relations between the twisting-twirling reinforcing-reducing manipulation of acupuncture and the twisting-twirling direction.Methods：Eighty Wistar rats were randomly divided into7 groups，including a blank group（group A），model group（group B），acupuncture group（group C），right-hand-forward twisting group（group D），right-hand-backward twisting group（group E），left-hand-forward twisting group（group F）and left-hand-backward twisting group（group G）.All the rats were made into blood-deficiency models by tail-bleeding and food restriction.Acupuncture was given every other day with 10 sessions totally，and the levels of red blood cell（RBC），hemoglobin（Hb），immature reticulocyte fraction（IRF）weremeasured at different time periods.Results：One day before the treatment，the RBC and Hb of all the groups，except the blank group（A group），decreased significantly（P＜0.01），while the IRF increased obviously（P＜0.01）.On the7th day of the treatment，the RBC and Hb of each group weremeasured and compared respectively，and the results were as follows：（a）group Bwas the lowest（P＜0.05）；（b）no statistical differences（P＞0.05）were found among the group C，group D and group F；（c）no statistical differences（P＞0.05）were observed among the group A，group E and group G；（d）The RBC and Hb of the first three groups were obviously higher than those of the latter three groups（P＜0.05）.Besides no significant IRF differences（P＞0.05）were found among all the treatment groups.No statistical differences（P＞0.05）were observed among all the groups on the 14th and 21th day of treatments.Conclusion：There exists no essential relation between the twisting-twirling reinforcing-reducing manipulation and the right or left twisting-twirling direction.Moreover，thumb forward twisting is“reinforcing method”，while thumb backward twisting is“reducing method”，no matter using the right or the left hand.

Twisting-twirling reinforcing-reducing manipulation；Twisting-twirling direction；Blood deficiency syndrome

R-332；R245.31+1

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2014.04.026

国家自然基金课题资助项目（编号：81072861）

肖敏佳（1987—），女，2011级针灸专业硕士研究生

王朝阳（1971—），男，副教授，研究方向：针灸作用机制与临床研究，E-mail：xlywzy＠163.com